Центрифугирование с плавучестью (также изопикническое центрифугирование или центрифугирование в равновесном градиенте плотности ) использует концепцию плавучести для разделения молекул в растворе по их разнице в плотности.
Выполнение
Исторически часто использовался раствор хлорида цезия (CsCl), но чаще используются градиенты плотности сахарозы или перколла . Образец помещается поверх раствора, а затем трубка вращается с очень высокой скоростью в течение длительного времени, иногда в течение нескольких дней. Молекулы CsCl плотно упаковываются ко дну, поэтому образуются даже слои разной плотности. Поскольку исходный раствор имел примерно одинаковую плотность, они переходят на уровень, на котором их плотность и плотность CsCl одинаковы, до чего они образуют резкую, отличительную полосу.
Разделение изотопов
Этот метод очень четко разделяет молекулы и настолько точен, что может даже отделить разные молекулярные изотопы друг от друга.
Разделение ДНК
Плавучесть большей части ДНК составляет 1,7 г / см3, что равно плотности 6М раствора CsCl. Плавучая плотность ДНК изменяется в зависимости от содержания в ней GC . Термин « сателлитная ДНК » относится к небольшим полосам повторяющихся последовательностей ДНК с различным составом оснований, плавающим выше (богатые А + Т) или ниже (богатые Г + С) основного компонента ДНК.
Смотрите также
Рекомендации
дальнейшее чтение
- Schildkraut, Carl L .; Мармур, Юлий; Доти, Пол (1962). «Определение основного состава дезоксирибонуклеиновой кислоты по ее плавучей плотности в CsCl». Журнал молекулярной биологии . 4 (6): 430–443. DOI : 10.1016 / S0022-2836 (62) 80100-4 . ISSN 0022-2836 .
- Джеймс Грин (25 июня 1998 г.). Принципы и методики рекомбинантной ДНК . CRC Press. С. 278–. ISBN 978-0-8247-9989-2.