Дансилхлорид или 5- (диметиламино) нафталин-1-сульфонилхлорид - это реагент, который реагирует с первичными аминогруппами как в алифатических, так и в ароматических аминах с образованием стабильных сине- или сине-зеленых флуоресцентных аддуктов сульфонамида. Его также можно заставить реагировать со вторичными аминами. Дансилхлорид широко используется для модификации аминокислот; в частности, секвенирование белков и аминокислотный анализ. [2] [3] Дансилхлорид может также обозначаться как DNSC . Точно так же, аналогичное производное, дансил амид известен как DNSA.
Имена | |
---|---|
Название ИЮПАК 5- (диметиламино) нафталин-1-сульфонилхлорид | |
Идентификаторы | |
3D модель ( JSmol ) | |
ЧЭБИ | |
ChemSpider | |
ECHA InfoCard | 100.009.175 |
PubChem CID | |
Номер RTECS |
|
UNII | |
Панель управления CompTox ( EPA ) | |
| |
| |
Характеристики | |
C 12 H 12 Cl N O 2 S | |
Молярная масса | 269,74 г · моль -1 |
Температура плавления | 70 ° С (158 ° F, 343 К) |
Опасности | |
Пиктограммы GHS | |
H314 | |
P260 , P264 , P280 , P303 + 361 + 353 , P304 + 340 , P305 + 351 + 338 , P310 , P321 , P363 , P405 , P501 | |
Если не указано иное, данные приведены для материалов в их стандартном состоянии (при 25 ° C [77 ° F], 100 кПа). | |
проверить ( что есть ?) | |
Ссылки на инфобоксы | |
Кроме того, эти конъюгаты белок-DNSC чувствительны к своему непосредственному окружению. Это, в сочетании с их способностью принимать энергию (как при передаче резонансной энергии флуоресценции ) от аминокислоты триптофана , позволяет использовать этот метод мечения для исследования сворачивания и динамики белков.
Флуоресценция этих сульфонамидных аддуктов может быть усилена добавлением альфа-циклодекстрина . [4] Дансилхлорид нестабилен в диметилсульфоксиде, поэтому его нельзя использовать для приготовления растворов реагента. [5]
Коэффициент экстинкции дансилпроизводных важен для измерения их концентрации в растворе. Дансилхлорид - одно из простейших производных сульфонамида, поэтому он обычно служит исходным реагентом для получения других производных. Экзотические производные могут иметь очень разные коэффициенты экстинкции, но другие, такие как дансиламид , похожи на дансилхлорид по характеристикам абсорбции и флуоресценции. Но даже для дансилхлорида существует множество значений коэффициента экстинкции, о которых сообщалось. Некоторые значения используются для оценки степени успеха попыток конъюгирования красителя с белком. Другие значения могут использоваться для определения точной концентрации исходного раствора. В таблице ниже указаны конкретные значения и способы их использования.
Для всех приведенных ниже исследований значение поглощения всегда берется на максимум, который появляется между 310 нм и 350 нм. Пик широкий, поэтому измерение не очень чувствительно к ошибочной калибровке длины волны спектрофотометра, и ошибки из-за неправильной калибровки можно избежать, взяв значение на максимум, а не строго используя 330 нм.
Разновидность | Коэффициент экстинкции [M −1 · см −1 ] | Заметки |
---|---|---|
DNSC-белок | 3300 [6] | Использование конъюгатов ДНК-белок; Используется для определения степени маркировки химотрипсина и овальбумина. |
DNSC | 4350 [7] | В бикарбонатном буфере; максимум смещен на ~ 315 нм |
DNSC | 4550 [8] | В воде; пик смещен до 312 нм |
DNSA | 4050 [8] | В 60% этаноле; Измерено на 329 нм |
DNSC | 4000 [9] | Условия не указаны; нет ссылки на источник этого значения |
Подготовка
Это соединение может быть получено взаимодействием соответствующей сульфоновой кислоты с избытком оксихлорида фосфора (POCl 3 ) при комнатной температуре. [10]
Рекомендации
- ^ "MSDS" . Сигма-Олдрич . Архивировано из оригинала на 2007-12-27 . Проверено 2 декабря 2007 .
- ^ Уокер Дж. М. (1994). «Метод Dansyl для идентификации N-концевых аминокислот». Основные протоколы белков и пептидов . Методы Мол. Биол. 32 . С. 321–8. DOI : 10.1385 / 0-89603-268-X: 321 . ISBN 0-89603-268-X. PMID 7951732 .
- ^ Уокер Дж. М. (1994). «Метод Дансила-Эдмана для секвенирования пептидов». Основные протоколы белков и пептидов . Методы Мол. Биол. 32 . С. 329–34. DOI : 10.1385 / 0-89603-268-X: 329 . ISBN 0-89603-268-X. PMID 7951733 .
- ^ Киношита Т, Иинума Ф, Цудзи А (1974). «Микроанализ белков и пептидов. I. Повышение интенсивности флуоресценции дансиламинокислот и дансиловых белков в водных средах и его применение для анализа аминокислот и белков» . Chem. Pharm. Бык . 22 (10): 2413–20. DOI : 10,1248 / cpb.22.2413 . PMID 4468087 .
- ^ Бойл, Р. Э. (1966). «Реакция диметилсульфоксида и 5-диметиламинонафталин-1-сульфонилхлорида». Журнал органической химии . 31 (11): 3880–3882. DOI : 10.1021 / jo01349a529 .
- ^ Хартли, Б.С.; В. Мэсси (1956). «Активный центр химотрипсина: 1. Маркировка флуоресцентным красителем». Biochimica et Biophysica Acta . 21 (1): 58–70. DOI : 10.1016 / 0006-3002 (56) 90093-2 . PMID 13363860 .
- ^ Чен, РФ (1968). «Меченые дансилом белки». Аналитическая биохимия . 25 (1): 412–416. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (68) 90116-4 . PMID 5704757 .
- ^ а б Вебер, G (1952). «Поляризованная флуоресценция белковых конъюгатов» . Биохимический журнал . 51 (2): 145–155. DOI : 10.1042 / bj0510145 . PMC 1197814 . PMID 14944566 .
- ^ «Справочник по молекулярным зондам: кумарины, пирены и другие флуорофоры, возбуждаемые ультрафиолетовым светом (раздел 1.7)» . Проверено 12 июня 2009 года .
- ^ Артур Мендель (1970). «Улучшенный препарат 5-диметиламино-1-нафталинсульфонилхлорида». J. Chem. Англ. Данные . 15 (2): 340–341. DOI : 10.1021 / je60045a010 .