Вторичный сюжет (кинетика)

В ферментных кинетиках , А вторичный участок использует перехват или наклон от нескольких участков Лайнуивер-Burk найти дополнительные кинетические константы. ^{[1] [2]}

Например, когда набор кривых v на [S] для фермента с механизмом пинг-понга (изменяющийся субстрат A, фиксированный субстрат B) нанесен на график Лайнуивера-Берка , будет получен набор параллельных линий.

Следующее уравнение Михаэлиса-Ментен связывает начальную скорость реакции v ₀ с концентрациями субстрата [A] и [B]:

${\ displaystyle {\ begin {align} {\ frac {1} {v_ {0}}} & = {\ frac {K_ {M} ^ {A}} {v _ {\ max} {[} A {]} }} + {\ frac {K_ {M} ^ {B}} {v _ {\ max} {[} B {]}}} + {\ frac {1} {v _ {\ max}}} \ end {выровнено }}}$

Y-точка пересечения этого уравнения равна следующему:

${\ displaystyle {\ begin {align} {\ mbox {y-intercept}} = {\ frac {K_ {M} ^ {B}} {v _ {\ max} {[} B {]}}} + {\ гидроразрыв {1} {v _ {\ max}}} \ end {align}}}$

Y-точку пересечения определяют при нескольких различных фиксированных концентрациях субстрата B (и различных субстратах A). Затем значения точки пересечения по оси Y наносятся на график в зависимости от 1 / [B] для определения константы Михаэлиса для субстрата B , как показано на рисунке справа. ^[3] Наклон равен деленному на, а точка пересечения равна 1 .${\ displaystyle K_ {M} ^ {B}}$${\ displaystyle K_ {M} ^ {B}}$${\ displaystyle v _ {\ max}}$${\ displaystyle v _ {\ max}}$

Вторичный график ферментной системы Пероксидаза хрена и о- фенилендиамин (с перекисью водорода в качестве второго субстрата)

Вторичный сюжет в исследованиях ингибирования [ править ]

Вторичный участок также может быть использован , чтобы найти постоянную удельную inhbition, K _I .

Для конкурентного ингибитора фермента кажущаяся константа Михаэлиса равна следующему:

${\ displaystyle {\ begin {align} {\ mbox {очевидное}} K_ {m} = K_ {m} \ times \ left (1 + {\ frac {[I]} {K_ {I}}} \ right) \ конец {выровнено}}}$

Таким образом, наклон графика Лайнуивера-Берка равен:

${\displaystyle {\begin{aligned}{\mbox{slope}}={\frac {K_{m}}{v_{\max }}}\times \left(1+{\frac {[I]}{K_{I}}}\right)\end{aligned}}}$

Если создать вторичный график, состоящий из значений наклона из нескольких графиков Лайнуивера-Берка с различной концентрацией ингибитора [I], можно найти константу конкурентного ингибирования. Наклон вторичного участка , деленный на перехвате равен 1 / K _I . Этот метод позволяет найти константу K _I , даже если значения константы Михаэлиса и v _max неизвестны.

Ссылки [ править ]