Вложенная полимеразная цепная реакция ( Вложенная ПЦР ) представляет собой модификацию полимеразной цепной реакции, предназначенную для уменьшения неспецифического связывания в продуктах из-за амплификации неожиданных участков связывания праймера. [1]
Полимеразная цепная реакция [ править ]
Сама по себе полимеразная цепная реакция - это процесс, используемый для амплификации образцов ДНК с помощью температурно-опосредованной ДНК-полимеразы . Эти продукты можно использовать для секвенирования или анализа, и этот процесс является ключевой частью многих генетических исследовательских лабораторий, а также используется для снятия отпечатков пальцев ДНК для судебно-медицинской экспертизы и других генетических случаев человека. Обычная ПЦР требует праймеровкомплементарен концам целевой ДНК. Количество продукта ПЦР увеличивается с увеличением количества температурных циклов, которым подвергается реакция. Часто встречающаяся проблема - связывание праймеров с неправильными участками ДНК, приводящее к неожиданным продуктам. Эта проблема становится более вероятной при увеличении количества циклов ПЦР.
Праймеры [ править ]
Вложенная полимеразная цепная реакция включает два набора праймеров, используемых в двух последовательных прогонах полимеразной цепной реакции, второй набор предназначен для амплификации вторичной мишени в продукте первого прогона. Это позволяет амплифицировать небольшое количество прогонов в первом цикле, ограничивая неспецифические продукты. Второй набор вложенных праймеров должен амплифицировать только целевой продукт из первого раунда амплификации, а не неспецифический продукт. Это позволяет запускать больше полных циклов при минимальном количестве неспецифических продуктов. Это полезно для редких шаблонов или ПЦР с высоким уровнем фона.
Процессы [ править ]
Целевая ДНК подвергается первому запуску полимеразной цепной реакции с первым набором праймеров, показанных зеленым. Выбор альтернативных и похожих сайтов связывания праймеров дает выбор продуктов, только один из которых содержит заданную последовательность.
Продукт из первой реакции подвергается второму прогону со вторым набором праймеров, показанным красным. Очень маловероятно, что какой-либо из нежелательных продуктов ПЦР содержит сайты связывания для обоих новых праймеров, гарантируя, что продукт из второй ПЦР имеет небольшое загрязнение нежелательными продуктами димеров праймеров, шпилек и альтернативных последовательностей-мишеней праймеров.
Ссылки [ править ]
- ^ Элизабет ван шкура-Verkuil; Алекс ван Белкум; Джон П. Хейс (14 марта 2008 г.). Принципы и технические аспекты амплификации ПЦР . Springer Science & Business Media. С. 190–. ISBN 978-1-4020-6241-4.
