Адгезивные клеточные культуры — это тип клеточной культуры , которая требует, чтобы клетки были прикреплены к поверхности, чтобы произошел рост. [1] Большинство клеток, полученных от позвоночных (за исключением гемопоэтических клеток ), можно культивировать, и для них требуется двумерный монослой, который облегчает адгезию и распространение клеток. [2] Образцы клеток могут быть взяты из тканевых эксплантов или клеточных суспензионных культур. Прикрепленные клеточные культуры с избытком питательной среды , содержащей питательные вещества , будут продолжать расти, пока не покроют доступную площадь поверхности. [3] Протеазы, такие как трипсин, чаще всего используются для разрушения адгезии клеток к колбе. Альтернативно, можно использовать скребки для механического разрушения адгезии, если введение протеаз может повредить клеточные культуры. [4] [5] В отличие от суспензионных культур , другого основного типа клеточных культур, прикрепившиеся культуры требуют регулярного пассирования , выполняемого с использованием механической или ферментативной диссоциации. [1] Культуру можно визуализировать с помощью инвертированного микроскопа, однако рост прикрепившихся культур зависит от доступной площади поверхности. По этой причине культуры прикрепленных клеток обычно не используются для получения высокого выхода клеток, вместо этого предпочтительным является использование суспензионных культур. [4]
Первичные клетки, используемые для адгезивных культур, должны быть выделены и обработаны от субъекта или могут быть перенесены из ранее существовавших клеточных линий. Прикрепленные клетки сначала необходимо перенести на монослой , прикрепленный к поверхности, и классифицируются по их морфологическим различиям. [6] Фибробластоподобные адгезивные клетки имеют линейную и вытянутую форму и мигрируют при прикреплении к монослою. Эпителиоподобные прикрепляющиеся клетки имеют более широкую и многоугольную форму и не мигрируют при прикреплении к монослою. Как только клетки должным образом изолированы от их источника и перенесены в среду, можно проводитьпассирование клеток.
При пассаже культур прикрепившихся клеток отработанную среду необходимо неоднократно откапывать и заменять свежей средой. [7] Культуральный сосуд также можно многократно постукивать, что следует сочетать с механическими или ферментативными методами для облегчения отделения клеток. Культуральный сосуд также можно центрифугировать, образуя надосадочную жидкость , которую можно экстрагировать с помощью пипетки. Клетки необходимо кормить 2–3 раза в неделю и культивировать при соответствующей температуре, влажности, освещенности и pH, чтобы обеспечить оптимальную пролиферацию клеток .
Хотя приверженные культуры имеют сходство с суспензионными культурами , существует множество ключевых различий в том, как их культивируют и пассируют. Для пассажа прилипшей культуры отработанную среду сначала выкачивают пипеткой из колбы, содержащей клетки в качестве отходного продукта. [8] Клетки прикрепляются к среде, которая не была удалена в культуральном сосуде, после чего для отделения клеток необходима серия промывок и инкубации. На этапе промывки сбалансированный солевой раствор выливают в сторону, противоположную клеточной культуре, а затем культуральный сосуд встряхивают перед тем, как слить сбалансированный солевой раствор. На этапе инкубации к культуральному сосуду применяется тепло, вызывающее денатурацию белка и постепенное отделение клеток от среды. Как и в случае с суспензионными культурами, общее количество клеток можно рассчитать с помощью гемоцитометра и трипанового синего.
Прикрепленные культуры чаще всего используются для цитологии и для сбора клеточных продуктов в небольших масштабах. Поскольку их рост ограничен 2D, трудно использовать прикрепленные культуры для изучения структуры и функции клеток in vivo. [4] Проводятся исследования по выращиванию культур прикрепленных клеток с использованием 3D- микроносителей , чтобы избежать этого ограничения и использовать культуры прикрепленных клеток для тестирования лекарств. [9]