Количественная оценка вируса
Количественная оценка вирусов включает подсчет количества вирусов в определенном объеме для определения концентрации вируса. Он используется как в исследованиях, так и в разработках (НИОКР) в коммерческих и академических лабораториях, а также в производственных ситуациях, когда количество вируса на различных этапах является важной переменной. Например, производство вирусных вакцин , рекомбинантных белков с использованием вирусных векторов и вирусных антигенов требует количественного определения вируса для постоянной адаптации и мониторинга процесса с целью оптимизации выхода продукции и реагирования на постоянно меняющиеся требования и области применения. Примеры конкретных случаев, когда необходимо количественно определить известные вирусы, включают скрининг клонов,оптимизация множественности инфекций (MOI) и адаптация методов к культуре клеток. На этой странице обсуждаются различные методы, используемые в настоящее время для количественного определения вирусов в жидких образцах. Эти методы делятся на две категории: традиционные и современные методы. Традиционные методы — это стандартные отраслевые методы, которые использовались десятилетиями, но, как правило, медленны и трудоемки. Современные методы представляют собой относительно новые коммерчески доступные продукты и наборы, которые значительно сокращают время количественного определения. Это не претендует на то, чтобы быть исчерпывающим обзором всех потенциальных методов, а скорее репрезентативным срезом традиционных методов и новых, коммерчески доступных методов. Хотя для количественного определения вируса могут существовать и другие опубликованные методы, некоммерческие методы здесь не обсуждаются.
Анализы на основе бляшек являются стандартным методом, используемым для определения концентрации вируса с точки зрения инфекционной дозы . Анализы вирусных бляшек определяют количество бляшкообразующих единиц (БОЕ) в образце вируса, что является одним из показателей количества вируса. Этот анализ основан на микробиологическом методе, проводимом в чашках Петри или многолуночных планшетах. В частности, сливающийся монослой клеток- хозяев заражают вирусом в различных разведениях и покрывают полутвердой средой, такой как агар или карбоксиметилцеллюлоза., чтобы предотвратить беспорядочное распространение вирусной инфекции. Вирусная бляшка образуется, когда вирус заражает клетку внутри монослоя фиксированных клеток. [1] Инфицированная вирусом клетка лизирует и распространяет инфекцию на соседние клетки, где повторяется цикл от заражения до лизиса. Инфицированная клеточная область образует бляшку (область инфекции, окруженная неинфицированными клетками), которую можно увидеть в оптический микроскоп или визуально (слив покровную среду и добавив раствор кристаллического фиолетового на 15 минут, пока он не окрасит цитоплазму, Аккуратно удаляя излишки водой, вы увидите неокрашенные места расположения мертвых клеток [2] .). Образование налета может занять от 3 до 14 дней, в зависимости от анализируемого вируса. Бляшки обычно подсчитывают вручную, а результаты в сочетании с коэффициентом разбавления, используемым для приготовления планшета, используют для расчета количества единиц, образующих бляшки, на единицу объема образца (БОЕ/мл). Результат БОЕ/мл представляет количество инфекционных частиц в образце и основан на предположении, что каждая образовавшаяся бляшка представляет собой одну инфекционную вирусную частицу. [3] [4]
