Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Для получения дополнительных исторических сведений см. Покадровую микроскопию .
Рисунок 1: микроскоп живых клеток. Микроскопы живых клеток обычно инвертированы . Чтобы клетки оставались живыми во время наблюдения, микроскопы обычно помещаются в инкубатор для микроклеток (прозрачный ящик).

Визуализация живых клеток - это исследование живых клеток с помощью покадровой микроскопии . Он используется учеными для лучшего понимания биологических функций путем изучения динамики клеток. [1] Визуализация живых клеток была впервые применена в первом десятилетии 21 века. Юлиус Райс сделал одну из первых покадровых микрокинематографических пленок клеток, на которой показано оплодотворение и развитие яйца морского ежа . [2] С тех пор было разработано несколько методов микроскопии, которые позволяют исследователям более детально изучать живые клетки с меньшими усилиями. Был использован новый тип визуализации с использованием квантовых точек , поскольку они оказались более стабильными. [3]При разработке голотомографической микроскопии не учитывались фототоксичность и другие недостатки, связанные с окрашиванием, путем внедрения цифрового окрашивания на основе показателя преломления клеток. [4] [5]

Обзор [ править ]

Биологические системы существуют как сложное взаимодействие бесчисленных клеточных компонентов, взаимодействующих в четырех измерениях, чтобы произвести явление, называемое жизнью. Хотя принято превращать живые организмы в неживые образцы, чтобы приспособить традиционные инструменты статической визуализации, чем дальше образец отклоняется от естественных условий, тем более вероятно, что рассматриваемые тонкие процессы будут демонстрировать возмущения. [6] Таким образом, обременительная задача фиксации истинной физиологической идентичности живой ткани требует визуализации с высоким разрешением как в пространстве, так и во времени в пределах родительского организма. [7] Технологические достижения в области визуализации живых клеток, предназначенные для получения пространственно-временных изображенийсубклеточные события в реальном времени играют важную роль в подтверждении биологической значимости физиологических изменений, наблюдаемых во время экспериментов. Из-за их непрерывной связи с физиологическими условиями, анализы живых клеток считаются стандартом для исследования сложных и динамических клеточных событий. [8] По мере того, как динамические процессы, такие как миграция , развитие клеток и внутриклеточный трафик, все чаще становятся центром биологических исследований, методы, способные собирать трехмерные данные в реальном времени для клеточных сетей ( in situ ) и целых организмов ( in vivo) станут незаменимыми инструментами в понимании биологических систем. Широкое признание визуализации живых клеток привело к быстрому увеличению числа практикующих врачей и установило необходимость в увеличении пространственного и временного разрешения без ущерба для здоровья клетки. [9]

Видео 2: Покадровое видео с флуоресцентной микроскопии делящегося эмбриона пурпурного морского ежа . [11]
Воспроизвести медиа
Видео 3: Видео с количественной фазово-контрастной микроскопией делящихся клеток рака молочной железы. [12]

Типы используемых микроскопов [ править ]

Фазовый контраст [ править ]

Основная статья: Фазово-контрастная микроскопия

До появления фазово-контрастного микроскопа было трудно наблюдать живые клетки. Поскольку живые клетки полупрозрачны, их необходимо окрашивать, чтобы их можно было увидеть в традиционный световой микроскоп . К сожалению, процесс окрашивания клеток обычно приводит к их гибели. С изобретением фазово-контрастной микроскопии стало возможным детально наблюдать неокрашенные живые клетки. После внедрения в 1940-х годах визуализация живых клеток быстро стала популярной с помощью фазово-контрастной микроскопии. [13] Фазово-контрастный микроскоп стал популярен благодаря серии видеороликов с интервальной съемкой (видео 1), снятых с помощью фотопленочной камеры. [14] Его изобретатель Фриц Зернике., был удостоен Нобелевской премии в 1953 году. [15] Другими более поздними методами фазового контраста, используемыми для наблюдения неокрашенных клеток, являются модуляция Хоффмана и микроскопия с дифференциальным интерференционным контрастом.

Флуоресцентный [ править ]

Основная статья: Флуоресцентная микроскопия

Фазово-контрастная микроскопия не позволяет наблюдать определенные белки или другие органические химические соединения, которые образуют сложный механизм клетки. Поэтому были разработаны синтетические и органические флуоресцентные красители для маркировки таких соединений, что делает их наблюдаемыми с помощью флуоресцентной микроскопии (видео 2). [16] Однако флуоресцентные пятна являются фототоксичными , инвазивными и отбеливающими при наблюдении. Это ограничивает их использование при наблюдении за живыми клетками в течение продолжительных периодов времени. Поэтому неинвазивные методы фазового контраста часто используются в качестве жизненно важного дополнения к флуоресцентной микроскопии при визуализации живых клеток. [17] [18]

Количественный фазовый контраст [ править ]

Основная статья: Количественная фазово-контрастная микроскопия

В результате быстрого увеличения плотности пикселей цифровых датчиков изображения , количественная фазово-контрастная микроскопия стала альтернативным методом микроскопии для визуализации живых клеток. [19] [20] Количественная фазово-контрастная микроскопия имеет преимущество перед флуоресцентной и фазово-контрастной микроскопией в том, что она является неинвазивной и количественной по своей природе.

Из-за узкой фокусной глубины обычной микроскопии визуализация живых клеток в настоящее время в значительной степени ограничивается наблюдением клеток в одной плоскости. Большинство реализаций количественной фазово-контрастной микроскопии позволяют создавать изображения и фокусировать их в разных фокальных плоскостях за одну экспозицию. Это открывает в будущем возможность трехмерной визуализации живых клеток с помощью флуоресцентных методов. [21] Количественная фазово-контрастная микроскопия с ротационным сканированием позволяет получать трехмерные покадровые изображения живых клеток с высоким разрешением. [22] [23] [24]

Голотомография [ править ]

Голотомография (HT) - это лазерная техника для измерения трехмерной томограммы показателя преломления (RI) микроскопического образца, такого как биологические клетки и ткани. Поскольку RI может служить в качестве внутреннего контраста изображения для прозрачных или фазовых объектов, измерения томограмм RI могут обеспечить количественное изображение микроскопических фазовых объектов без меток. Для измерения трехмерной томограммы RI образцов HT использует принцип голографической визуализации и обратного рассеяния. Как правило, несколько двумерных голографических изображений образца измеряются при различных углах освещения, используя принцип интерферометрической визуализации. Затем трехмерная томограмма RI образца восстанавливается из этих нескольких двумерных голографических изображений путем обратного решения светорассеяния в образце.

Принцип HT очень похож на рентгеновскую компьютерную томографию (КТ) или компьютерную томографию . Компьютерная томография измеряет несколько двумерных рентгеновских изображений человеческого тела при различных углах освещения, а затем извлекается трехмерная томограмма (поглощающая способность рентгеновского излучения) с помощью теории обратного рассеяния. И рентгеновская КТ, и лазерная ВТ используют одно и то же основное уравнение - уравнение Гельмгольца , волновое уравнение для монохроматической длины волны. HT также известен как оптическая дифракционная томография.

Комбинация голографии и ротационного сканирования позволяет производить длительные записи живых клеток без этикеток.

Неинвазивная оптическая наноскопия может достичь такого латерального разрешения с помощью схемы квази-2π-голографического обнаружения и сложной деконволюции. Пространственные частоты отображаемой клетки не имеют никакого смысла для человеческого глаза. Но эти рассеянные частоты преобразуются в голограмму и синтезируют полосу пропускания, которая имеет разрешение, вдвое превышающее обычно доступное. Голограммы записываются с разных направлений освещения на плоскости образца и позволяют наблюдать субволновые томографические вариации образца. Апертуры в наномасштабе служат для калибровки томографической реконструкции и характеристики системы визуализации с помощью когерентной передаточной функции. Это обеспечивает реалистичную обратную фильтрацию и гарантирует истинную реконструкцию комплексного поля. [25]

В заключение, две терминологии: (i) оптическое разрешение (реальное) и (ii) разрешение выборки (то, что на экране) разделены для трехмерной голотомографической микроскопии.

Приборы и оптика [ править ]

Визуализация живых клеток представляет собой тщательный компромисс между получением изображения с самым высоким разрешением и сохранением живых клеток как можно дольше. [26] В результате микроскописты живых клеток сталкиваются с уникальным набором проблем, которые часто упускаются из виду при работе с фиксированными образцами. Более того, для получения изображений живых клеток часто используются специальные оптические системы и детекторы. Например, в идеале микроскопы, используемые для визуализации живых клеток, должны иметь высокое отношение сигнал / шум , высокую скорость получения изображений для захвата видео с интервальной съемкой внеклеточных событий и поддерживать долгосрочную жизнеспособность клеток. [27] Однако оптимизация даже одного аспекта получения изображения может потребовать значительных ресурсов и должна рассматриваться в индивидуальном порядке.

Дизайн линз [ править ]

A) Вертикальная конфигурация линз. Б) Перевернутая конфигурация линз.

Малое увеличение "сухое" [ править ]

В случаях, когда для работы с образцом требуется дополнительное пространство между объективом и образцом, можно использовать сухую линзу, что может потребовать дополнительных настроек корректирующей манжеты, которая изменяет положение линзы в объективе, чтобы учесть различия. в камерах визуализации. Специальные линзы объектива имеют корректирующие кольца, которые корректируют сферические аберрации.с учетом толщины покровного стекла. В сухих объективах с высокой числовой апертурой (NA) регулировочное кольцо корректирующего кольца изменяет положение подвижной группы линз, чтобы учесть различия в способе фокусировки света внешней стороной линзы относительно центра. Хотя аберрации линз присущи всем конструкциям линз, они становятся более проблематичными в сухих линзах, где сохранение разрешения является ключевым моментом. [28]

Масляная иммерсия с высоким значением NA [ править ]

Масляная иммерсия - это метод, позволяющий повысить разрешение изображения за счет погружения линзы и образца в масло с высоким показателем преломления . Поскольку свет изгибается при прохождении между средами с разными показателями преломления, поместив масло с тем же показателем преломления, что и стекло, между линзой и предметным стеклом, можно избежать двух переходов между показателями преломления. [29] Однако для большинства применений рекомендуется использовать масляную иммерсию для неподвижных (мертвых) образцов, поскольку живым клеткам требуется водная среда, а смешивание масла и воды может вызвать серьезные сферические аберрации. Для некоторых применений силиконовое масломожет использоваться для получения более точных реконструкций изображений. Силиконовое масло является привлекательной средой, поскольку его показатель преломления близок к показателю преломления живых клеток, что позволяет получать изображения с высоким разрешением при минимизации сферических аберраций. [28]

Водное погружение [ править ]

Для визуализации живых клеток требуется образец в водной среде, которая часто находится на расстоянии от 50 до 200 микрометров от покровного стекла. Таким образом, водно-иммерсионные линзы могут помочь достичь более высокой разрешающей способности благодаря тому, что как окружающая среда, так и сами клетки будут близки к показателю преломления воды. Водные иммерсионные линзы совместимы с показателем преломления воды и обычно имеют корректирующий воротник, который позволяет регулировать объектив. Кроме того, из-за более высокого показателя преломления воды иммерсионные линзы имеют высокую числовую апертуру и могут создавать изображения, превосходящие иммерсионные линзы при разрешении плоскостей глубже 0 мкм. [28]

Погружение [ править ]

Еще одно решение для визуализации живых клеток - это погружная линза. Эти линзы представляют собой подмножество линз для погружения в воду, которые не требуют покровного стекла и могут быть погружены непосредственно в водную среду образца. Одним из основных преимуществ погружной линзы является то, что она имеет большое эффективное рабочее расстояние. [30]Поскольку покровное стекло не требуется, линзы этого типа могут приближаться к поверхности образца, и в результате разрешение ограничивается ограничениями, налагаемыми сферической аберрацией, а не физическими ограничениями покровного стекла. Хотя погружные линзы могут быть очень полезными, они не идеальны для всех экспериментов, поскольку действие «погружения» линзы может нарушить клетки в образце. Кроме того, поскольку инкубационная камера должна быть открыта для линзы, необходимо внимательно следить за изменениями среды пробы из-за испарения. [28]

Фототоксичность и фотообесцвечивание [ править ]

Сегодня большинство методов получения изображений в реальном времени полагаются либо на режимы сильного освещения, либо на флуоресцентное мечение, вызывая фототоксичность и ставя под угрозу способность сохранять клетки в спокойном и живом состоянии с течением времени. Поскольку наши знания биологии основаны на наблюдениях, важно минимизировать возмущения, вызванные техникой визуализации.

Распространение конфокальной микроскопии тесно связано с появлением мощных лазеров, которые способны достигать высоких интенсивностей светового возбуждения. Однако высокая выходная мощность может повредить чувствительные флуорофоры, и обычно они работают значительно ниже их максимальной выходной мощности. [31] Избыточное воздействие света может привести к фотоповреждению из-за фотообесцвечивания или фототоксичности . Эффекты фотообесцвечивания могут значительно снизить качество флуоресцентных изображений, и в последние годы появился значительный спрос на коммерческие флуорофоры с более длительным сроком службы. Одно из решений, серия Alexa Fluor , практически не выцветает даже при высокой интенсивности лазера. [32]

В физиологических условиях многие клетки и ткани подвергаются воздействию только слабого света. [33] В результате важно минимизировать воздействие на живые клетки высоких доз ультрафиолетового (УФ), инфракрасного (ИК) или флуоресцентного излучения, возбуждающего длины волн света, которые могут повредить ДНК , повысить температуру клеток и вызвать фото отбеливание соответственно. [34] Фотоны высокой энергии, поглощаемые флуорофором и образцом, излучаются на более длинных волнах, пропорциональных стоксову сдвигу . [35] Однако клеточные органеллы могут быть повреждены, когда энергия фотона вызывает химические и молекулярные изменения, а не переизлучается. [36]Считается, что основная причина световой токсичности, которую испытывают живые клетки, является результатом действия свободных радикалов при возбуждении флуоресцентных молекул. [33] Эти свободные радикалы обладают высокой реакционной способностью и приводят к разрушению клеточных компонентов, что может привести к нефизиологическому поведению.

Один из методов минимизации фотоповреждений - снизить концентрацию кислорода в образце, чтобы избежать образования активных форм кислорода . [37] Однако этот метод не всегда возможен при визуализации живых клеток и может потребовать дополнительного вмешательства. Еще один метод уменьшения воздействия свободных радикалов в образце - это использование противовспадных реагентов. К сожалению, большинство имеющихся в продаже антифадеров нельзя использовать для визуализации живых клеток из-за их токсичности. [38] Вместо этого можно использовать естественные поглотители свободных радикалов, такие как витамин C или витамин E , без существенного изменения физиологического поведения в более короткие сроки. [39]Недавно была разработана и коммерциализирована визуализация живых клеток без фототоксичности. Голотомографическая микроскопия позволяет избежать фототоксичности благодаря маломощному лазеру (класс лазера 1: 0,2 мВт / мм2). [4] [5] [40]

См. Также [ править ]

  • Цитометрия
  • Количественная фазовая визуализация
  • Покадровая микроскопия
  • Живое изображение одной клетки

Ссылки [ править ]

  1. Перейти ↑ Baker M (август 2010). «Клеточная визуализация: долгий и внимательный взгляд». Природа . 466 (7310): 1137–40. Bibcode : 2010Natur.466.1137B . DOI : 10.1038 / 4661137a . PMID  20740018 . S2CID  205056946 .
  2. ^ Ландекер H (октябрь 2009). «Увидеть: от микрокинематографии до визуализации живых клеток». Методы природы . 6 (10): 707–09. DOI : 10.1038 / nmeth1009-707 . PMID 19953685 . S2CID 6521488 .  
  3. ^ Джайсвал JK, Goldman ER, Mattoussi H, Саймон SM (октябрь 2004). «Использование квантовых точек для визуализации живых клеток». Методы природы . 1 (1): 73–8. DOI : 10.1038 / nmeth1004-73 . PMID 16138413 . S2CID 13339279 .  
  4. ^ a b Pollaro, L .; Equis, S .; Далла Пьяцца, Б. Котт, Ю. (2016). «Трехмерная наноскопия живых клеток без пятен». Оптик и Фотоник . 11 : 38–42. DOI : 10.1002 / opph.201600008 .
  5. ^ a b Pollaro, L .; Далла Пьяцца, Б. Котт, Ю. (2015). «Цифровое окрашивание: микроскопия живых клеток без инвазивных химических веществ» (PDF) . Микроскопия сегодня . 23 (4): 12–17. DOI : 10.1017 / S1551929515000590 .
  6. ^ Петролл, WM; Шут, СП; Кавана, HD (май 1994 г.). «Конфокальная визуализация in vivo: общие принципы и приложения». Сканирование . 16 (3): 131–149. ISSN 0161-0457 . PMID 8038913 .  
  7. ^ Мейеринг, Эрик; Дзюбачик Олег; Смаль, Игорь (01.01.2012). Методы отслеживания клеток и частиц . Методы в энзимологии . 504 . С. 183–200. DOI : 10.1016 / B978-0-12-391857-4.00009-4 . ISBN 9780123918574. ISSN  0076-6879 . PMID  22264535 .
  8. ^ Аллан, Виктория Дж .; Стивенс, Дэвид Дж. (2004-04-04). «Методы световой микроскопии для визуализации живых клеток». Наука . 300 (5616): 82–86. Bibcode : 2003Sci ... 300 ... 82S . CiteSeerX 10.1.1.702.4732 . DOI : 10.1126 / science.1082160 . ISSN 1095-9203 . PMID 12677057 . S2CID 33199613 .    
  9. ^ DanceMar. 27, янтарь; 2018; Вечер, 2:10 (27.03.2018). «Визуализация живых клеток: глубже, быстрее, шире» . Наука | AAAS . Проверено 17 декабря 2018 .CS1 maint: числовые имена: список авторов ( ссылка )
  10. ^ Мишель К. «Исторический замедленный фильм доктора Курта Мишеля, Carl Zeiss Jena (приблизительно 1943)» . Библиотека Zeiss Microscopy.
  11. ^ фон Дассов G, Verbrugghe KJ, Miller AL, Sider JR, Bement WM. «Клеточное деление у зародыша пурпурного ежа» . The Cell - библиотека изображений.
  12. ^ Янике Б. "Видео с цифровой голографической микроскопии, показывающее деление немеченых клеток рака молочной железы JIMT-1" . The Cell - библиотека изображений.
  13. ↑ Burgess M (15 октября 2003 г.). «Празднование 50-летия визуализации живых клеток» (PDF) . Carl Zeiss UK и Королевское микроскопическое общество . Лондон: Биохимическое общество.
  14. ^ Гундлах Х. «50 лет назад: Фриц Зернике (1888-1966) получил Нобелевскую премию по физике за разработку метода фазового контраста» (PDF) (пресс-релиз). Carl Zeiss AG. Архивировано из оригинального (PDF) 22 марта 2014 года.
  15. ^ "Нобелевская премия по физике 1953" . Nobel Media AB.
  16. ^ Stockert JC, Blazquez-Кастро (2017). Флуоресцентная микроскопия в науках о жизни . Издательство Bentham Science. ISBN 978-1-68108-519-7. Проверено 24 декабря 2017 года .
  17. Перейти ↑ Stephens DJ, Allan VJ (апрель 2003 г.). «Методы световой микроскопии для визуализации живых клеток». Наука . 300 (5616): 82–6. Bibcode : 2003Sci ... 300 ... 82S . CiteSeerX 10.1.1.702.4732 . DOI : 10.1126 / science.1082160 . PMID 12677057 . S2CID 33199613 .   
  18. ^ Ge J, Wood DK, Weingeist DM, Prasongtanakij S, Navasumrit P, Ruchirawat M, Engelward BP (июнь 2013 г.). «Стандартная флуоресцентная визуализация живых клеток очень генотоксична» . Цитометрия. Часть A . 83 (6): 552–60. DOI : 10.1002 / cyto.a.22291 . PMC 3677558 . PMID 23650257 .  
  19. ^ Парк Y, Depeursinge C, Попеску, G (2018). «Количественная фазовая визуализация в биомедицине». Природа Фотоника . 12 (10): 578–589. Bibcode : 2018NaPho..12..578P . DOI : 10.1038 / s41566-018-0253-х . PMID 26648557 . S2CID 126144855 .  
  20. ^ Куш E, F Bevilacqua, Depeursinge C (1999). «Цифровая голография для количественной фазово-контрастной визуализации» . Письма об оптике . 24 (5): 291–293. Bibcode : 1999OptL ... 24..291C . DOI : 10.1364 / OL.24.000291 . PMID 18071483 . S2CID 38085266 .  
  21. Перейти ↑ Rosen J, Brooker G (2008). «Несканирующая неподвижная флуоресцентная трехмерная голографическая микроскопия» . Природа Фотоника . 2 (3): 190–195. Bibcode : 2008NaPho ... 2..190R . DOI : 10.1038 / nphoton.2007.300 . S2CID 17818065 . 
  22. ^ Wonshik С , Фан-йены С, Badizadegan К, О , S, N Луэ, Dasari R, Фелд М (2007). «Томографическая фазовая микроскопия». Методы природы . 4 (9): 717–719. DOI : 10.1038 / nmeth1078 . PMID 17694065 . S2CID 205418034 .  
  23. ^ Котт Y, игрушки Р, Р Журден, Pavillon N, D Хозяин, Маджистретти Р, Р Marquet, Depeursinge С (2013). «Безмаркерная фазовая наноскопия» . Природа Фотоника . 7 (2): 113–117. Bibcode : 2013NaPho ... 7..113C . DOI : 10.1038 / nphoton.2012.329 . S2CID 16407188 . 
  24. ^ Pollaro л, Equis S, Далла площади В, Котт Y (2016). «Трехмерная наноскопия живых клеток без пятен». Оптик и Фотоник . Интернет-библиотека Wiley. 11 : 38–42. DOI : 10.1002 / opph.201600008 .
  25. ^ Котт, Янн; Той, Фатих; Журден, Паскаль; Павильон, Николас; Босс, Дэниел; Магистретти, Пьер; Марке, Пьер; Деперсинг, Кристиан (февраль 2013 г.). «Безмаркерная фазовая наноскопия» . Природа Фотоника . 7 (2): 113–117. Bibcode : 2013NaPho ... 7..113C . DOI : 10.1038 / nphoton.2012.329 . ISSN 1749-4893 . 
  26. ↑ Jensen EC (январь 2013 г.). «Обзор визуализации живых клеток: требования и используемые методы» . Анатомическая запись . 296 (1): 1–8. DOI : 10.1002 / ar.22554 . PMID 22907880 . S2CID 35790454 .  
  27. ^ Waters JC (2013). «Флуоресцентная визуализация живых клеток». Цифровая микроскопия . Методы клеточной биологии . 114 . С. 125–50. DOI : 10.1016 / B978-0-12-407761-4.00006-3 . ISBN 9780124077614. PMID  23931505 .
  28. ^ а б в г Hibbs AR (2004). Конфокальная микроскопия для биологов . Нью-Йорк: Kluwer Academic / Plenum Publishers. ISBN 978-0306484681. OCLC  54424872 .
  29. ^ Mansfield С.М., Kino GS (1990-12-10). «Иммерсионный твердотельный микроскоп». Письма по прикладной физике . 57 (24): 2615–2616. Bibcode : 1990ApPhL..57.2615M . DOI : 10.1063 / 1.103828 .
  30. ^ Keller HE (2006), "Объективы для конфокальной микроскопии" , Справочник биологической конфокальной микроскопии ., Springer США, С. 145-161, DOI : 10.1007 / 978-0-387-45524-2_7 , ISBN 9780387259215, S2CID  34412257
  31. ^ Амос, WB; Уайт, JG (01.09.2003). «Как конфокальный лазерный сканирующий микроскоп попал в биологические исследования» . Биология клетки . 95 (6): 335–342. DOI : 10.1016 / S0248-4900 (03) 00078-9 . PMID 14519550 . S2CID 34919506 .  
  32. ^ Anderson GP, Nerurkar NL (2002-12-20). «Улучшенные флюороиммуноанализы с использованием красителя Alexa Fluor 647 с RAPTOR, волоконно-оптическим биосенсором 7». Журнал иммунологических методов . 271 (1-2): 17-24. DOI : 10.1016 / S0022-1759 (02) 00327-7 . ISSN 0022-1759 . PMID 12445725 .  
  33. ^ a b Frigault MM, Lacoste J, Swift JL, Brown CM (март 2009 г.). «Микроскопия живых клеток - советы и инструменты» . Журнал клеточной науки . 122 (Pt 6): 753–67. DOI : 10,1242 / jcs.033837 . PMID 19261845 . 
  34. ^ Магидсон В, Khodjakov А (2013). «Обход фотоповреждений в микроскопии живых клеток». Цифровая микроскопия . Методы клеточной биологии . 114 . С. 545–60. DOI : 10.1016 / B978-0-12-407761-4.00023-3 . ISBN 9780124077614. PMC  3843244 . PMID  23931522 .
  35. ↑ Рост FW (1992–1995). Флуоресцентная микроскопия . Кембридж: Издательство Кембриджского университета. ISBN 978-0521236416. OCLC  23766227 .
  36. ^ Laissue PP, Alghamdi RA, Tomancak P, Рейно EG, Шрофф H (июнь 2017). «Оценка фототоксичности в живой флуоресцентной визуализации». Методы природы . 14 (7): 657–661. DOI : 10.1038 / nmeth.4344 . hdl : 21.11116 / 0000-0002-8B80-0 . PMID 28661494 . S2CID 6844352 .  
  37. Перейти ↑ Ettinger A, Wittmann T (2014). «Флуоресцентная визуализация живых клеток». Количественная визуализация в клеточной биологии . Методы клеточной биологии . 123 . С. 77–94. DOI : 10.1016 / B978-0-12-420138-5.00005-7 . ISBN 9780124201385. PMC  4198327 . PMID  24974023 .
  38. ^ Pawley JB (2006). Справочник по биологической конфокальной микроскопии (3-е изд.). Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: Спрингер. ISBN 9780387455242. OCLC  663880901 .
  39. ^ Watu А, Metussin Н, Ясин НМ, Усман А (2018). «Общая антиоксидантная способность и флуоресцентная визуализация выбранных листьев растений, обычно потребляемых в Брунее-Даруссаламе» . Материалы конференции AIP . 1933 (1): 020001. Bibcode : 2018AIPC.1933b0001W . DOI : 10.1063 / 1.5023935 .
  40. ↑ Патрик А. Сандос, Кристофер Трембле, Себастьян Эквис, Сорин Поп, Лиза Полларо, Янн Котт, Ф. Гизу ван дер Гут, Матье Фрешин. Безмаркированный трехмерный анализ органелл в живых клетках по показателю преломления показывает пре-митотическое вращение органелл в стволовых клетках млекопитающих bioRxiv 407239; DOI: https://doi.org/10.1101/407239

Внешние ссылки [ править ]

  • Университет штата Флорида - Введение в методы визуализации живых клеток