Создано Евангелие, по-видимому, в Полоцке в XII веке. Легенда приписывает создание Евангелия руке святой Ефросиньи Полоцкой. Поскольку Евфросиния основала в Полоцке 2 монастыря, ставшие известными как центры переписывания книг, её причастность к созданию рукописи вполне вероятна. Имеются сведения, что евангелие находилось в Троицком монастыре в Полоцке и использовалось как напрестольное.
Полоцкое евангелие было вывезено из Полоцка Иваном Грозным, после взятия города в ходе Ливонской войны в 1563 году. Информация о том, где находилось евангелие в последующие годы и до XIX века, практически отсутствует. Известно, что в 1852 году сохранившиеся 170 листов Евангелия вместе с некоторыми другими раритетами из «Древнехранилища» Погодина были приобретены Императорской публичной библиотекой (в н. время — Российская национальная библиотека, Санкт-Петербург).
170 листов евангелия хранятся в РНБ, в коллекции Погодина под номером Погод. 12, а ещё 2 листа хранятся в РГБ в коллекции Ундольского под номером Унд. 962.
В СМИ иногда ошибочно называют часть Полоцкого Евангелия из коллекции Ундольского листками Ундольского, что неверно, так как «листки Ундольского» — отдельный и более древний отрывок из евангелия-апраксия.
Богослужебное Евангелие, содержащее чтения на каждый день года для произнесения в храме. Некоторые чтения отсутствуют из-за утраты отдельных листов в середине и в конце книги – текст обрывается на страстной неделе. На многих листах приписаны чтения из Апостола.
Рукопись написана на пергаменте уставом, почерком двух писцов, в два столбца. Орнамент инициалов относят к старовизантийскому типу. Изначальный переплет книги не сохранился, имеющийся переплет относится ко времени не ранее XVIII века. Язык рукописи содержит черты, свойственные местному диалекту древних кривичей. Разметка линеек произведена острым писалом. Дырки в пергаменте (частое явление в выделанных шкурах животных, указывают на места укусов оводами) аккуратно заштопаны. Рукопись содержит 2 заставки (иллюстрации), которые, однако, плохо сохранились из-за применения серебра, которое со временем окисляется. Применение серебра не характерно для славяно-византийских рукописей, но широко применялось в Германии. Сохранившиеся 170 листов составляют около 70 % первоначального текста, это самая ранняя из созданных на территории Беларуси рукописей, дошедшая в таком объёме (более древнее Туровское Евангелие содержит всего 10 листов).