Синхронизация клеток — это процесс, посредством которого клетки в культуре на разных стадиях клеточного цикла доводятся до одной и той же фазы. Синхронизация клеток - жизненно важный процесс в изучении клеток, проходящих через клеточный цикл, поскольку он позволяет собирать данные для всей популяции, а не полагаться исключительно на эксперименты с отдельными клетками. Типы синхронизации можно разделить на две группы; физическое фракционирование и химическая блокада.
Физическое фракционирование — это процесс, при котором непрерывно делящиеся клетки разделяются на фазово-обогащенные популяции на основе следующих характеристик:
Учитывая, что клетки приобретают различную морфологию и поверхностные маркеры на протяжении клеточного цикла, эти признаки можно использовать для разделения по фазам. Есть два широко используемых метода.
(Ранее называлось центрифугированием в противоточном режиме). Центрифужное отмывание можно использовать для разделения клеток на разных фазах клеточного цикла в зависимости от их размера и скорости седиментации (связанной с коэффициентом седиментации ). Из-за последовательного характера роста на протяжении всего клеточного цикла центробежная элютриация может разделить клетки на фазы G1 , S , G2 и M за счет увеличения размера (и увеличения коэффициента седиментации) с уменьшением разрешения между фазами G2 и M из-за клеточной гетерогенности и отсутствия отчетливое изменение размера. [1]
Более крупные клетки оседают быстрее, поэтому клетка в G2, которая испытала большее время роста, будет осаждаться быстрее, чем клетка в G1, и поэтому может быть фракционирована. Клетки, выращенные в суспензии, обычно легче вымываются, поскольку они не прилипают друг к другу и имеют округлую однородную форму. Однако некоторые типы прикрепившихся клеток можно обработать трипсином и ресуспендировать для элютриации, поскольку в суспензии они приобретают более округлую форму. [2]
Проточная цитометрия позволяет обнаруживать, подсчитывать и измерять физические и химические свойства клеток. Клетки суспендируют в жидкости и пропускают через проточный цитометр. Клетки по одной отправляются через лазерный луч, а рассеяние света измеряется детектором. Клетки или их компоненты могут быть помечены флуоресцентными маркерами, чтобы они излучали свет с разной длиной волны в ответ на воздействие лазера, что позволяет собирать дополнительные данные.