ДНК-полимераза Pfu - это фермент, обнаруженный в гипертермофильном архее Pyrococcus furiosus , где он копирует ДНК организмаво время деления клеток. В лабораторных условиях Pfu используется для амплификации ДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР), где фермент выполняет центральную функцию по копированию новой цепи ДНК на каждом этапе удлинения.
ДНК-полимераза Pfu | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|
Идентификаторы | ||||||
Организм | ||||||
Символ | pol | |||||
PDB | 4ahc | |||||
UniProt | P61875 | |||||
|
Это семейство B ДНК - полимеразы . Он имеет 3'-5'-экзонуклеазный домен, подобный РНКазе H , типичный для полимеразы B-семейства, такой как ДНК-полимераза II . [1]
Корректирующая способность полимеразы Pfu
ДНК-полимераза Pfu обладает превосходной термостабильностью и свойствами корректуры по сравнению с ДНК-полимеразой Taq . В отличии от Taq - ДНК - полимеразы, Pfu ДНК - полимераза , обладает 3' - 5' экзонуклеазных корректируя активность, а это означает , что в качестве ДНК собрана из 5' - конца к 3' - концу , то экзонуклеазная активность немедленно удаляет нуклеотиды неправильно включенные в конце вегетационного 3' Нить ДНК. Следовательно, фрагменты ПЦР, полученные с помощью ДНК-полимеразы Pfu, будут иметь меньше ошибок, чем вставки ПЦР, полученные с помощью Taq .
Коммерчески доступные Pfu обычно приводят к ошибке 1 из 1,3 миллиона пар оснований и могут давать 2,6% мутированных продуктов при амплификации фрагментов размером 1 kb с помощью ПЦР. Однако Pfu медленнее и обычно требуется 1-2 минуты на цикл для амплификации 1 килобайт ДНК при 72 ° C. Использование ДНК-полимеразы Pfu в реакциях ПЦР также приводит к получению продуктов ПЦР с тупым концом. [2]
Следовательно, ДНК-полимераза Pfu превосходит ДНК-полимеразу Taq для техник, которые требуют синтеза ДНК с высокой точностью, но также может использоваться в сочетании с полимеразой Taq для получения точности Pfu со скоростью активности полимеразы Taq . [3]
История
Ученые во главе с Эриком Матуром из биотехнологической компании Stratagene, базирующейся в Ла-Хойя, Калифорния , в 1991 году обнаружили ДНК-полимеразу Pfu, которая демонстрирует значительно более высокую точность репликации, чем ДНК-полимераза Taq. [4] Они получили патенты на Pfu с дефицитом экзонуклеазы и полную Pfu в 1996 году. [5]
Другие полимеразы из штаммов Pyrococcus , такие как "Deep Vent" ( Q51334 ) из штамма GB-D и ДНК-полимераза Pwo , также нашли применение. [3]
Рекомендации
- ^ Просмотр белков InterPro: P61875
- ^ Agilent Technologies. «Руководство по эксплуатации ДНК-полимеразы PfuTurbo № 600250» (PDF) .
- ^ а б ван Пелт-Веркуил Э, ван Белкум А, Хейс Дж. П. (2008). «Taq и другие термостабильные ДНК-полимеразы». Принципы и технические аспекты амплификации ПЦР . С. 103–18. DOI : 10.1007 / 978-1-4020-6241-4_7 . ISBN 978-1-4020-6240-7.
- ^ Лундберг К.С., Сапожник Д.Д., Адамс М.В., Шорт Дж. М., Зорге Дж. А., Матур Э. Дж. (Декабрь 1991 г.). «Высокоточная амплификация с использованием термостабильной ДНК-полимеразы, выделенной из Pyrococcus furiosus». Джин . 108 (1): 1–6. DOI : 10.1016 / 0378-1119 (91) 90480-у . PMID 1761218 .
- ^ Патент США 5,489,523 , Патент США 5,545,552