В цитометрии , компенсация представляет собой математическая коррекция перекрытия сигнала между каналами спектров излучения различных флюорохромов . [1] [2]
Эти фотоны , испускаемые флюорохромы имеют различную энергию и длины волн , а также проточные цитометры используют фотоэлектронные умножители (ИЙ) для того , чтобы преобразовать фотоны в электроны , детектор может регистрировать сигнал из более чем одного флуорохрома. Это создает перекрытие сигналов (перетекание), которое не может быть устранено оптической системой и должно быть исправлено электронным способом. Компенсация может быть произведена с помощью различного программного обеспечения для проточной цитометрии, такого как Flowjo, Flowlogic, Kaluza и т. Д. Первая компенсация данных была сделана в 1977 году Майклом Локеном и соавт. во время двухцветного эксперимента, в котором спленоциты мыши окрашивали флуоресцеином и родамином .[3]
Перетекание
Когда одна ячейка отмечена двумя или более флуорохромами, добавленная яркость одного флуорохрома к другому создает значительный фоновый шум и влияет на силу сигнала. Это называется вторичным эффектом. Физическое перекрытие между различными спектрами излучения флуорохромов может активировать рецепторы, отличные от тех, которые предназначены для данной длины волны. Возможность исправления этого проистекает из того факта, что перекрытие является линейной функцией, поэтому измеренный сигнал можно усреднить и, таким образом, скорректировать. Эта поправка называется компенсацией.
Компенсация необходима для того, чтобы иметь возможность различать популяции клеток. Это делается путем измерения спектрального перекрытия различных флуорохромов и использования измеренных значений для создания матрицы. Затем матрица инвертируется и дает фактические значения компенсации. Затем проточный цитометр использует эти значения для коррекции перекрытия в каждом детекторе для каждого цвета. [4]
Рекомендации
- ^ Редерер, М. (2001-11-01). «Спектральная компенсация для проточной цитометрии: артефакты визуализации, ограничения и предостережения» . Цитометрия . 45 (3): 194–205. DOI : 10.1002 / 1097-0320 (20011101) 45: 3 <194 :: АИД-cyto1163> 3.0.co; 2-C . ISSN 0196-4763 . PMID 11746088 .
- ^ Багвелл, CB; Адамс, EG (1993-03-20). «Компенсация перекрытия спектров флуоресценции для любого количества параметров проточной цитометрии». Летопись Нью-Йоркской академии наук . 677 : 167–184. DOI : 10.1111 / j.1749-6632.1993.tb38775.x . ISSN 0077-8923 . PMID 8494206 .
- ^ Локен, MR; Парки, ДР; Герценберг, Л.А. (июль 1977 г.). «Двухцветная иммунофлуоресценция с использованием клеточного сортировщика с активацией флуоресценции» . Журнал гистохимии и цитохимии . 25 (7): 899–907. DOI : 10.1177 / 25.7.330738 . ISSN 0022-1554 . PMID 330738 .
- ^ Родерер, М. (2001-11-01). «Спектральная компенсация для проточной цитометрии: артефакты визуализации, ограничения и предостережения» . Цитометрия . 45 (3): 194–205. DOI : 10.1002 / 1097-0320 (20011101) 45: 3 <194 :: АИД-cyto1163> 3.0.co; 2-C . ISSN 0196-4763 . PMID 11746088 .
Внешние ссылки
- https://web.archive.org/web/20041205055418/http://cyto.mednet.ucla.edu/Protocols/flow.htm
- http://www.bioinformin.net/cytometry/compensation.php
- https://www.bdbiosciences.com/documents/Compensation_Multicolor_TechBulletin.pdf
- https://bitesizebio.com/13696/introduction-to-spectral-overlap-and-compensation-flow-cytometry-protocol/
- http://www.abcam.com/protocols/fluorescence-compensation-in-flow-cytometry