Он основан на активности фермента β-галактозидазы (β-гал), природного фермента в клетках E. coli , который расщепляет молекулы лактозы на глюкозу и галактозу. β-гал кодируется геном lacZ бактериальной хромосомы. Существует также штамм E. coli M15 с делеционной мутацией фрагмента гена Lac, который продуцирует неактивную β-гал (называемую ω-пептидом). Благодаря процессу α-комплементации штаммы E. coli с делеционной мутацией lacZΔM15, несущие плазмидный вектор, содержащий последовательность lacZα, могут продуцировать функциональный фермент β-гал. Для скрининга клонов с помощью рекомбинантной ДНК в среду добавляют X-гал, изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид (IPTG) вместе с антибиотиком (таким как ампициллин). X-gal представляет собой хромогенный субстрат, а IPTG представляет собой аналог галактозы, индуцирующий экспрессию гена lacZ. Плазмидный вектор разработан так, чтобы содержать множественный сайт клонирования (MCS), присутствующий в последовательности lacZ. Следовательно, в плазмиде со вставкой (чужеродная ДНК) α-комплементация не происходит, следовательно, функциональный фермент β-галактозидаза не образуется.
Синие колонии содержат E. coli, продуцирующую функциональный фермент, гидролизующий X-гал, в результате чего образуется нерастворимый синий пигмент. Другими словами, это бактерии без вставки, имеющие функциональный ген LacZ.
Белые колонии образуются, когда плазмидный вектор, содержащий вставку с чужеродной ДНК (которая разрушает ген lacZ), поглощается E. coli , α-комплементация не происходит и, следовательно, функциональный фермент β-гал не вырабатывается. Затем желаемые белые рекомбинантные колонии можно легко отобрать и культивировать.
Этот файл содержит дополнительную информацию, вероятно, добавленную с цифровой камеры или сканера, использованных для его создания или оцифровки.
Если файл был изменен по сравнению с исходным состоянием, некоторые детали могут не полностью отражать измененный файл.
