Гемоцитометр

Эта статья требует дополнительных ссылок для проверки . Пожалуйста, помогите улучшить эту статью , добавив цитаты из надежных источников . Материал, не полученный от источника, может быть оспорен и удален.
Найти источники: «Гемоцитометр» - новости · газеты · книги · ученый · JSTOR ( декабрь 2009 г. ) ( Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения )

Гемоцитометр . Два полуотражающих прямоугольника - это счетные камеры.

Загрузка камеры

Сетка гемоцитометра (см. Таблицу)

Гемоцитометр (или гемоцитометр) является счетно-камера устройство первоначально разработан и обычно используется для клеток подсчета крови . ^[1]

Гемоцитометр был изобретен Луи-Шарлем Малассезом и состоит из толстого предметного стекла микроскопа с прямоугольным углублением, которое создает камеру точного объема. На этой камере выгравирована сетка перпендикулярных линий, нанесенная лазером . Устройство тщательно продумано так, чтобы была известна площадь, ограниченная линиями, и глубина камеры. Таким образом, наблюдая за определенной областью сетки, можно подсчитать количество ячеек или частиц в определенном объеме жидкости и, таким образом, вычислить концентрацию ячеек в жидкости в целом. Хорошо используемый тип гемоцитометра - это счетная камера Нойбауэра . ^[2]

Для других целей используются другие типы гемоцитометров с другими линейками. Постановления Фукса-Розенталя, обычно используемые для подсчета спинномозговой жидкости, постановления Говарда Молда, используемые для плесени на пищевых продуктах и упаковках пищевых продуктов, постановления Макмастера на слайде для яиц, используемые для подсчета микробных яиц в фекалиях, постановление камеры Наджотта для подсчета низких уровней белых клеток компоненты тромбоцитов с пониженным содержанием клеток, Palmer Nanoplankton управляет для подсчета меньших планктонов. Счетчик Петрова-Хауссера, использующий улучшенные линейки Нойбауэра, используется для подсчета бактерий и сперматозоидов и предлагается с переменной глубиной камеры. Клетка Седжвика-Рафтера, управляющая гемоцитометром, в первую очередь предназначена для использования в микроскопии питьевой воды.

Принципы [ править ]

Область сетки улучшенного гемоцитометра с линейкой Нейбауэра состоит из девяти квадратов 1 x 1 мм (1 мм ² ). Они подразделяются на три направления; 0,25 x 0,25 мм (0,0625 мм ² ), 0,25 x 0,20 мм (0,05 мм ² ) и 0,20 x 0,20 мм (0,04 мм ² ). Центральный квадрат далее подразделяется на квадраты 0,05 x 0,05 мм (0,0025 мм ² ). Поднятые края гемоцитометра удерживают покровное стекло на 0,1 мм от размеченной сетки, придавая каждому квадрату определенный объем (см. Рисунок справа). ^[3]

Размеры	Площадь	Объем на глубине 0,1 мм
1 х 1 мм	1 мм ²	100 нл
0,25 x 0,25 мм	0,0625 мм ²	6,25 нл
0,25 x 0,20 мм	0,05 мм ²	5 нЛ
0,20 x 0,20 мм	0,04 мм ²	4 нЛ
0,05 x 0,05 мм	0,0025 мм ²	0,25 нл

Использование [ править ]

Чтобы использовать гемоцитометр, сначала убедитесь, что специальное покровное стекло, снабженное счетной камерой, правильно расположено на поверхности счетной камеры. Когда две стеклянные поверхности находятся в надлежащем контакте , можно наблюдать кольца Ньютона . Если это так, суспензию клеток наносят на край покровного стекла, чтобы засосать в пустоту за счет капиллярного действия, которое полностью заполняет камеру образцом. Количество клеток в камере можно определить прямым подсчетом с использованием микроскопа , а визуально различимые клетки можно подсчитать по-разному. Количество ячеек в камере используется для расчета концентрации или плотности ячеек в смеси.образец исходит из. Это количество клеток в камере, деленное на объем камеры, который известен с самого начала с учетом любых разбавлений и сокращений счета:

${\mbox{concentration of cells in original mixture}}=\left({\frac {\mbox{number of cells counted}}{({\mbox{proportion of chamber counted}})({\mbox{volume of squares counted}})}}\right)\left({\frac {\mbox{volume of diluted sample}}{\mbox{volume of original mixture in sample}}}\right)$ ^[4]

${\mbox{cells/mL}}=\left({\frac {({\mbox{number of cells counted}})({\mbox{dilution factor}})}{({\mbox{number of large squares counted}})({\mbox{volume of 1 large square}})}}\right)\times 10000$

где объем разбавленной пробы (после разбавления), деленный на объем исходной смеси в пробе (до разбавления), является коэффициентом разбавления . Например, если объем исходной смеси составлял 20 мкл, и она была разбавлена один раз (путем добавления 20 мкл разбавителя), то второй член в скобках равен 40 мкл / 20 мкл. Объем подсчитываемых квадратов соответствует тому, который указан в таблице вверху, в зависимости от размера (см. Рисунок справа). Подсчитанное количество ячеек - это сумма всех ячеек, подсчитанных по квадратам в одной камере. Пропорция подсчитываемых ячеек применяется, если подсчитываются не все внутренние квадраты в пределах установленного квадрата (то есть, если подсчитываются только 4 из 20 в угловом квадрате, то этот член будет равен 0,2).

Идентифицируются части гемоцитометра (если смотреть сбоку).

В большинстве случаев используются только четыре больших угловых квадрата. Ячейки, которые находятся на верхней и левой линиях или касаются их, подсчитываются, но те, которые находятся на правой или нижней линиях или касаются их, игнорируются. ^[5]

Требования [ править ]

Пустая сетка гемоцитометра при 100-кратном увеличении.

Исходную суспензию необходимо тщательно перемешать перед взятием пробы. Это гарантирует, что образец является репрезентативным, а не просто артефактом конкретной области исходной смеси, из которой он был взят.

Следует использовать соответствующее разбавление смеси с учетом количества подсчитываемых клеток. Если образец недостаточно разбавлен, клетки будут переполнены, и их будет трудно подсчитать. Если он слишком разбавлен, размера пробы будет недостаточно, чтобы сделать строгие выводы о концентрации в исходной смеси.

Результаты можно сравнить, выполнив повторный тест на второй камере. Если они отличаются более чем в 2 раза на ошибку подсчета (квадратный корень из подсчета ^[6] ), метод отбора пробы может быть ненадежным (например, исходная смесь не была тщательно перемешана).

Счетная камера должна заполняться капиллярно после того, как крышка камеры (специальное покровное стекло с сертифицированной толщиной и плоскостностью) была установлена на место. Это позволяет избежать риска осаждения / прилипания клеток к стеклу или испарения некоторого объема до того, как покровное стекло будет помещено сверху, что приведет к завышению концентрации клеток. Седиментация представляет собой меньшую проблему с бактериями, но испарение, которое более распространено в лабораториях с кондиционированным воздухом с низкой влажностью, все же должно быть сведено к минимуму.

Приложения [ править ]

Анализ крови : для пациентов с аномальными клетками крови, когда автоматические счетчики не работают.
Количество сперматозоидов
Культура клеток: при пересеве или регистрации роста клеток с течением времени.
Пивоварение : для приготовления дрожжей.
Подсчет клеток фитопланктона
Обработка клеток для последующего анализа: точное количество клеток необходимо во многих тестах ( ПЦР , проточная цитометрия ), в то время как для некоторых других требуется высокая жизнеспособность клеток.
Измерение размера клетки: на микрофотографии реальный размер клетки может быть выведен путем масштабирования его до ширины квадрата гемоцитометра, которая известна. ^[7]

Ссылки [ править ]

^ Абшер, Марлен (1973). «Подсчет гемоцитометром». Культура тканей . С. 395–397. DOI : 10.1016 / B978-0-12-427150-0.50098-X . ISBN 9780124271500.
^ "Рис. 8. Вид улучшенного слайда гемоцитометра с линейкой Нойбауэра. (A) Вид сверху ..." ResearchGate . Проверено 29 марта 2018 года .
^ «Гемоцитометр: размеры квадрата» .
^ «Основы использования гемоцитометра» .
^ Strober W (2001). «Мониторинг роста клеток». В Coligan JE, Bierer BE, Margulies DH, Sherach EM, Strober W. (ред.). Текущие протоколы в иммунологии . 5 . США: John Wiley & Sons. п. А.2А.1. DOI : 10.1002 / 0471142735.ima03as21 . ISBN 0471142735. PMID 18432653 .
↑ Шапиро, Ховард (31 января 2001 г.). «очень редкие события: как низко вы можете спуститься?» .
^ «Измерение размера клеток с помощью гемоцитометра» . Архивировано из оригинала на 2012-06-29 . Проверено 2 июня 2013 .

Внешние ссылки [ править ]

Онлайн-упражнение - Подсчет дрожжей в счетных камерах Neubauer Superior или Thoma
Калькулятор гемоцитометра онлайн

[Absher1973-1] Абшер, Марлен (1973). «Подсчет гемоцитометром». Культура тканей . С. 395–397. DOI : 10.1016 / B978-0-12-427150-0.50098-X . ISBN 9780124271500.

[neubauer-2] "Рис. 8. Вид улучшенного слайда гемоцитометра с линейкой Нойбауэра. (A) Вид сверху ..." ResearchGate . Проверено 29 марта 2018 года .

[3] «Гемоцитометр: размеры квадрата» .

[4] «Основы использования гемоцитометра» .

[5] Strober W (2001). «Мониторинг роста клеток». В Coligan JE, Bierer BE, Margulies DH, Sherach EM, Strober W. (ред.). Текущие протоколы в иммунологии . 5 . США: John Wiley & Sons. п. А.2А.1. DOI : 10.1002 / 0471142735.ima03as21 . ISBN 0471142735. PMID 18432653 .

[6] Шапиро, Ховард (31 января 2001 г.). «очень редкие события: как низко вы можете спуститься?» .

[7] «Измерение размера клеток с помощью гемоцитометра» . Архивировано из оригинала на 2012-06-29 . Проверено 2 июня 2013 .

[1]