Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску

Анализ связывания лиганда ( LBA ) - это анализ или аналитическая процедура, которая основана на связывании молекул лиганда с рецепторами , антителами или другими макромолекулами . [1] Метод обнаружения используется для определения присутствия и степени образования комплексов лиганд-рецептор, и это обычно определяется электрохимически или с помощью метода обнаружения флуоресценции . [2] Этот тип аналитического теста может использоваться для проверки наличия в образце целевых молекул, которые, как известно, связываются с рецептором. [3]

Существует множество типов анализов связывания лигандов, как радиоактивных, так и нерадиоактивных. [4] [5] [6] По сути, анализы связывания лиганда представляют собой расширенный набор анализов радиоактивного связывания , которые концептуально противоположны радиоиммуноанализу (РИА). Некоторые более новые типы называются анализами «смешай и измерий», потому что они не требуют отделения связанного от несвязанного лиганда. [5]

Анализы связывания лиганда используются в основном в фармакологии для различных целей. В частности, несмотря на наличие в организме эндогенных рецепторов , гормонов и других нейромедиаторов , фармакологи используют анализы для создания лекарств, которые являются селективными или имитируют эндогенно обнаруженные клеточные компоненты. С другой стороны, такие методы также доступны для создания антагонистов рецепторов, чтобы предотвратить дальнейшие каскады. [7] Такие достижения дают исследователям возможность не только количественно определять гормоны и рецепторы гормонов, но также вносить важную фармакологическую информацию в разработку лекарств и планы лечения.[8]

История [ править ]

Исторически методы анализа связывания лиганда широко использовались для количественного определения концентрации гормона или гормональных рецепторов в плазме или в ткани. Лиганд -связывающего анализа методология количественно концентрация гормона в исследуемом материале путем сравнения влияния тестируемого образца на результаты различных количеств известного белка ( лиганд ).

Основы, для которых был построен анализ связывания лигандов, являются результатом Карла Ландштейнера в 1945 году и его работы по иммунизации животных путем производства антител к определенным белкам. [9] Работа Ландштейнера продемонстрировала, что технология иммуноанализа позволяет исследователям проводить анализ на молекулярном уровне. О первом успешном анализе связывания лиганда сообщили в 1960 году Розалин Сассман Ялоу и Соломон Берсон . [9] Они исследовали взаимодействие связывания инсулина и инсулино-специфических антител в дополнение к разработке первого радиоиммуноанализа.(РИА) для инсулина. Эти открытия предоставили ценную информацию о чувствительности и специфичности белковых гормонов, обнаруженных в жидкостях крови. [9] Ялоу и Берсон получили Нобелевскую премию по медицине за свои достижения. Благодаря развитию технологии РИА исследователи смогли выйти за рамки использования радиоактивности и вместо этого использовать жидкие и твердофазные, конкурентные и иммунорадиометрические анализы. [9] Как прямой результат этих грандиозных открытий, исследователи продолжили продвижение анализов связывания лигандов во многих аспектах в области биологии, химии и т.п.

Приложения [ править ]

Анализы связывания лиганда позволяют измерить взаимодействия, которые происходят между двумя молекулами, такие как связывание с белками, а также степень сродства (слабая, сильная или отсутствие связи), для которой реагенты связываются вместе. [10] Существенные аспекты анализов связывания включают, помимо прочего, уровень концентрации реагентов или продуктов ( см. Раздел о радиоактивных веществах ), поддержание константы равновесия реагентов на протяжении всего анализа, а также надежность и достоверность связанных реакций. [10] Хотя тесты связывания просты, они не могут предоставить информацию о том, влияет ли тестируемое соединение на функцию мишени. [11]

Методы радиоактивного лиганда [ править ]

Радиолиганды используются для измерения связывания лиганда с рецепторами и в идеале должны иметь высокое сродство, низкое неспецифическое связывание, высокую специфическую активность для обнаружения низкой плотности рецептора и специфичность рецептора. [7]

Уровни радиоактивности радиолиганда (на моль) называются удельной активностью (SA), которая измеряется в Ки / ммоль. [12] Фактическая концентрация радиолиганда определяется конкретной смесью исходных материалов, для которой радиолиганд был получен (от производителей). [12] Следующее уравнение определяет фактическую концентрацию:

[12]

Привязка насыщенности [ править ]

Анализ насыщения используется в различных типах тканей, таких как фракции частично очищенной плазмы из гомогенатов тканей , клетки, трансфицированные клонированными рецепторами, и клетки, которые либо находятся в культуре, либо выделены перед анализом. [7] Анализ связывания с насыщением может определять сродство и плотность рецептора. Это требует, чтобы выбранная концентрация для нового лиганда определялась эмпирически.

Для этого типа экспериментов используются две общие стратегии: [7] Увеличение количества добавляемого радиолиганда при поддержании как постоянной удельной активности, так и постоянной концентрации радиолиганда, или снижение удельной активности радиолиганда за счет добавления немеченый лиганд. [7]

Заговор Скэтчарда [ править ]

Пример сюжета Скэтчарда

Скэтчарда (Розенталь участок) может быть использован , чтобы показать сродство радиолиганды. На графике этого типа соотношение «связанный / свободный радиолиганд» отображается против связанного радиолиганда. Наклон линии равен отрицательная обратная константа аффинности (K). Пересечение линии с осью X является оценкой Bmax. [7] График Скэтчарда можно стандартизировать относительно соответствующего эталона, чтобы можно было проводить прямое сравнение плотности рецепторов в различных исследованиях и тканях. [7]Этот примерный график показывает, что радиолиганд связывается с одним сродством. Если бы лиганд должен был связываться с несколькими сайтами, имеющими разную аффинность к радиолигандам, то вместо этого на графике Скэтчарда была бы показана вогнутая линия. [7]

Подгонка нелинейной кривой [ править ]

Программы подбора нелинейной кривой, такие как анализ данных равновесного связывания (EBDA) и LIGAND, используются для расчета оценок параметров связывания из экспериментов по насыщению и конкурентному связыванию. [13] EBDA выполняет первоначальный анализ, который преобразует измеренную радиоактивность в молярные концентрации и создает на основе данных наклоны Хилла и преобразования Скэтчарда . Затем LIGAND может использовать анализ, проведенный EBDA, для оценки конкретной модели привязки. [13]

Обязанность соревнований [ править ]

Связывание с конкуренцией используется для определения наличия селективности в отношении конкретного лиганда для подтипов рецепторов, что позволяет определять плотность и долю каждого подтипа в ткани. [7] Кривые конкуренции получают путем построения графика специфического связывания, которое представляет собой процент от общего связывания, в зависимости от логарифмической концентрации конкурирующего лиганда. [7] Крутая кривая конкуренции обычно указывает на связывание с одной популяцией рецепторов, тогда как неглубокая кривая или кривая с четкими точками перегиба указывает на множественные популяции сайтов связывания. [13]

Анализы нерадиоактивного связывания [ править ]

Несмотря на различные методы, используемые для нерадиоактивных анализов, они требуют, чтобы лиганды проявляли характеристики связывания, аналогичные его радиоактивному эквиваленту. Таким образом, результаты как нерадиоактивных, так и радиоактивных анализов останутся неизменными. [5] Одно из самых больших различий между анализами радиоактивных и нерадиоактивных лигандов заключается в опасностях для здоровья человека. Радиоактивные анализы вредны тем, что производят радиоактивные отходы; тогда как в анализах нерадиоактивных лигандов используется другой метод, чтобы избежать образования токсичных отходов. Эти методы включают, помимо прочего, поляризацию флуоресценции (FP), резонансный перенос энергии флуоресценции (FRET) и поверхностный плазмонный резонанс.(SPR). Чтобы измерить процесс связывания лиганд-рецептор, большинство нерадиоактивных методов требует, чтобы мечение не мешало молекулярным взаимодействиям. [5]

Поляризация флуоресценции [ править ]

Поляризация флуоресценции (FP) является синонимом анизотропии флуоресценции . Этот метод измеряет изменение скорости вращения флуоресцентно меченного лиганда после его связывания с рецептором. [5] Поляризованный свет используется для возбуждения лиганда и измеряется количество испускаемого света. [5] Деполяризация излучаемого света зависит от лиганда, связанного (например, с рецептором). Если лиганд не связан, он будет иметь большую деполяризацию (лиганд может быстро вращаться, вращая свет). Если лиганд связан, объединенный больший размер приводит к более медленному вращению и, следовательно, к снижению деполяризации. [5] Преимущество этого метода в том, что он требует только одного шага маркировки. Однако этот метод менее точен при низких наномолярных концентрациях. [5]

Перенос энергии резонанса флуоресценции [ править ]

Диаграмма Яблонского FRET

Передача энергии резонанса флуоресценции (FRET) использует энергию, передаваемую между донорными и акцепторными молекулами, которые находятся в непосредственной близости. [5] FRET использует флуоресцентно меченый лиганд, как и FP. [5] Передача энергии внутри FRET начинается с возбуждения донора. [5] диполь-дипольное взаимодействие между донором и акцептором молекулы передачи энергии от донора к молекуле акцептора. [5] Если лиганд связан с комплексом рецептор-антитело, то акцептор будет излучать свет. [5] При использовании FRET очень важно, чтобы между акцептором и донором было расстояние меньше 10 нм, в дополнение к перекрытиюспектр поглощения между акцептором и донором, и что антитело не мешает и не блокирует сайт связывания лиганда. [5]

Поверхностный плазмонный резонанс [ править ]

Конфигурация поверхностного плазмонного резонанса (SPR)

Поверхностный плазмонный резонанс (SPR) не требует мечения лиганда. [5] Вместо этого он работает, измеряя изменение угла, под которым поляризованный свет отражается от поверхности ( показатель преломления ). [5] Угол связан с изменением массы или толщины слоя, например с иммобилизацией лиганда, изменяющим угол резонанса, что увеличивает отраженный свет. [5] Устройство, для которого определяется SPR, включает в себя сенсорный чип, проточную ячейку, источник света, призму и датчик положения с фиксированным углом. [5]

Анализы связывания жидкой фазы [ править ]

Иммунопреципитация [ править ]

Жидкофазный анализ связывания лиганда при иммунопреципитации (IP) - это метод, который используется для очистки или обогащения определенного белка или группы белков с использованием антитела из сложной смеси. Экстракт поврежденной ткани или клеток смешивают с антителом против представляющего интерес антигена, которое продуцирует комплекс антиген-антитело. [14] При низкой концентрации антигена осаждение комплекса антиген-антитело может занять часы или даже дни, и становится трудно выделить небольшое количество образовавшегося осадка. [14]

Иммуноферментный анализ ( ELISA ) или вестерн-блоттинг - это два разных способа получения и анализа очищенного антигена (или нескольких антигенов). Этот метод включает очистку антигена с помощью прикрепленного антитела на твердой (гранулированной) подложке, такой как агарозная смола. [15] Иммобилизованный белковый комплекс может быть получен либо в одну стадию, либо последовательно. [15]

IP также можно использовать в сочетании с биосинтетическим радиоизотопным мечением. Используя эту комбинацию методов, можно определить, синтезируется ли конкретный антиген тканью или клеткой. [14]

Анализы твердофазного связывания [ править ]

Многолуночный планшет [ править ]

Набор многолуночных планшетов

Многолуночные планшеты представляют собой несколько чашек Петри, объединенных в один контейнер, с числом отдельных лунок от 6 до более 1536. Анализы на многолуночных планшетах удобны для работы с необходимыми дозировками и повторениями. [16] Существует широкий спектр типов пластин со стандартизированной площадью основания, поддерживающим оборудованием и системами измерения. [16] Электроды могут быть встроены в дно планшетов для сбора информации в результате анализов связывания. [9] Связывающие реагенты иммобилизуются на поверхности электрода и могут быть проанализированы. [9]

Многолуночные планшеты производятся для того, чтобы исследователи могли создавать и манипулировать различными типами анализов (например, биоанализы , иммуноанализы и т. Д.) В каждом многолуночном планшете. [16] Из-за вариабельности форматирования многолуночных планшетов нередко возникают артефакты. Артефакты возникают из-за разной среды, обнаруженной в разных лунках планшета, особенно у краев и в центре лунок. Такие эффекты известны как эффекты скважины, краевые эффекты и эффекты пластины. Таким образом, подчеркивается необходимость правильного размещения образцов для анализа как внутри, так и между каждым планшетом. [16]

Многолуночные планшеты часто используются при измерении активности биологического анализа in vitro или при измерении иммунореактивности с помощью иммуноанализов. [16] Артефактов можно избежать, поддерживая однородность планшета, применяя ту же дозу конкретной среды в каждой лунке, в дополнение к поддержанию норм атмосферного давления и температуры для снижения влажности. [16]

Переплет на бусине [ править ]

Анализы связывания лигандов на бусах представляют собой методы выделения основных белков, ДНК / РНК или других биомолекул, находящихся в неопределенных суспензиях, и могут использоваться во многих биохроматографических приложениях. Биоаффинные лиганды ковалентно связаны с гранулами диоксида кремния с концевыми отрицательно заряженными силанольными группами или гранулами полистирола и используются для выделения и очистки основных белков или адсорбции биомолекул. После связывания разделение выполняется центрифугированием (разделение по плотности) или притяжением магнитного поля (только для магнитных частиц). Гранулы можно промыть для обеспечения чистоты выделенной молекулы перед ее растворением методами ионного обмена. Методы прямого анализа, основанные на ферментативном / флуоресцентном обнаружении (например, HRP, флуоресцентный краситель), могут использоваться для определения на гранулах или количественного определения связанных биомолекул.[17] [18] [19]

Привязка к столбцу [ править ]

Фильтр [ править ]

Анализы с фильтром - это твердофазный анализ связывания лиганда, в котором используются фильтры для измерения сродства между двумя молекулами. В анализе связывания фильтров фильтры используются для улавливания клеточных мембран путем всасывания через них среды. [8] Этот быстрый метод реализуется с высокой скоростью, при которой может быть достигнута фильтрация и извлечение найденной фракции. [20] Промывка фильтров буфером удаляет остаточные несвязанные лиганды и любые другие присутствующие лиганды, которые способны отмываться от сайтов связывания. [8] Комплексы рецептор-лиганд, присутствующие во время промывки фильтра, не будут диссоциировать в значительной степени, потому что они будут полностью захвачены фильтрами. [8]Характеристики фильтра важны для каждой выполняемой работы. Более толстый фильтр полезен для более полного восстановления мелких частиц мембраны, но может потребовать более длительного времени промывки. [8] Рекомендуется предварительно обработать фильтры, чтобы улавливать отрицательно заряженные части мембраны. [8] Погрузка фильтра в раствор, который придаст фильтру положительный поверхностный заряд, привлечет отрицательно заряженные фрагменты мембраны. [8]

Привязка ячеек в реальном времени [ править ]

В этом типе анализа за связыванием лиганда с клетками следят во времени. Полученный сигнал пропорционален количеству лигандов, связанных с целевой структурой, часто с рецептором, на поверхности клетки. Информация о взаимодействии лиганд-мишень получается из изменения сигнала во времени, и могут быть вычислены кинетические параметры, такие как константа скорости ассоциации k a , константа скорости диссоциации k d и сродство K D. [21] Измеряя взаимодействие непосредственно на клетках, не требуется выделения целевого белка, что в противном случае может быть проблематичным, особенно для некоторых мембранных белков. [22] Чтобы гарантировать, что взаимодействие с намеченной структурой-мишенью измеряется, рекомендуются соответствующие биологические средства контроля, такие как клетки, не экспрессирующие целевую структуру.

Измерения в реальном времени с использованием подходов без меток или на основе меток использовались для анализа биомолекулярных взаимодействий на фиксированных или живых клетках. [23] [24]

Преимущество измерения взаимодействий лиганд-рецептор в режиме реального времени состоит в том, что для точного определения аффинности не требуется достигать равновесия связывания. [25]

Специфика связывания [ править ]

Эффекты лекарственного средства являются результатом их селективности связывания со свойствами макромолекул организма или сродства, с которым различные лиганды связываются с субстратом. [26] Более конкретно, специфичность и селективность лиганда к его соответствующему рецептору дает исследователям возможность изолировать и вызывать специфические эффекты лекарственного средства посредством манипуляции с концентрацией лиганда и плотностью рецептора. [26] Гормоны и нейротрансмиттеры являются важными эндогенными регуляторными лигандами, которые влияют на физиологические рецепторы в организме. [26] Лекарства, которые действуют на эти рецепторы, невероятно селективны, чтобы вызывать требуемые ответы от сигнальных молекул.[26]

Специфическое связывание относится к связыванию лиганда с рецептором, и возможно, что существует более одного сайта специфического связывания для одного лиганда. [27] Неспецифическое связывание относится к связыванию лиганда с чем-то другим, кроме назначенного ему рецептора, например с различными другими рецепторами или различными типами переносчиков в клеточной мембране. [27] Например, различные антагонисты могут связываться с рецепторами нескольких типов. В случае мускариновых антагонистов они также могут связываться с рецепторами гистамина. [27] Такие схемы связывания технически считаются специфическими, поскольку назначение лиганда специфично для нескольких рецепторов. Однако исследователи могут не сосредотачиваться на таком поведении по сравнению с другими связывающими факторами. [27]Тем не менее, неспецифическое связывание - очень важная информация, которую необходимо получить. Эти оценки измеряются путем изучения того, как лиганд связывается с рецептором, одновременно реагируя на замещающий агент (антагонист), который предотвращает специфическое связывание. [27]

Специфические типы связывания с лигандом и рецептором взаимодействий: [26]

Имитирует эндогенные эффектыПодавляет эндогенные эффекты
АгонистАнтагонист
Частичный агонистОтрицательные антагонисты (см .: Обратный агонист )

Технологические достижения [ править ]

Технологии анализа связывания лигандов продолжают развиваться в связи с увеличением скорости и сохранением экономичных процедур при сохранении и повышении точности и чувствительности. [9] Некоторые технологические достижения включают новые связывающие реагенты в качестве альтернативы антителам, [9] альтернативные растворы красителей и системы микропланшетов, а также разработку метода пропуска стадии фильтрации, которая требуется во многих процессах анализа связывания лигандов. [13]

Важной сигнальной молекулой в клетках является кальций (Ca 2+ ), который можно обнаружить с помощью ацетоксиметилового красителя Fluo-4 . Он связывается со свободными ионами Ca 2+ , которые, в свою очередь, немного увеличивают флуоресценцию Fluo-4 AM. [13] Недостатком состава красителя Fluo-4 является то, что требуется стадия промывки для удаления внеклеточного красителя, который может давать нежелательные фоновые сигналы. Например, мытье создает дополнительную нагрузку на клетки, а также требует времени, что препятствует своевременному анализу. [13]Недавно был разработан альтернативный раствор красителя и система микропланшетов под названием FLIPR® (флюорометрический считыватель планшетов), в котором используется реагент для анализа на кальций 3, который не требует стадии промывки. В результате изменение флуоресценции красителя можно наблюдать в режиме реального времени без задержки с помощью возбуждающего лазера и устройства с зарядовой связью . [13]

Многие анализы связывания лигандов перед скринингом требуют стадии фильтрации для разделения связанных и несвязанных лигандов. Недавно был разработан метод, называемый сцинтилляционным анализом близости (SPA), который исключает этот важный этап. Он работает через шарики кристаллической решетки, которые покрыты связующими лигандами молекулами и заполнены ионами церия . При стимуляции изотопом они испускают вспышки света, которые легко измерить. Лиганды метят радиоактивным изотопом с использованием 3H или 125I и вводят в анализ. Поскольку только радиолиганды, которые непосредственно связываются с шариками, инициируют сигнал, свободные лиганды не мешают во время процесса скрининга. [13]

Ограничения [ править ]

ПЭТ всего тела с использованием 18 F-FDG

По своей природе анализы должны проводиться в контролируемой среде in vitro, поэтому этот метод не дает информации о связывании рецепторов in vivo. Полученные результаты могут только подтвердить, что конкретный лиганд подходит рецептору, но анализы не дают возможности узнать распределение лиганд-связывающих рецепторов в организме.

Связывание лиганда и распределение рецепторов in vivo можно изучить с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), которая работает путем индукции радионуклида в лиганд, который затем высвобождается в организм изучаемого организма. Радиоактивно меченые лиганды пространственно локализуются с помощью ПЭТ-сканера для выявления участков в организме с высокими концентрациями рецепторов. [13]

См. Также [ править ]

  • Иммуноанализ

Ссылки [ править ]

  1. ^ Luckey JA, Дроссман Н, Kostichka Т, Смит Л. М. (1993). «Высокоскоростное секвенирование ДНК методом капиллярного гель-электрофореза» . Методы в энзимологии . 218 (12): 154–72. DOI : 10.1016 / 0076-6879 (93) 18014-4 . ISBN 9780121821197. PMID  8510530 .
  2. ^ Ninfa AJ, Балл DP, Benore М, ред. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Дирборн, Мичиган: Мичиганский университет.
  3. ^ Маллис KB, Faloona FA (1987). «Специфический синтез ДНК in vitro с помощью цепной реакции, катализируемой полимеразой». Методы в энзимологии . 155 (21): 335–50. DOI : 10.1016 / 0076-6879 (87) 55023-6 . PMID 3431465 . 
  4. ^ Sittampalam GS, Кал SD, Джанзен WP (октябрь 1997). «Высокопроизводительный скрининг: достижения в области технологий анализа». Текущее мнение в химической биологии . 1 (3): 384–91. DOI : 10.1016 / S1367-5931 (97) 80078-6 . PMID 9667878 . 
  5. ^ a b c d e f g h i j k l m n o p q r de Jong LA, Uges DR, Franke JP, Bischoff R (декабрь 2005 г.). «Анализы связывания рецептор-лиганд: технологии и приложения». Журнал хроматографии. B, Аналитические технологии в биомедицине и науках о жизни . 829 (1–2): 1–25. DOI : 10.1016 / j.jchromb.2005.10.002 . PMID 16253574 . 
  6. ^ Джозеф Р. Лакович. (1991) Темы флуоресцентной спектроскопии: биохимические приложения.
  7. ^ a b c d e f g h i j Davenport AP, Russel FD (1996). «Анализы связывания радиолиганда: теория и практика». В Стивене Дж. Мазере (ред.). Актуальные направления исследований и разработок в области радиофармацевтики . Springer Нидерланды. С. 169–179. ISBN 978-94-010-7289-2.
  8. ^ a b c d e f g Hulme EC, Trevethick MA (ноябрь 2010 г.). «Анализ связывания лиганда в равновесии: проверка и интерпретация» . Британский журнал фармакологии . 161 (6): 1219–37. DOI : 10.1111 / j.1476-5381.2009.00604.x . PMC 3000649 . PMID 20132208 .  
  9. ^ a b c d e f g h Хан М. Н., Финдли Дж. У., ред. (2009). Разработка, валидация и внедрение анализов связывания лигандов в сфере разработки лекарственных средств . Хобокен, Нью-Джерси: Джон Уайли и сыновья. ISBN 978-0470541494.
  10. ^ a b Pollard TD (декабрь 2010 г.). «Руководство по простым и информативным тестам связывания» . Молекулярная биология клетки . 21 (23): 4061–7. DOI : 10.1091 / mbc.e10-08-0683 . PMC 2993736 . PMID 21115850 .  
  11. ^ Offermanns S, Вальтер Розенталь, ред. (2008). Энциклопедия молекулярной фармакологии (2-е изд.). Берлин: Springer. п. 585. ISBN 9783540389163.
  12. ^ a b c Kahl SD, Sittampalam GS, Weidner J (май 2012 г.). «Расчеты и приборы, используемые для анализов связывания радиолигандов» . Руководство по проведению анализа : 1–21. PMID 22553868 . 
  13. ^ Б с д е е г ч я Davenport AP (2005). Методы связывания рецепторов . Humana Press. С. 18–19, 101–102, 121–122, 203–204. ISBN 978-1-58829-420-3.
  14. ^ a b c Голдсби Р.А. (2003). Иммунология (5e изд. Изд.). Нью-Йорк: WH Freeman. п. 152 . ISBN 978-0716749479.
  15. ^ a b «Техническое руководство и протоколы иммунопреципитации (IP)» (PDF) . Thermo Fisher Scientific Inc. Архивировано из оригинального (PDF) 24 марта 2014 года . Проверено 20 марта 2014 .
  16. ^ Б с д е е Robinson CJ, Sadick M, Deming С.Н., Estdale S, S Бергельсон, Литтл L (январь 2014). «Критерии приемлемости анализа для тестов биологической активности на основе многолуночных планшетов». BioProcess International . 12 (1): 30–41.
  17. ^ «SIMAG Basic: Магнитные нано и микрочастицы» .
  18. ^ «SIMAG Affinity: магнитные нано и микрочастицы от Chemicell» .
  19. ^ "Главная - Accelero® Bioanalytics GMBH" .
  20. ^ Мосс Т, изд. (2001). «Анализы связывания с фильтром». ДНК-белковые взаимодействия: принципы и протоколы (2-е изд.). Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. С. 1–12. ISBN 9780896036710.
  21. ^ Bondza S, Фой Е, Брукс Дж, Андерсон К., Робинсон Дж, Richalet Р, Buijs J (2017). «Характеристика связывания антител с рецепторами на живых иммунных клетках в реальном времени» . Границы иммунологии . 8 : 455. DOI : 10.3389 / fimmu.2017.00455 . PMC 5401896 . PMID 28484455 .  
  22. ^ Смит SM (2011). «Стратегии очистки мембранных белков». Хроматография белков . Методы молекулярной биологии. 681 . Humana Press. С. 485–96. DOI : 10.1007 / 978-1-60761-913-0_29 . hdl : 2262/72470 . ISBN 9781607619123. PMID  20978985 .
  23. ^ Ван В., Инь Л., Гонсалес-Малерва Л., Ван С., Ю Х, Итон С. и др. (Октябрь 2014 г.). «Кинетика связывания лекарственного средства с рецептором in situ в отдельных клетках: количественное исследование устойчивости к противоопухолевым лекарственным средствам без метки» . Научные отчеты . 4 (1): 6609. Bibcode : 2014NatSR ... 4E6609W . DOI : 10.1038 / srep06609 . PMC 4196117 . PMID 25312029 .  
  24. ^ Björkelund Н, Гедда л, Барта Р, Malmqvist М, Андерссон К (2011-09-12). «Гефитиниб индуцирует димеры рецепторов эпидермального фактора роста, которые изменяют характеристики взаимодействия с ²⁵I-EGF» . PLOS ONE . 6 (9): e24739. Bibcode : 2011PLoSO ... 624739B . DOI : 10.1371 / journal.pone.0024739 . PMC 3171474 . PMID 21931838 .  
  25. ^ Xu B, Varasteh Z, Orlova A, Andersson K, Larhammar D, Björkelund H (ноябрь 2013 г.). «Обнаружение взаимодействий лиганда с рецепторами, связанными с G-белком, в реальном времени на живых клетках» . Сообщения о биохимических и биофизических исследованиях . 441 (4): 820–4. DOI : 10.1016 / j.bbrc.2013.10.149 . PMID 24211197 . 
  26. ^ a b c d e "Фармакологические основы терапии" Гудмана и Гилмана . McGraw Hill Companies Inc., 1996. С. 29–37. ISBN 978-0-07-026266-9.
  27. ^ а б в г д Хейлетт Д.Г. (2003). «Прямое измерение связывания лекарств с рецепторами». В Foreman JC, Johansen T (ред.). Учебник рецепторной фармакологии (2-е изд.). Бока-Ратон, Флорида: CRC LLC, стр. 153–180. ISBN 978-0849310294.