Тест фиксации комплемента

Цель	обнаруживает специфический антиген или антитело

Тест фиксации комплемента - это иммунологический медицинский тест, который может использоваться для обнаружения присутствия либо специфического антитела, либо специфического антигена в сыворотке пациента в зависимости от того, происходит ли фиксация комплемента . Он широко использовался для диагностики инфекций, особенно микробов, которые нелегко обнаружить методами культивирования, а также при ревматических заболеваниях. Однако в клинических диагностических лабораториях его в значительной степени вытеснили другие серологические методы, такие как ELISA, и методы обнаружения патогенов на основе ДНК, особенно ПЦР .

Процесс

Система комплемента - это система белков сыворотки, которые реагируют с комплексами антиген-антитело. Если эта реакция происходит на поверхности клетки, это приведет к образованию трансмембранных пор и, следовательно, разрушению клетки. Основные этапы теста фиксации комплемента следующие: ^[1]

Сыворотка отделяется от пациента.
У пациентов естественно разные уровни белков комплемента в сыворотке крови. Чтобы свести на нет какие-либо эффекты, которые это может иметь на тест, белки комплемента в сыворотке пациента должны быть разрушены и заменены известным количеством стандартизованных белков комплемента.
1. Сыворотка нагревается таким образом, что все белки комплемента - но ни одно из антител - в ней разрушаются. (Это возможно, потому что белки комплемента гораздо более подвержены разрушению под воздействием тепла, чем антитела.)
2. К сыворотке добавляют известное количество стандартных белков комплемента. (Эти белки часто получают из сыворотки морской свинки.)
Интересующий антиген добавляется в сыворотку.
В сыворотку добавляют эритроциты овцы (sRBC) ^[2], которые были предварительно связаны с антителами против sRBC. Тест считается отрицательным, если раствор в этот момент становится розовым, и положительным в противном случае.

Если сыворотка пациента содержит антитела против интересующего антигена, они будут связываться с антигеном на этапе 3 с образованием комплексов антиген-антитело. Белки комплемента вступят в реакцию с этими комплексами и истощатся. Таким образом, когда комплексы sRBC-антитело добавляются на этапе 4, в сыворотке не останется никакого комплемента. Однако, если антитела против интересующего антигена отсутствуют, комплемент не будет истощен, и он будет реагировать с комплексами sRBC-антитело, добавленными на этапе 4, лизируя sRBC и проливая их содержимое в раствор, тем самым окрашивая раствор в розовый цвет. . ^[1]

Тест на антиген

Хотя обнаружение антител является наиболее распространенным форматом тестирования, также можно проверить наличие антигена. В этом случае сыворотка пациента дополняется специфическим антителом, чтобы вызвать образование комплексов; добавление комплемента и индикатора sRBC выполняется, как и раньше.

Полуколичественное тестирование

Тест можно сделать количественным, установив серию разведений сыворотки пациента и определив самый высокий фактор разведения, который все равно даст положительный результат теста CF. Этот коэффициент разбавления соответствует титру .

использованная литература

^ ^a ^b «Анимационная викторина 4 - Тест на фиксацию дополнения» . Highered.mheducation.com .
^ С. Ваман Rao (2005). Иммунология: учебник . Alpha Science Int'l Ltd. стр. 112–. ISBN 978-1-84265-255-8. Проверено 3 декабря 2010 года .

внешние ссылки

Дополнение + фиксация + тесты по медицинским предметным рубрикам Национальной медицинской библиотеки США (MeSH)
http://medmicro.atwebpages.com/cfix.htm

[animation-1] «Анимационная викторина 4 - Тест на фиксацию дополнения» . Highered.mheducation.com .

[Rao2005-2] С. Ваман Rao (2005). Иммунология: учебник . Alpha Science Int'l Ltd. стр. 112–. ISBN 978-1-84265-255-8. Проверено 3 декабря 2010 года .

[1]