Исетские казаки — потомки казаков из войска Ермака Тимофеевича, которые осели в районе реки Исети (напр. казачьи атаманы Давыд Андреев и Белошейкин) и в 1649 году по приказу из Тобольска основали тут первый острожек — Красный Бор; затем были основаны острожки Усть-Миасский, Исетский, Колчеданский (1650 год) и другие; до 1688 года народилось еще 15 новых городков. Т.е. на этот год уже стоит признать существование исетских казаков, которые до 1738 года сохраняли своё казацкое самоуправление и общинный быт.
В XVIII веке заселение Закамского края производилось особенно энергично, и в 1735 году, во время похода Румянцева с казаками для подавления возмущения башкир, была заложена крепость Оренбург (при устье реки Ори) обер-секретарем Кирилловым, в следующем году был предпринят 2-й поход к Сакмарскому городку и было построено несколько укреплений как в этом направлении, так и к северу от Оренбурга, со стороны Сибири. Преемники Кириллова, Татищев и Неплюев, окружили всю Башкирию кольцом укрепленных городков, и в 1738 году край этот был разделен на 2 провинции: Исетскую и Уфимскую; город Оренбург был перенесен к Красной Горе, a крепость была оставлена, но переименована в Орскую крепость. Так как казаки считались наиболее пригодным для колонизации края элементом, то все заботы правительства были направлены к увеличению их численности и к их организации. В это время и было образовано из обитавших в Исетской провинции, особое Исетское казачье войско; к ним же были присоединены поселявшиеся здесь же выходцы из внутренних губерний.
Одновременно с основанием крепостей в Оренбургском крае Неплюев не переставал заботиться и о прочном устройстве в нем казачьего населения, признавая его наиболее способным к охранению пограничных линий. На основании Высочайших указов Исетские казаки из Сибирского ведомства были выделены и переданы в Оренбургское. По силе указа 1736 г. с прежних пограничных линий были собраны люди «прежних служб» и направлены в Оренбургский край.