Светлопольная микроскопия - самый простой из всех методов освещения в оптической микроскопии . Освещение образца передается (то есть освещается снизу и наблюдается сверху) белым светом , а контраст в образце вызывается ослаблением прошедшего света в плотных областях образца. Светлопольная микроскопия - это простейший из ряда методов, используемых для освещения образцов в световых микроскопах, и благодаря своей простоте он стал популярным. Типичный вид изображения, полученного с помощью светлопольной микроскопии, представляет собой темный образец на ярком фоне, отсюда и название.
Световой путь [ править ]
Световой путь светопольного микроскопа чрезвычайно прост, никаких дополнительных компонентов не требуется, кроме обычной установки светового микроскопа. Таким образом, световой путь состоит из:
- источник просвечивающего света, обычно галогенная лампа в штативе микроскопа;
- конденсатора объектив , который фокусирует свет от источника света на образец;
- объектив , который собирает свет от образца и увеличивает изображение;
- окуляры и / или камеру для просмотра образца изображения.
В светлопольной микроскопии для освещения образца может использоваться критическое или келеровское освещение .
Производительность [ править ]
Светлопольная микроскопия обычно имеет низкий контраст с большинством биологических образцов, так как немногие из них в значительной степени поглощают свет. Окрашивание часто требуется для увеличения контраста, что не позволяет использовать его на живых клетках во многих ситуациях. Освещение в светлом поле полезно для образцов, которые имеют собственный цвет, например хлоропластов в растительных клетках.
Яркое освещение, контраст образца зависит от поглощения света в образце
Освещение кроссполяризованным светом , контраст образца достигается за счет вращения поляризованного света через образец
Темнопольное освещение, контраст образца достигается за счет рассеянного им света
Фазово-контрастное освещение, контраст образца возникает из-за интерференции света разной длины через образец
Ярко-полевая микроскопия является стандартным методом световой микроскопии, и , следовательно , увеличение ограничено разрешающей способностью возможной с длиной волны от видимого света .
Преимущества [ править ]
- Простота настройки, требуется только базовое оборудование.
- Живые клетки можно увидеть в микроскопы с ярким полем. [1]
Ограничения [ править ]
- Очень низкая контрастность большинства биологических образцов.
- Практический предел увеличения с помощью светового микроскопа составляет около 1300X. Хотя возможно большее увеличение, становится все труднее поддерживать четкость изображения по мере увеличения увеличения. [2]
- Низкое видимое оптическое разрешение из-за размытия не в фокусе материала.
- Образцы, которые от природы являются бесцветными и прозрачными, плохо видны, например, многие типы клеток млекопитающих. Эти образцы часто необходимо окрашивать перед просмотром. Образцы, которые имеют свой собственный цвет, можно увидеть без подготовки, например, наблюдение за потоком цитоплазмы в клетках Chara .
Улучшения [ править ]
- Уменьшение или увеличение количества источника света за счет ирисовой диафрагмы .
- Использование масляной иммерсионной линзы объектива и специального иммерсионного масла, нанесенного на стеклянную крышку над образцом. Иммерсионное масло имеет такое же преломление, что и стекло, и улучшает разрешение наблюдаемого образца.
- Использование методов окрашивания образцов для использования в микробиологии , таких как простые окраски ( метиленовый синий , сафранин , кристаллический фиолетовый ) и дифференциальные окраски (отрицательные окраски, окраски жгутиков, окраски эндоспор).
- Использование цветного (обычно синего) или поляризационного фильтра на источнике света для выделения деталей, не видимых при белом свете. Использование фильтров особенно полезно для проб минералов .
Ссылки [ править ]
Ресурсы библиотеки по светлопольной микроскопии |
|
- Усовершенствованная световая микроскопия, т. 1 Принципы и основные свойства Максимилиана Плуты, Elsevier (1988)
- Усовершенствованная световая микроскопия, т. 2 Специализированные методы Максимилиана Плуты, Elsevier (1989)
- Введение в световую микроскопию, С. Брэдбери, Б. Брейсгердл, BIOS Scientific Publishers (1998)
- Микробиология: принципы и исследования Жаклин Г. Блэк, John Wiley & Sons, Inc. (2005)
- Литература по микроскопии и визуализации
- Примечания
- ^ Альбертс, Брюс; и другие. (2002). Молекулярная биология клетки (4-е изд.). Нью-Йорк: Наука о гирляндах. ISBN 0-8153-3218-1.
- ^ "Микроскопия: Типы микроскопии" (PDF) . Общественный колледж Хиллсборо . Проверено 19 апреля 2017 года .