Вибратома представляет собой инструмент , используемый , чтобы сократить тонкие ломтики материала (хотя, как правило , толще , чем те , ломтики разреза в парафин образцов с использованием микротома ). Он похож на микротом, но использует вибрирующее лезвие для прорезания ткани . Амплитудой вибрации , скоростью и углом лезвия можно управлять. Фиксированные или свежие кусочки ткани помещают в агарозу с низкой температурой гелеобразования . Полученный блок агарозы, содержащий кусочек ткани, затем прикрепляют к металлическому блоку и разрезают, погружая в воду или буферную баню. Затем отдельные срезы собирают с помощью тонкой кисти и переносят на предметные стекла или многолуночные планшеты для окрашивания. [1]
Vibratome - это не общее название, а зарегистрированная торговая марка Leica Biosystems Richmond, Inc. в США.
Преимущества [ править ]
- Нет необходимости обезвоживать ткани перед заливкой, что снижает потерю клеточных компонентов
- Никаких грязных парафиновых заливок
- Позволяет заделать ткань агарозой для обеспечения стабильности резки
- Нет необходимости депарафинизировать и регидратировать срезы перед иммуноокрашиванием
- Никаких высоких температур или жестких химических обработок, которые могут привести к нестабильности антигена.
- Не требуются специальные лезвия микротома
- Меньше шансов появления артефактов, вызванных заливкой парафином или замерзанием
- Снижение аутофлуоресценции тканей из-за предотвращения фиксации формалином и заделки парафина
- Меньше времени ожидания от взятия пробы ткани до времени иммунной метки
- Позволяет напрямую создавать свободно плавающие срезы для иммуногистохимии.
Недостатки [ править ]
- Вместо лент нарезаются и собираются отдельные секции, которые более деликатны и сложны в обращении.
- Срезы обычно толще, чем полученные парафиновыми методами; проникновение антител и других реагентов может быть медленнее, поэтому может потребоваться более длительное время инкубации. Кроме того, с помощью микроскопа может быть трудно получить изображение толстых срезов. (Однако толстые срезы совместимы, а иногда даже желательны при использовании конфокальной микроскопии.)
- Закрепление секций вибратома на предметных стеклах может быть трудным или невозможным из-за толщины секций. [2]
Ссылки [ править ]
- ^ «Усовершенствованные методы подготовки острых срезов головного мозга взрослых и стареющих животных» (PDF) . Архивировано из оригинала 17 июля 2011 года . Проверено 1 июня 2009 года . CS1 maint: обескураженный параметр ( ссылка )
- ^ http://www4.ncsu.edu/~rgfranks/FRANKS%20LAB%20PROTOCOLS/immuno%20histio%20chemistry/robertson%20vbratmimuno.doc [ постоянная мертвая ссылка ]
