Женская Лига чемпионов УЕФА 2009–10 была первым турниром под новым брендом и девятым турниром УЕФА для женских футбольных клубов-чемпионов.
Впервые в этом сезоне восемь лучших лиг УЕФА получили по два стартовых места. Германия даже получила 3 заявки, так как FCR 2001 Duisburg не попал в топ-2 немецкой лиги, но получил участие в качестве обладателя титула.
Жеребьевка состоялась 24 июня 2009 года. [25] Команды, выделенные жирным шрифтом, принимали мини-лигу. Победители каждой группы прошли в следующий раунд.
Из 16 сеяных команд было выбрано по одному сопернику из 16 незасеянных команд. Команды одной ассоциации не могли сыграть друг против друга. Сеяная команда провела ответный матч дома. [26] Матчи были сыграны 30 сентября и 7 октября.
Начиная с этого раунда посева не было, и клубы из одной ассоциации могли сыграть вничью друг с другом. Жеребьевка этого раунда проводилась сразу после жеребьевки 32-го тура. Поэтому вместо жеребьевки конкретных команд были проведены жеребьевки, в которых победители играли друг с другом в этом раунде. [26] Матчи проводились 4–5 и 11–12 ноября.