Фракционирование клеток - это процесс, используемый для разделения клеточных компонентов с сохранением индивидуальных функций каждого компонента. [1] Это метод, который первоначально использовался для демонстрации клеточного местоположения различных биохимических процессов. Другое применение субклеточного фракционирования - обеспечить обогащенный источник белка для дальнейшей очистки и облегчить диагностику различных болезненных состояний. [2]
Гомогенизация [ править ]
Ткани обычно гомогенизируют в изотоническом буферном растворе , чтобы остановить осмотическое повреждение. Механизмы гомогенизации включают измельчение, измельчение, измельчение, изменение давления, осмотический шок , замораживание-оттаивание и ультразвук . Затем образцы хранятся в холоде, чтобы предотвратить повреждение ферментами. Это образование однородной массы клеток (клеточного гомогената или клеточной суспензии ). Он включает измельчение клеток в подходящей среде в присутствии определенных ферментов с правильным pH, ионным составом и температурой. Например, пектиназа, которая переваривает среднюю ламеллу среди растительных клеток.
Фильтрация [ править ]
Этот шаг может не потребоваться в зависимости от источника ячеек . Однако ткань животного может давать соединительную ткань, которую необходимо удалить. Обычно фильтрация достигается путем пропускания через марлю или с помощью всасывающего фильтра и керамического фильтра соответствующего сорта.
Очищение [ править ]
Очистка достигается дифференциальным центрифугированием - последовательное увеличение силы тяжести приводит к последовательному разделению органелл в соответствии с их плотностью .
См. Также [ править ]
Среды для разделения клеток по плотности:
Ссылки [ править ]
- ^ Альбертс, B; Джонсон, А. "Фракционирование клеток" . Молекулярная биология клетки. 4-е издание.
- ^ Нинфа, Александр Дж. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Соединенные Штаты Америки: John Wiley & Sons, INC. Стр. 209. ISBN. 978-0-470-08766-4.
