Аллофикоцианин ( «другой водорослевые синий белок», от греческого : ἄλλος (аллосо) означает «другой», φύκος (phykos) означающий «водоросль», и κυανός (kyanos) означает «синий») представляет собой белка из светособирающего фикобилипротеина семьи наряду с фикоцианином , фикоэритрином и фикоэритроцианином . Это вспомогательное оборудование пигмента к хлорофилл . Все фикобилипротеины растворимы в воде и поэтому не могут существовать внутри мембраны, как каротиноиды., но собираются, образуя кластеры, которые прикрепляются к мембране, называемые фикобилисомами . Аллофикоцианин поглощает и излучает красный свет (максимум 650 и 660 нм соответственно) и легко обнаруживается в цианобактериях (также называемых сине-зелеными водорослями ) и красных водорослях . Пигменты фикобилина обладают флуоресцентными свойствами, которые используются в наборах для иммуноанализа . В проточной цитометрии его часто называют АРС. Для эффективного использования в таких приложениях, как FACS , высокопроизводительный скрининг (HTS) и микроскопия , APC необходимо химически сшить.
Структурные характеристики [ править ]
Аллофикоцианин можно выделить из различных видов красных или сине-зеленых водорослей, каждый из которых продуцирует несколько разные формы молекулы. Он состоит из двух разных субъединиц (α и β), каждая из которых имеет один хромофор фикоцианобилина (PCB). Структура субъединицы APC была определена как (αβ) 3 . Молекулярная масса APC составляет 105000 Дальтон.
Спектральные характеристики [ править ]
| Максимальное поглощение | 652 нм |
| Дополнительный пик поглощения | 625 нм |
| Максимальный выброс | 657,5 нм |
| Сдвиг Стокса | 5,5 нм |
| Коэффициент угасания | 700000 M −1 см −1 |
| Квантовый выход | 0,68 |
| Яркость | 1,6 x 10 5 M −1 см −1 |
Сшитый APC
Как упоминалось выше, для того, чтобы APC можно было использовать в иммуноанализах, он должен быть сначала химически сшит, чтобы предотвратить его диссоциацию на составляющие его субъединицы, когда он находится в обычных физиологических буферах. [1] Обычный метод достижения этого заключается в деструктивном процессе, в котором обработанный тример APC химически разрушается в 8М мочевине, а затем ему дают возможность повторно связываться в физиологическом буфере. [2] Можно использовать альтернативный метод, который сохраняет структурную целостность тримера APC и позволяет получить более яркий и стабильный конечный продукт. [3]
Приложения [ править ]
Многие приложения и инструменты были разработаны специально для аллофикоцианина. Он обычно используется в иммуноанализах, таких как FACS , проточная цитометрия и высокопроизводительный скрининг, в качестве акцептора европия с помощью анализов передачи энергии резонанса флуоресценции с временным разрешением (TR-FRET) .
Ссылки [ править ]
- ^ Papageorgiou GC, Lagoyanni T (сентябрь 1983). «Влияние хаотропных электролитов на структуру и электронное возбуждение фикобилисом, сшитых глутаральдегидом и сложным диимидоэфиром». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Биоэнергетика . 724 (3): 323–32. DOI : 10.1016 / 0005-2728 (83) 90091-9 .
- ^ Yeh SW, Ong LJ, Кларк JH, Глейзер AN (январь 1987). «Флуоресцентные свойства аллофикоцианина и сшитого тримерного аллофикоцианина» . Цитометрия . 8 (1): 91–5. DOI : 10.1002 / cyto.990080113 . PMID 3100257 .
- ^ США предоставили 7256050 , «сшитый аллофикоцианин с высокой интенсивностью флуоресценции», переданный Columbia Biosciences Corp.
