Микроскопия формы спада интенсивности флуоресценции

Эта статья поднимает множество проблем. Пожалуйста, помогите улучшить его или обсудите эти проблемы на странице обсуждения . ( Узнайте, как и когда удалить эти сообщения-шаблоны ) Эта статья - сирота , так как никакие другие статьи не ссылаются на нее . Пожалуйста, введите ссылки на эту страницу из связанных статей ; попробуйте инструмент "Найти ссылку", чтобы получить предложения. ( Январь 2013 г. ) В этой статье не процитировать какие - либо источники . Пожалуйста, помогите улучшить эту статью , добавив цитаты из надежных источников . Материал, не полученный от источника, может быть оспорен и удален . Найти источники:  «Микроскопия формы затухания интенсивности флуоресценции»  -  новости  · газеты  · книги  · ученый  · JSTOR ( июнь 2012 г. ) ( Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения ) Эта статья не предоставляет достаточного контекста для тех, кто не знаком с предметом . Пожалуйста, помогите улучшить статью , предоставив читателю больше контекста . ( Июнь 2012 г. ) ( Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения ) ( Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения )

Микроскопия формы спада интенсивности флуоресценции (FIDSAM) - это метод флуоресцентной микроскопии , который использует временную эволюцию испускания флуоресценции после импульсного возбуждения для анализа статистики затухания возбужденного хромофора . Основное применение FIDSAM - различение неспецифического автофлуоресцентного фонового сигнала от целевого сигнала выделенного хромофора.

Принцип [ править ]

Метод FIDSAM анализирует количество различных молекул, вносящих вклад в измеряемый сигнал флуоресценции. Если предположить, что раствор флуоресцентного красителя находится в изотропной среде, отдельные излучатели неразличимы. Соответственно, они подчиняются одной и той же статистике излучения флуоресценции, и временная эволюция излучения флуоресценции после импульсного возбуждения может быть описана функцией моноэкспоненциального затухания в соответствии с:

${\ Displaystyle F (т) = Ае ^ {- т / \ тау}}$

где = начальная интенсивность флуоресценции после возбуждения и = константа затухания (время жизни флуоресценции).${\ displaystyle A}$${\ Displaystyle \ тау}$

Напротив, автофлуоресцентный фон состоит из множества отдельных источников излучения, которые подчиняются статистике отдельных выбросов. Соответственно, временная эволюция представляет собой совокупность многочисленных индивидуальных статистических данных распада и может быть записана как:

${\ Displaystyle F (т) = \ сумма (A_ {1} е ^ {- т / \ тау _ {1}})}$.

Методика FIDSAM основана на измерении коррелированного по времени подсчета одиночных фотонов (TCSPC) и анализирует степень отклонения зарегистрированного затухания флуоресценции от моноэкспоненциального поведения. Это достигается путем подгонки зарегистрированного спада интенсивности флуоресценции с помощью функции моноэкспоненциального затухания, свернутой с функцией отклика прибора. На следующем этапе значение ошибки процедуры подгонки,${\ displaystyle \ chi ^ {2}}$, извлекается, и его обратное значение умножается на исходное значение интенсивности. Таким образом, сигнал флуоресценции, который происходит от фона автофлуоресценции и, следовательно, демонстрирует повышенные значения ошибки, делится на относительно большое число, тогда как сигнал флуоресценции от молекул-мишеней имеет небольшие значения ошибки около единицы, делится на небольшое число и остается в значительной степени неизменным. .

FIDSAM imaging [ править ]

Как правило, метод FIDSAM применяется для получения изображений под микроскопом. В то время как протокол измерения соответствует микроскопии с визуализацией времени жизни флуоресценции (FLIM) , параметр считывания отличается. В FLIM вычисляется характеристическая константа затухания , в то время как FIDSAM анализирует форму затухания интенсивности флуоресценции с помощью значения ошибки. Из-за этого FIDSAM по своей сути не зависит от колебаний времени жизни флуоресценции, которые часто возникают из-за индивидуального химического окружения хромофора, а от анализа изотропии эмиттеров в данном объеме образца.