ДНК-полимераза Pfu представляет собой фермент, обнаруженный у гипертермофильных архей Pyrococcus furiosus , где он копирует ДНК организмаво время клеточного деления. В лабораторных условиях Pfu используется для амплификации ДНК в полимеразной цепной реакции (ПЦР), где фермент выполняет центральную функцию копирования новой цепи ДНК на каждом этапе удлинения.
Это ДНК - полимераза семейства В. Он имеет РНКазу H -подобный 3'-5'-экзонуклеазный домен, типичный для полимеразы семейства B, такой как ДНК-полимераза II . [1]
ДНК-полимераза Pfu обладает превосходной термостабильностью и корректирующими свойствами по сравнению с ДНК-полимеразой Taq . В отличие от ДНК-полимеразы Taq , ДНК-полимераза Pfu обладает корректирующей экзонуклеазной активностью от 3' до 5', а это означает, что по мере сборки ДНК от 5'-конца к 3'-концу экзонуклеазная активность немедленно удаляет нуклеотиды , ошибочно включенные в 3'-конец растущего фрагмента. Нить ДНК. Следовательно, ПЦР-фрагменты, сгенерированные ДНК-полимеразой Pfu , будут иметь меньше ошибок, чем ПЦР-вставки, сгенерированныеTaq .
Коммерчески доступный Pfu обычно приводит к частоте ошибок 1 на 1,3 миллиона пар оснований и может давать 2,6% мутированных продуктов при амплификации фрагментов размером 1 т.п.н. с использованием ПЦР. Однако Pfu работает медленнее и обычно требует 1–2 минуты на цикл для амплификации 1 т.п.н. ДНК при 72 °C. Использование ДНК-полимеразы Pfu в реакциях ПЦР также приводит к продуктам ПЦР с тупыми концами. [2]
Следовательно, ДНК-полимераза Pfu превосходит ДНК-полимеразу Taq для методов, требующих высокоточного синтеза ДНК, но также может использоваться в сочетании с полимеразой Taq для получения точности Pfu со скоростью активности Taq- полимеразы. [3]
Ученые во главе с Эриком Матуром из биотехнологической компании Stratagene, базирующейся в Ла-Хойя, Калифорния , в 1991 году открыли ДНК-полимеразу Pfu, которая демонстрирует значительно более высокую точность репликации, чем ДНК-полимераза Taq . Пфу в 1996 г. [5]