Гибридизация ДНК

---

Гибридизация ДНК, гибридизация нуклеиновых кислот — соединение in vitro комплементарных одноцепочечных нуклеиновых кислот в одну молекулу. При полной комплементарности объединение происходит легко и быстро, а в случае частичной некомплементарности слияние цепочек замедляется, что позволяет оценить степень комплементарности. Возможна гибридизация ДНК-ДНК и ДНК-РНК.

Анализ скорости отжига (= гибридизации) одноцепочечных ДНК позволяет оценивать сходства и различия в последовательностях ДНК между видами или особями одного вида.

Вторичная структура ДНК играет важную роль в биологии, генетической диагностике и других методах молекулярной биологии и нанотехнологии. Поэтому точное определение температуры плавления молекул ДНК или РНК играет самую главную роль во всех молекулярно-биологических методах, например, при подборе проб или олигонуклеотидов для микрочипов или при подборе праймеров для ПЦР. Существует несколько простых формул вычисления температуры плавления для коротких олигонуклеотидов. Грубое вычисление температуры плавления (T_m) короткого олигонуклеотида (<20 нуклеотидов) проводят по прямому подсчету количества нуклеотидов (G+C — сумма всех гуанинов и цитозинов, L — длина олигонуклеотида):

${\displaystyle T_{m}=2(L+G+C)}$,^[1]

Усредненная формула подсчета T_m для короткого олигонуклеотида (и для длинных фрагментов ДНК) с учётом концентрации ионов K⁺ и DMSO:

${\displaystyle T_{m}=77.1+11.7\lg[K^{+}]+{\frac {41(G+C)-528}{L}}-0.75[\%DMSO]}$,^[2]

---