Приземление полимеразная цепная реакция или приземление стиль полимеразная цепная реакция представляет собой метод полимеразной цепной реакции с помощью которых праймеры избежать амплификации последовательностей неспецифические. [1] отжига температура во время полимеразной цепной реакции определяет специфичность отжига праймеров. Точка плавлениягрунтовки устанавливает верхний предел температуры отжига. При температурах чуть выше этой точки будет происходить только очень специфическое спаривание оснований между праймером и матрицей. При более низких температурах праймеры связываются менее специфично. Неспецифическое связывание праймера скрывает результаты полимеразной цепной реакции, поскольку неспецифические последовательности, с которыми отжигаются праймеры на ранних этапах амплификации, будут «вытеснять» любые конкретные последовательности из-за экспоненциальной природы амплификации полимеразы . [2]
Методика
Самые ранние стадии цикла полимеразной цепной реакции касания имеют высокие температуры отжига. Температура отжига постепенно снижается для каждого последующего набора циклов. Праймер будет отжигаться при самой высокой температуре, которая в наименьшей степени допускает неспецифическое связывание, которое он способен переносить. Таким образом, первая амплифицированная последовательность находится между областями наибольшей специфичности праймера; скорее всего, это интересующая последовательность. Эти фрагменты будут далее амплифицироваться во время последующих циклов при более низких температурах и будут превосходить неспецифические последовательности, с которыми праймеры могут связываться при этих более низких температурах. Если праймер первоначально (во время высокотемпературных фаз) связывается с интересующей последовательностью, последующие раунды полимеразной цепной реакции могут быть выполнены с продуктом для дальнейшей амплификации этих фрагментов. Приземление увеличивает специфичность реакции при более высоких температурах и увеличивает эффективность к концу за счет снижения температуры отжига. [3]
Рекомендации
- ^ Дон Р., Кокс П., Уэйнрайт Б., Бейкер К., Мэттик Дж. (1991). « ПЦР « Touchdown »для предотвращения ложного праймирования во время амплификации гена» . Nucleic Acids Res . 19 (14): 4008. DOI : 10,1093 / NAR / 19.14.4008 . PMC 328507 . PMID 1861999 .
- ^ Хеккер К., Ру К. (1996). «Высокие и низкие температуры отжига увеличивают как специфичность, так и выход в процессе контактной и ступенчатой ПЦР» . Биотехнологии . 20 (3): 478–85. DOI : 10.2144 / 19962003478 . PMID 8679209 .
- ^ Ру К. (1994). «Использование несовпадающих пар праймер-шаблон в Touchdown PCR». Биотехнологии . 16 (5): 812–4. PMID 8068332 .