Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Для использования в других целях, см ELISA (значения) .
ELISA
ELISA TMB.jpg
ELISA, разрабатываемый с TMB
MeSHD004797

Связанный с ферментом иммуносорбентный анализ ( ELISA ) ( / ɪ л aɪ г ə / , / ˌ я л aɪ г ə / ) является широко используемым аналитической биохимии анализа , впервые описанный Engvall и Perlmann в 1971 году [1] В анализе используется твердофазный иммуноферментный анализ (EIA) для обнаружения присутствия лиганда (обычно белка) в жидком образце с использованием антител, направленных против измеряемого белка. ИФА использовался как диагностическийинструмент в медицине, патологии растений и биотехнологии , а также для контроля качества в различных отраслях промышленности.

В самой простой форме ELISA антигены из исследуемого образца прикрепляются к поверхности. Затем на поверхность наносят подходящее антитело, чтобы оно могло связать антиген. Это антитело связывается с ферментом, а затем все несвязанные антитела удаляются. На заключительном этапе добавляется вещество, содержащее субстрат фермента . Если связывание имело место, последующая реакция дает детектируемый сигнал, чаще всего изменение цвета.

В проведении ELISA участвует по крайней мере одно антитело со специфичностью к определенному антигену. Образец с неизвестным количеством антигена иммобилизован на твердой подложке (обычно микротитровальной пластине из полистирола ) неспецифично (посредством адсорбции на поверхность) или специфически (посредством захвата другим антителом, специфичным к тому же антигену, в «сэндвич «ИФА»). После иммобилизации антигена добавляется детекторное антитело, образующее комплекс с антигеном. Детектирующее антитело может быть ковалентно связано с ферментом или само может быть обнаружено вторичным антителом , которое связано с ферментом посредством биоконъюгирования . Между каждым шагом тарелку обычно моют мягкимраствор моющего средства для удаления неспецифически связанных белков или антител. После последней стадии промывки планшет проявляется путем добавления ферментативного субстрата для получения видимого сигнала , который указывает количество антигена в образце.

Следует отметить, что ELISA может выполнять другие формы анализов связывания лиганда вместо строго «иммуно», хотя название носило оригинальное «иммуно» из-за общего использования и истории развития этого метода. По существу, для этого метода требуется любой лигирующий реагент, который может быть иммобилизован на твердой фазе, а также реагент для обнаружения, который будет специфически связываться и использовать фермент для генерации сигнала, который может быть правильно определен количественно. В промежутках между промывками только лиганд и его специфически связывающиеся аналоги остаются специфически связанными или «иммуносорбированными» за счет взаимодействий антиген-антитело.в твердую фазу, а неспецифические или несвязанные компоненты вымываются. В отличие от других форматов спектрофотометрических лабораторных анализов, где одна и та же реакционная лунка (например, кювета) может быть повторно использована после промывки, в планшетах для ELISA продукты реакции иммуно сорбированы на твердой фазе, которая является частью планшета, и поэтому их нелегко использовать .

Принцип [ править ]

В качестве аналитического биохимического анализа и метода «влажной лаборатории» ИФА включает обнаружение аналита (т.е. определенного вещества, присутствие которого количественно или качественно анализируется) в жидкой пробе методом, который продолжает использовать жидкие реагенты во время анализа. (т. е. контролируемая последовательность биохимических реакций, которая будет генерировать сигнал, который можно легко количественно оценить и интерпретировать как меру количества аналита в образце), который остается жидким и остается внутри реакционной камеры или колодца, необходимого для удержания реагентов. [2] [3]Это контрастирует с методами «сухой лаборатории», в которых используются сухие полоски. Даже если образец является жидким (например, измеренная маленькая капля), заключительный этап обнаружения в «сухом» анализе включает считывание высушенной полоски такими методами, как рефлектометрия, и не требует камеры сдерживания реакции для предотвращения перетекания или смешивания между образцами. . [4]

В качестве гетерогенного анализа ELISA разделяет некоторые компоненты аналитической реакционной смеси путем адсорбции определенных компонентов на твердой фазе, которая физически иммобилизована. В ELISA жидкий образец добавляется к неподвижной твердой фазе с особыми связывающими свойствами, за ним следуют несколько жидких реагентов, которые последовательно добавляются, инкубируются и промываются с последующим некоторым оптическим изменением (например, проявлением цвета продуктом ферментативной реакции). реакция) в конечной жидкости в лунке, из которой измеряется количество аналита. Количественное «считывание» обычно основано на определении интенсивности проходящего света с помощью спектрофотометрии., который включает количественное определение пропускания света определенной длины волны через жидкость (а также прозрачное дно лунки в формате многолуночного планшета). [2] [3] Чувствительность обнаружения зависит от усиления сигнала во время аналитических реакций. Поскольку ферментативные реакции являются хорошо известными процессами амплификации, сигнал генерируется ферментами, которые связаны с реагентами обнаружения в фиксированных пропорциях, чтобы обеспечить точную количественную оценку, и, следовательно, название «связанные с ферментом». [5]

Аналит также называют лигандом, потому что он будет специфически связываться или лигировать с реагентом обнаружения, таким образом, ELISA попадает в более широкую категорию анализов связывания лиганда . [2] Лиганд-специфический связывающий реагент «иммобилизован», то есть обычно наносится и сушится на прозрачном дне, а иногда и на боковой стенке лунки [6] (здесь неподвижная «твердая фаза» / «твердый субстрат» в противоположность на твердые микрочастицы / шарики, которые можно смыть), который обычно представляет собой многолуночный планшет, известный как «планшет для ELISA». Обычно, как и в других формах иммуноанализа , специфичность антиген - антителоТип реакции используется потому, что легко получить антитело, специфичное против антигена в массе, в качестве реагента. В качестве альтернативы, если сам аналит является антителом, его антиген-мишень можно использовать в качестве связывающего реагента. [7]

История [ править ]

До разработки ELISA единственным вариантом проведения иммуноанализа был радиоиммуноанализ - метод с использованием радиоактивно меченных антигенов или антител. В радиоиммуноанализе радиоактивность обеспечивает сигнал, который указывает, присутствует ли в образце конкретный антиген или антитело. Радиоиммуноанализ был впервые описан в научной статье Розалин Сассман Ялоу и Соломон Берсон, опубликованной в 1960 году [8].

Поскольку радиоактивность представляет собой потенциальную угрозу для здоровья, была предпринята попытка найти более безопасную альтернативу. Подходящей альтернативой радиоиммуноанализу будет замена радиоактивного сигнала нерадиоактивным сигналом. Когда ферменты (такие как пероксидаза хрена ) реагируют с соответствующими субстратами (такими как ABTS или TMB ), происходит изменение цвета, которое используется в качестве сигнала. Однако сигнал должен быть связан с присутствием антитела или антигена, поэтому фермент должен быть связан с подходящим антителом. Этот процесс связывания был независимо разработан Стратисом Аврамеасом и Дж. Б. Пирсом. [9]Поскольку необходимо удалить любое несвязавшееся антитело или антиген путем промывки, антитело или антиген необходимо зафиксировать на поверхности контейнера; т.е. должен быть приготовлен иммуносорбент. Методика достижения этого была опубликована Wide и Jerker Porath в 1966 году [10].

В 1971 году Питер Перлманн и Ева Энгвалл из Стокгольмского университета в Швеции, а также Антон Шуурс и Бауке ван Веемен в Нидерландах независимо опубликовали статьи, в которых эти знания были объединены в методы проведения EIA / ELISA. [11] [12]

Традиционный ELISA обычно включает хромогенные репортеры и субстраты, которые вызывают заметное изменение цвета, указывающее на присутствие антигена или аналита. В более новых методах, подобных ELISA, используются флуорогенные , электрохемилюминесцентные и количественно-оппозиционные репортеры ПЦР для создания поддающихся количественной оценке сигналов. Эти новые репортеры могут иметь различные преимущества, включая более высокую чувствительность и мультиплексирование . [13] [14] С технической точки зрения, новые анализы этого типа не являются строго ELISA, поскольку они не связаны с ферментом, а вместо этого связаны с некоторым неферментативным репортером. Однако, учитывая, что общие принципы этих анализов во многом схожи, их часто относят к той же категории, что и ELISA.

В 2012 году сверхчувствительный тест ELISA на основе ферментов с использованием наночастиц в качестве хромогенного репортера смог дать цветовой сигнал невооруженным глазом при обнаружении простых аттограмм анализируемого вещества. Синий цвет отображается для положительных результатов, а красный - для отрицательных. Обратите внимание, что это обнаружение может подтвердить только присутствие или отсутствие аналита, но не фактическую концентрацию. [15]

Типы [ править ]

Существует множество тестов ELISA для определенных молекул, в которых используются соответствующие антитела. Тесты ELISA разбиты на несколько типов тестов в зависимости от того, как аналиты и антитела связаны и используются. [16] [17] Здесь описаны основные типы. [18]

Прямой ИФА [ править ]

Диаграмма прямого ИФА

Этапы прямого ИФА [19] следуют следующему механизму:

  • Забуференный раствор исследуемого антигена добавляется в каждую лунку (обычно 96-луночные планшеты) микротитрационного планшета , где ему дается время для прилипания к пластику за счет зарядовых взаимодействий.
  • В каждую лунку добавляют раствор не реагирующего белка, такого как бычий сывороточный альбумин или казеин , чтобы покрыть любую пластиковую поверхность в лунке, которая остается не покрытой антигеном.
  • Первичное антитело с прикрепленным (конъюгированного) фермента добавляют, который специфически связывается с антигеном испытуемого покрытия скважины.
  • Затем добавляется субстрат для этого фермента. Часто этот субстрат меняет цвет при реакции с ферментом.
  • Чем выше концентрация первичного антитела, присутствующего в сыворотке, тем сильнее изменение цвета. Часто для получения количественных значений силы цвета используют спектрометр.

Фермент действует как усилитель; даже если остается связанным лишь несколько антител, связанных с ферментом, молекулы фермента будут производить много сигнальных молекул. В рамках здравого смысла фермент может производить цвет бесконечно долго, но чем больше антител связывается, тем быстрее будет развиваться цвет. Основным недостатком прямого ИФА является то, что метод иммобилизации антигена не специфичен; когда в качестве источника тестируемого антигена используется сыворотка, все белки в образце могут прилипать к лунке микротитрационного планшета, поэтому небольшие концентрации аналита в сыворотке должны конкурировать с другими белками сыворотки при связывании с поверхностью лунки. Сэндвич-метод или непрямой ELISA обеспечивает решение этой проблемы за счет использования «захватывающего» антитела, специфичного для тестируемого антигена, для извлечения его из молекулярной смеси сыворотки. [цитата необходима ]

ИФА может проводиться в качественном или количественном формате. Качественные результаты дают простой положительный или отрицательный результат (да или нет) для образца. Граница между положительным и отрицательным значениями определяется аналитиком и может быть статистической. Два или три раза стандартное отклонение (ошибка, присущая тесту) часто используется, чтобы отличить положительные образцы от отрицательных. В количественном ИФА оптическая плотность (ОП) образца сравнивается со стандартной кривой, которая обычно представляет собой серийное разведение раствора целевой молекулы с известной концентрацией. Например, если тестовая проба дает ОП, равную 1,0, точка на стандартной кривой, которая дает ОП = 1,0, должна иметь ту же концентрацию аналита, что и образец. [ необходима цитата ]

Использование и значение названий «непрямой ИФА» и «прямой ИФА» различаются в литературе и на веб-сайтах в зависимости от контекста эксперимента. Когда анализируется присутствие антигена, название «прямой ИФА» относится к ИФА, в котором используется только меченое первичное антитело, а термин «непрямой ИФА» относится к ИФА, в котором антиген связывается первичным антителом. который затем обнаруживается меченым вторичным антителом. В последнем случае сэндвич-ELISA четко отличается от непрямого ELISA. Когда «первичное» антитело представляет интерес, например, в случае анализа иммунизации, это антитело непосредственно обнаруживается вторичным антителом, и термин «непрямой ELISA» применяется к настройке с двумя антителами.[ необходима цитата ]

Сэндвич-ИФА [ править ]

Сэндвич-ИФА . (1) Планшет покрыт захватывающим антителом; (2) добавляется образец, и любой присутствующий антиген связывается, захватывая антитело; (3) добавляется детектирующее антитело, которое связывается с антигеном; (4) добавляется связанное с ферментом вторичное антитело, которое связывается с детектирующим антителом; (5) добавляется субстрат, который ферментом превращается в детектируемую форму.

«Сэндвич» ELISA используется для обнаружения антигена в образце. [20] Шаги:

  1. Готовят поверхность, с которой связывается известное количество захватывающего антитела.
  2. Любые неспецифические сайты связывания на поверхности блокируются.
  3. Образец, содержащий антиген, наносят на планшет и захватывают антителом.
  4. Планшет промывают для удаления несвязавшегося антигена.
  5. Добавляется специфическое антитело, которое связывается с антигеном (отсюда и «бутерброд»: антиген застревает между двумя антителами). Это первичное антитело также может находиться в сыворотке донора, который должен быть протестирован на реактивность по отношению к антигену.
  6. Связанные с ферментом вторичные антитела применяются в качестве детектирующих антител, которые также специфически связываются с Fc-областью антитела (неспецифично).
  7. Планшет промывают для удаления несвязавшихся конъюгатов антитело-фермент.
  8. Добавляется химическое вещество, которое фермент превращает его в цветной, флуоресцентный или электрохимический сигнал.
  9. Поглощение, флуоресценция или электрохимический сигнал (например, ток) лунок планшета измеряют для определения присутствия и количества антигена.

Изображение справа включает использование вторичного антитела, конъюгированного с ферментом, хотя с технической точки зрения в этом нет необходимости, если первичное антитело конъюгировано с ферментом (что может быть прямым ИФА). Однако использование конъюгата вторичного антитела позволяет избежать дорогостоящего процесса создания ферментно-связанных антител для каждого антигена, который может потребоваться обнаружить. При использовании связанного с ферментом антитела, которое связывает Fc-область других антител, это же связанное с ферментом антитело можно использовать в различных ситуациях. Без первого слоя «захватывающего» антитела любые белки в образце (включая белки сыворотки) могут конкурентно адсорбироваться на поверхности планшета, снижая количество иммобилизованного антигена.Использование очищенного специфического антитела для прикрепления антигена к пластику устраняет необходимость очищать антиген от сложных смесей перед измерением, упрощая анализ и повышая специфичность и чувствительность анализа. Сэндвич-ELISA, используемый для исследований, часто требует проверки из-за риска получения ложноположительных результатов.[21]

Конкурентный ИФА [ править ]

Третье использование ELISA - конкурентное связывание. Этапы этого ИФА несколько отличаются от первых двух примеров:

Немеченые антитела инкубируют в присутствии его антигена (образца).

  1. Эти связанные комплексы антитело / антиген затем добавляют в лунку, покрытую антигеном.
  2. Планшет промывают, поэтому несвязанные антитела удаляются. (Чем больше антигена в образце, тем больше образуется комплексов Ag-Ab и, следовательно, меньше несвязанных антител, доступных для связывания с антигеном в лунке, следовательно, «конкуренция».)
  3. Вторичное антитело , специфический к первичному антителу, добавляются. Это второе антитело связано с ферментом.
  4. Добавляется субстрат, а оставшиеся ферменты вызывают хромогенный или флуоресцентный сигнал.
  5. Реакция останавливается, чтобы предотвратить возможное насыщение сигнала.

Некоторые конкурентные наборы ELISA включают в себя связанный с ферментом антиген, а не антитело, связанное с ферментом. Меченый антиген конкурирует за сайты связывания первичного антитела с образцом антигена (немеченым). Чем меньше антигена в образце, тем больше меченого антигена остается в лунке и тем сильнее сигнал.

Обычно антиген не помещается в лунку первым.

Для обнаружения антител к ВИЧ лунки микротитрационного планшета покрывают антигеном ВИЧ. Используются два специфических антитела: одно конъюгировано с ферментом, а другое присутствует в сыворотке (если сыворотка положительна на антитело). Кумулятивная конкуренция происходит между двумя антителами за один и тот же антиген, что приводит к появлению более сильного сигнала. В эти лунки добавляют сыворотку, подлежащую тестированию, и инкубируют при 37 ° C, а затем промывают. Если антитела присутствуют, происходит реакция антиген-антитело. Для меченных ферментом специфических антител к ВИЧ не остается антигена. Эти антитела остаются свободными при добавлении и смываются во время промывки. Субстрат добавлен, но на него не действует фермент, поэтому положительный результат не показывает изменения цвета.

Обратный ИФА [ править ]

Четвертый тест ELISA не использует традиционные лунки. Этот тест оставляет антигены взвешенными в тестовой жидкости. [22] [23]

  1. Немеченые антитела инкубируют в присутствии его антигена (образец).
  2. Обеспечивается достаточный инкубационный период, чтобы антитела могли связываться с антигенами.
  3. Затем образец пропускают через контейнер для мусора. Это может быть пробирка или специально разработанный проточный канал. К поверхности контейнера или канала мусорщика привязаны «антигены мусорщика». Они могут быть идентичными или достаточно похожими на первичные антигены, которые будут связывать свободные антитела.
  4. Контейнер для скавенджера должен иметь достаточную площадь поверхности и достаточно времени, чтобы позволить антигенам-скавенджеру связываться со всеми избыточными антителами, введенными в образец.
  5. Образец, который теперь содержит меченые и связанные антитела, пропускают через детектор. Это устройство может быть проточным цитометром или другим устройством, которое подсвечивает метки и регистрирует ответ.

Этот тест позволяет пометить и подсчитать несколько антигенов одновременно. Это позволяет идентифицировать определенные штаммы бактерий по двум (или более) разным цветным меткам. Если на ячейке присутствуют оба тега, то это конкретный штамм. Если присутствует только один, его нет.

Этот тест, как правило, проводится по одному за раз и не может быть проведен с микротитровальным планшетом. Необходимое оборудование обычно менее сложное и может использоваться в полевых условиях.

Обычно используемые ферментные маркеры [ править ]

В следующей таблице перечислены ферментные маркеры, обычно используемые в анализах ELISA, которые позволяют измерять результаты анализа после завершения.

  • OPD ( дигидрохлорид о- фенилендиамина) становится желтым для определения HRP ( пероксидазы хрена ), которая часто используется в качестве конъюгированного белка . [24]
  • TMB (3,3 ', 5,5'-тетраметилбензидин) становится синим при обнаружении HRP и становится желтым после добавления серной или фосфорной кислоты. [24]
  • ABTS (2,2'-Азинобис [3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота] -диаммониевая соль) становится зеленым при обнаружении HRP. [24]
  • PNPP ( п- нитрофенилфосфат, двунатриевая соль) становится желтым при обнаружении щелочной фосфатазы . [24]

Приложения [ править ]

Человеческий анти-IgG, сэндвич-ELISA с двойными антителами

Поскольку ELISA может быть выполнен для оценки либо наличия антигена, либо наличия антитела в образце, он является полезным инструментом для определения концентраций антител в сыворотке (например, с тестом на ВИЧ [25] или вирусом Западного Нила ). Он также нашел применение в пищевой промышленности для выявления потенциальных пищевых аллергенов , таких как молоко , арахис , грецкие орехи , миндаль и яйца [26], а также в качестве серологического анализа крови на целиакию . [27] [28] ELISA может также использоваться в токсикологии как быстрый предварительный скрининг определенных классов лекарств.

Планшет для иммуноферментного анализа

ELISA был первым скрининговым тестом, широко используемым на ВИЧ из-за его высокой чувствительности. В ELISA сыворотку человека разводят в 400 раз и наносят на планшет, к которому прикреплены антигены ВИЧ. Если в сыворотке присутствуют антитела к ВИЧ, они могут связываться с этими антигенами ВИЧ. Затем планшет промывают для удаления всех остальных компонентов сыворотки. Специально приготовленное «вторичное антитело» - антитело, которое связывается с другими антителами - затем наносится на планшет с последующей промывкой. Это вторичное антитело заранее химически связано с ферментом.

Таким образом, планшет будет содержать фермент пропорционально количеству вторичного антитела, связанного с планшетом. Применяется субстрат для фермента, и катализ ферментом приводит к изменению цвета или флуоресценции. Результаты ELISA представлены в виде числа; наиболее спорным аспектом этого теста является определение точки отсечения между положительным и отрицательным результатом.

Точка отсечения может быть определена путем сравнения ее с известным стандартом. Если тест ELISA используется для скрининга наркотиков на рабочем месте, устанавливается пороговая концентрация, например, 50 нг / мл, и будет подготовлен образец, содержащий стандартную концентрацию аналита. Неизвестные, которые генерируют более сильный сигнал, чем известный образец, являются «положительными». Те, которые генерируют более слабый сигнал, считаются «отрицательными».

Доктор Деннис Е Бидуэллы и Алистер Феллер создали тест ELISA для обнаружения различного рода заболеваний, такие как денге , малярия , болезнь Шагаса , болезнь Johne в , и других. [29] ELISA-тесты также используются для диагностики in vitro в медицинских лабораториях . Другие варианты использования ELISA включают:

  • обнаружение антител к микобактериям при туберкулезе
  • обнаружение ротавируса в кале
  • обнаружение маркеров гепатита В в сыворотке крови
  • обнаружение маркеров гепатита С в сыворотке крови
  • обнаружение энтеротоксин из E.coli , в кале
  • обнаружение антител к ВИЧ в образцах крови
  • обнаружение антител SARS-CoV-2 в образцах крови [30]
Блок-схема: ELISA и COVID-19 doi.org/10.7717/peerj.10180

См. Также [ править ]

  • Агглютинация-ПЦР
  • Иммуноскрининг
  • Испытание бокового потока
  • Магнитный иммуноферментный анализ
  • микротитровальный планшет
  • Тест нейтрализации уменьшения зубного налета
  • Считыватель планшетов
  • Анализ секреции

Примечания и ссылки [ править ]

  1. ^ Engvall, E (1972-11-22). «Иммуноферментный анализ, Элиза» . Журнал иммунологии . 109 (1): 129–135. ISSN  0022-1767 . PMID  4113792 .
  2. ^ a b c Msagati, TA (2017). Пищевая судебная экспертиза и токсикология . Джон Вили и сыновья. п. PT229. ISBN 9781119101383.
  3. ^ а б Кроутер, младший (1995). «Глава 2: Основные принципы ИФА» . ИФА: теория и практика . Методы молекулярной биологии. 42 . Humana Press. С. 35–62. DOI : 10.1385 / 0-89603-279-5: 1 . ISBN 0896032795. PMID  7655571 .
  4. Перейти ↑ Sonntag, O. (1993). «Глава 1: Введение в сухую химию» . In van der Vliet, PC (ed.). Сухая химия: анализ с реагентами, связанными с носителем . Лабораторные методы в биохимии и молекулярной биологии. 25 . С. 1–6. ISBN 9780080887364.
  5. ^ Се, Y.-HP; Рао, К. (2017). Нильсен, СС (ред.). Анализ пищевых продуктов . Springer. С. 491–98. ISBN 9783319457765.
  6. ^ Schasfoort, RBM (2017). Справочник по поверхностному плазмонному резонансу (2-е изд.). Королевское химическое общество. п. 296. ISBN. 9781782627302.
  7. ^ Elgert, KD (2009). Иммунология: понимание иммунной системы . Джон Вили и сыновья. С. 149–50. ISBN 9780470081570.
  8. ^ Ялоу, Розалин S .; Берсон, Соломон А. (1960). «Иммуноанализ эндогенного инсулина плазмы у человека» . Журнал клинических исследований . 39 (7): 1157–75. DOI : 10.1172 / JCI104130 . PMC 441860 . PMID 13846364 .  
  9. ^ Lequin, RM (2005). «Иммуноферментный анализ (EIA) / иммуноферментный анализ (ELISA)» . Клиническая химия . 51 (12): 2415–8. DOI : 10,1373 / clinchem.2005.051532 . PMID 16179424 . 
  10. ^ Широкий, Лейф; Порат, Джеркер (1966). «Радиоиммуноанализ белков с использованием антител, связанных с сефадексом». Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - общие предметы . 130 (1): 257–60. DOI : 10.1016 / 0304-4165 (66) 90032-8 .
  11. ^ Энгвалл, Ева; Перлманн, Питер (1971). «Иммуноферментный анализ (ELISA), количественный анализ иммуноглобулина G». Иммунохимия . 8 (9): 871–4. DOI : 10.1016 / 0019-2791 (71) 90454-X . PMID 5135623 . 
  12. ^ Ван Weemen, BK; Schuurs, AHWM (1971). «Иммуноанализ с использованием конъюгатов антиген-фермент» . Письма FEBS . 15 (3): 232–236. DOI : 10.1016 / 0014-5793 (71) 80319-8 . PMID 11945853 . S2CID 37147723 .  
  13. ^ Ленг, SX; McElhaney, JE; Уолстон, JD; Xie, D .; Федарко, НС; Кучель, Г.А. (2008). «ELISA и мультиплексные технологии для измерения цитокинов в исследованиях воспаления и старения» . Журналы геронтологии серии A: биологические науки и медицинские науки . 63 (8): 879–84. DOI : 10.1093 / Герона / 63.8.879 . PMC 2562869 . PMID 18772478 .  
  14. ^ Адлер, Майкл; Шульц, Свен; Шпенглер, Марк (2009). «Количественная оценка цитокинов в разработке лекарств: сравнение чувствительных платформ иммуноанализа» . Химера Биотех.
  15. ^ де ла Рика, Роберто; Стивенс, Молли М. (2012). «Плазмонный ИФА для сверхчувствительного обнаружения биомаркеров болезней невооруженным глазом». Природа Нанотехнологии . 7 (12): 821–4. Bibcode : 2012NatNa ... 7..821D . DOI : 10.1038 / nnano.2012.186 . hdl : 10044/1/21938 . PMID 23103935 . 
  16. Перейти ↑ R., Crowther, J. (1995). ИФА: теория и практика . Методы молекулярной биологии. 42 . Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. С. 1–218. DOI : 10.1385 / 0-89603-279-5: 1 . ISBN 978-0896032798. OCLC  32130600 . PMID  7655571 .
  17. ^ РОБЕРТ., HNASKO (2016). ELISA (SOFTCOVER переиздание ред.). [Место публикации не указано]: HUMANA. ISBN 978-1493953851. OCLC  960834982 .
  18. ^ "Что такое ИФА?" . Системы НИОКР . Проверено 31 января 2020 года .
  19. ^ Спенс, Захари (2018-10-18). "Биохимия 8-е изд - Джереми М. Берг" : 83. Цитировать журнал требует |journal=( помощь )
  20. ^ Шмидт, SD; Маццелла, MJ; Никсон, РА; Мэтьюз, PM (2012). Измерение Aβ с помощью иммуноферментного анализа . Методы молекулярной биологии. 849 . С. 507–27. DOI : 10.1007 / 978-1-61779-551-0_34 . ISBN 978-1-61779-550-3. PMID  22528112 .
  21. ^ Крагструп, Вт Вт; Воруп-Йенсен, Томас; Делеуран, Бент; Хвид, Мален (2013). «Простой набор этапов проверки выявляет и удаляет ложные результаты в сэндвич-иммуноферментном иммуноферментном анализе, вызванные антителами против IgG животных в плазме от пациентов с артритом» . SpringerPlus . 2 (1): 263. DOI : 10,1186 / 2193-1801-2-263 . PMC 3695686 . PMID 23875127 .  
  22. ^ 7767404 , Charbonnet, Derrick, «Патент США: 7767404 - Аппарат и метод для одноэтапного иммуносорбентного анализа для одного и нескольких аналитов», выпущенный 3 августа 2010 г. 
  23. ^ 8735142 , Шарбоннет, Деррик и Норман Скотт Эванс, «Патент США: 8735142 - Системы и методы иммуносорбентных анализов для одного и нескольких аналитов», опубликованный 27 мая 2014 г. 
  24. ^ a b c d "Ферментные субстраты для ELISA" . Thermo Fisher Scientific - США . Проверено 6 июня 2018 .
  25. ^ Энциклопедия MedlinePlus : ИФА / Вестерн-блот-тесты на ВИЧ
  26. ^ "Партнерство по пищевым аллергенам" (пресс-релиз). FDA. Январь 2001 . Проверено 20 августа 2015 года .
  27. ^ Sblattero, D .; Берти, I .; Trevisiol, C .; Marzari, R .; Tommasini, A .; Bradbury, A .; Fasano, A .; Ventura, A .; Не, Т. (2000). «Человеческая рекомбинантная тканевая трансглутаминаза ELISA: инновационный диагностический тест на целиакию». Американский журнал гастроэнтерологии . 95 (5): 1253–7. PMID 10811336 . 
  28. ^ Порчелли, Брунетта; Ферретти, Фабио; Виндини, Карла; Терцуоли, Люсия (2014). «Оценка теста для скрининга и диагностики целиакии» . Журнал клинического лабораторного анализа . 30 (1): 65–70. DOI : 10.1002 / jcla.21816 . PMC 6807240 . PMID 25385391 .  
  29. ^ Гриффин, JFT; Spittle, E .; Роджерс, CR; Liggett, S .; Купер, М .; Баккер, Д .; Баннантин, JP (2005). «Иммуноферментный иммуноглобулин G1 для диагностики болезни Джона у благородного оленя (Cervus elaphus)» . Клиническая и вакцинная иммунология . 12 (12): 1401–9. DOI : 10,1128 / CDLI.12.12.1401-1409.2005 . PMC 1317074 . PMID 16339063 .  
  30. ^ Дхамад, AE; Абдал Рида, Массачусетс (2020). «COVID-19: молекулярные и серологические методы обнаружения» . PeerJ . 8 : e10180. DOI : 10,7717 / peerj.10180 . PMC 7547594 . PMID 33083156 .  

Внешние ссылки [ править ]

  • ELISA в Национальной медицинской библиотеке США по медицинским предметным рубрикам (MeSH)
  • «Введение в ELISA Activity» - начальный обзор ELISA, используемого для обнаружения ВИЧ, включая анимацию в Университете Аризоны.