Асимметричная ПЦР - это разновидность ПЦР, используемая для преимущественной амплификации одной цепи исходной ДНК в большей степени, чем другой. [1] Методика находит применение в некоторых типах секвенирования и гибридизационного зондирования, когда требуется наличие только одной из двух комплементарных цепей . [2]
Методология [ править ]
Асимметричная ПЦР отличается от обычной ПЦР чрезмерным количеством праймеров для выбранной цепи. Из-за медленной (арифметической) амплификации на более поздних стадиях реакции (после того, как ограничивающий праймер израсходован) требуются дополнительные циклы ПЦР. [3]
Модификация этого процесса, известная как Linear-After-The-Exponential-PCR (LATE-PCR) , использует ограничивающий праймер с более высокой температурой плавления, чем избыточный праймер, для поддержания эффективности реакции, поскольку предельная концентрация праймера уменьшается в середине реакции. [4]
Приложения [ править ]
Асимметричная ПЦР может использоваться для образования одноцепочечной ДНК из двухцепочечной ДНК, которая затем используется для секвенирования ДНК в методе мутагенеза . [ необходима цитата ] Одноцепочечная ДНК также важна для генерации аптамеров . [1]
Ссылки [ править ]
- ^ a b Читартан, Маримуту; и другие. (Декабрь 2011 г.). «Асимметричная ПЦР для получения хорошего качества оцДНК по отношению к продукции ДНК-аптамера» (PDF) . Songklanakarin J. Sci. Technol . 34 (2): 125–131.
- ^ Вудделл, CI; Берджесс, Р.Р. (1996). «Использование асимметричной ПЦР для создания длинных праймеров и одноцепочечной ДНК для включения сшивающих аналогов в определенные сайты в ДНК-зонде» . Genome Res . 6 (9): 886–892. DOI : 10.1101 / gr.6.9.886 . PMID 8889557 .
- ^ Хейат, Мохаммад; и другие. (14 января 2017 г.). «Основные стратегии оптимизации условий асимметричной ПЦР как надежного метода для создания большого количества аптамеров оцДНК». Биотехнология и прикладная биохимия . 64 (4): 541–548. DOI : 10.1002 / bab.1507 . PMID 27222205 .
- ^ Санчес, Дж. Акилес; и другие. (4 декабря 2003 г.). «Linear-After-The-Exponential (LATE) –PCR: усовершенствованный метод асимметричной ПЦР и его использование в количественном анализе в реальном времени» . Труды Национальной академии наук . 101 (7): 1933–1938. DOI : 10.1073 / pnas.0305476101 . PMC 357030 . PMID 14769930 .
