Реакция амплификации фермента Никкинга (NEAR) - это метод амплификации ДНК in vitro, подобный полимеразной цепной реакции (ПЦР). NEAR является изотермическим, реплицирующим ДНК при постоянной температуре с использованием полимеразы (и никелирующего фермента ) для экспоненциальной амплификации ДНК в диапазоне температур от 55 ° C до 59 ° C.
Одним из недостатков ПЦР является то, что она требует времени, чтобы разворачивать двунитевую ДНК под действием тепла в одиночные цепи (процесс, называемый денатурацией ). Это приводит к тому, что время амплификации обычно составляет тридцать минут или более для получения значительного количества амплифицированных продуктов. [1] [ циркулярная ссылка ]
Потенциальными преимуществами NEAR перед PCR являются повышенная скорость и более низкие требования к энергии, характеристики, общие с другими схемами изотермического усиления. [2] Основным недостатком NEAR по сравнению с ПЦР является то, что получение продуктов неспецифической амплификации является общей проблемой при реакциях изотермической амплификации. [3]
В реакции NEAR используются природные или сконструированные эндонуклеазы, которые вводят разрыв цепи только в одну цепь сайта расщепления двухцепочечной ДНК. Способность некоторых из этих ферментов катализировать изотермическую амплификацию ДНК была раскрыта, но не заявлена в патентах, выданных на сами ферменты. [4] [5]
Ссылки [ править ]
- Заявка на патент США 20090081670. 26 марта 2009 г. РЕАКЦИЯ НИКНИНГА И РАСШИРЕНИЯ УСИЛЕНИЯ ДЛЯ ЭКСПОНЕНЦИАЛЬНОГО УСИЛЕНИЯ ЯДЕРНЫХ КИСЛОТ.