Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Белки мембраны эритроцитов, разделенные методом SDS-PAGE в соответствии с их молекулярными массами

SDS-PAGE ( электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия ) - это прерывистая электрофоретическая система, разработанная Ульрихом К. Лэммли, которая обычно используется в качестве метода разделения белков с молекулярной массой от 5 до 250 кДа . [1] [2] Совместное использование додецилсульфата натрия (SDS, также известного как лаурилсульфат натрия) и полиакриламидного геля позволяет исключить влияние структуры и заряда, а белки разделяются исключительно на основе различий в их молекулярной массе. .

Свойства [ править ]

Разворачивание белка с помощью SDS
Разворачивание протеина с помощью тепла

SDS-PAGE - это метод электрофореза, который позволяет разделить белок по массе. Среда (также называемая «матрицей») представляет собой прерывистый гель на основе полиакриламида. Кроме того, используется SDS ( додецилсульфат натрия ). Около 1,4 грамма SDS связываются с граммом белка [3] [4] [5], что соответствует одной молекуле SDS на две аминокислоты . SDS действует как поверхностно-активное вещество, маскируя внутренний заряд белков и придавая им очень похожие отношения заряда к массе. Собственные заряды белков пренебрежимо малы по сравнению с загрузкой SDS, а положительные заряды также значительно уменьшаются в основном диапазоне pH разделяющего геля. При приложении постоянного электрического поля белок перемещается к аноду, каждый с разной скоростью, в зависимости от его массы. Эта простая процедура позволяет точно разделить белок по массе.

SDS имеет тенденцию к образованию сферических мицелл в водных растворах с концентрацией выше определенной, называемой критической мицеллярной концентрацией (CMC). Выше критической мицеллярной концентрации от 7 до 10 миллимолей в растворах SDS одновременно встречается как отдельные молекулы ( мономер ) и как мицеллы, ниже CMC SDS встречается только как мономеры в водных растворах. При критической концентрации мицелл мицелла состоит примерно из 62 молекул SDS. [6] Однако только мономеры SDS связываются с белками посредством гидрофобных взаимодействий, тогда как мицеллы SDS являются анионными снаружи и не адсорбируют какой-либо белок. [3] SDS является амфипатическим по своей природе, что позволяет ему раскрывать как полярные, так и неполярные участки структуры белка.[7] При концентрациях SDS выше 0,1 миллимоля начинается разворачивание белков [3], а выше 1 мМ большинство белков денатурируются. [3] Из-за сильного денатурирующего эффекта SDS и последующей диссоциации белковых комплексов четвертичные структуры, как правило, не могут быть определены с помощью SDS. Исключение составляют белки, стабилизированные ковалентным сшиванием.например, -SS- связи и SDS-устойчивые белковые комплексы, которые стабильны даже в присутствии SDS (последний, однако, только при комнатной температуре). Для денатурирования устойчивых к SDS комплексов требуется высокая энергия активации, которая достигается за счет нагревания. Устойчивость к SDS основана на метастабильности белковой складки. Хотя нативный, полностью свернутый, устойчивый к SDS белок не обладает достаточной стабильностью в присутствии SDS, химическое равновесие денатурации при комнатной температуре происходит медленно. Стабильные белковые комплексы характеризуются не только устойчивостью к SDS, но также устойчивостью к протеазам и увеличенным биологическим периодом полужизни . [8]

В качестве альтернативы, электрофорез в полиакриламидном геле также можно проводить с катионными поверхностно-активными веществами CTAB в CTAB-PAGE, [9] [10] [11] или 16-BAC в BAC-PAGE. [12]

Процедура [ править ]

Метод SDS-PAGE состоит из приготовления геля, пробоподготовки, электрофореза, окрашивания белков или вестерн-блоттинга и анализа полученного рисунка полос.

Производство геля [ править ]

Образцы гребней с разным количеством карманов, каждый зубец оставляет карман в геле при извлечении
Полимеризованный разделяющий и укладывающий гель перед удалением образца гребенка (белый) между разделителями (черный), в укладывающем геле небольшие количества бромфенолового синего для улучшения видимости, разделяющий гель не окрашен

При использовании различных буферов в геле (прерывистый гель-электрофорез) гели готовят за один день до электрофореза, чтобы диффузия не приводила к смешиванию буферов. Гель получают методом радикальной полимеризации.в форме, состоящей из двух герметичных стеклянных пластин с прокладками между стеклянными пластинами. В типичной настройке мини-геля прокладки имеют толщину 0,75 мм или 1,5 мм, что определяет несущую способность геля. Для заливки гелевого раствора пластины обычно зажимают на подставке, которая временно закрывает открытую в противном случае нижнюю сторону стеклянных пластин двумя прокладками. Для гелевого раствора акриламид смешивается в качестве гелеобразователя (обычно 4% об. / Об. В геле для укладки и 10–12% в разделяющем геле), метиленбисакриламид в качестве сшивающего агента, буфер для накопления или разделения геля, вода и SDS. . Путем добавления катализатора ТЕМЕД и радикального инициатора персульфата аммония(APS) начинается полимеризация. Затем раствор заливается между стеклянными пластинами без образования пузырей. В зависимости от количества катализатора и радикального стартера и в зависимости от температуры полимеризация длится от четверти часа до нескольких часов. Сначала наливают нижний гель (разделяющий гель) и покрывают несколькими каплями труднорастворимого в воде спирта (обычно насыщенного буфером бутанола или изопропанола), который удаляет пузырьки из мениска и защищает гелевый раствор акцептора радикалов кислорода. После полимеризации разделительного геля спирт удаляют, а остаточный спирт удаляют фильтровальной бумагой.. После добавления APS и TEMED к раствору накопительного геля его выливают поверх твердого разделительного геля. После этого между стеклянными пластинами вставляется подходящая гребенка для образцов без образования пузырей. Гребень для образца осторожно вынимают после полимеризации, оставляя карманы для нанесения образца. Для последующего использования белков для секвенирования белков гели часто готовят за день до электрофореза, чтобы уменьшить реакции неполимеризованного акриламида с цистеинами в белках.

Используя градиентный смеситель , можно отливать градиентные гели с градиентом акриламида (обычно от 4 до 12%), которые имеют больший диапазон разделения молекулярных масс. [13] В коммерческих гелевых системах (так называемые предварительно отлитые гели ) обычно используется буферное вещество бис-трисметан со значением pH от 6,4 до 7,2 как в геле для укладки, так и в разделяющем геле. [14] [15] Эти гели поставляются литыми и готовыми к использованию. Поскольку они используют только один буфер ( непрерывный гель-электрофорез) и имеют почти нейтральный pH, они могут храниться несколько недель. Более нейтральный pH замедляет гидролиз и, следовательно, разложение полиакриламида. Кроме того, в белках содержится меньше цистеинов, модифицированных акриламидом. [14] Из-за постоянного pH в собирающем и разделяющем геле эффект складывания отсутствует. Белки в гелях Бистрис не окрашиваются комплексами рутения. [16] Эта гелевая система имеет сравнительно большой диапазон разделения, который можно варьировать, используя MES или MOPS в рабочем буфере. [14]

Подготовка образца [ править ]

Восстановление дисульфидов с помощью DTT

Во время подготовки образца к белкам в избытке добавляют буфер для образца и, следовательно, SDS, и затем образец нагревают до 95 ° C в течение пяти минут или, альтернативно, до 70 ° C в течение десяти минут. Нагревание разрушает вторичную и третичную структуры белка, разрывая водородные связи и растягивая молекулы. Необязательно, дисульфидные мостики можно расщепить восстановлением. Для этой цели восстанавливающие тиолы, такие как β-меркаптоэтанол (β-ME, 5% по объему), дитиотреитол (DTT, 10 миллимолярных) или дитиоэритритол(DTE, 10 миллимолярных) добавляются в буфер для образца. После охлаждения до комнатной температуры каждый образец пипеткой переносят в свою лунку в геле, который предварительно был погружен в буфер для электрофореза в аппарате для электрофореза.

В дополнение к образцам на гель обычно наносят маркер размера молекулярной массы . Он состоит из белков известных размеров и, таким образом, позволяет оценить (с погрешностью ± 10%) размеры белков в реальных образцах, которые мигрируют параллельно по разным дорожкам геля. [17] Маркер размера часто вводится пипеткой в ​​первый или последний карман геля.

Электрофорез [ править ]

Камера для электрофореза через несколько минут электрофореза. В первом кармане был нанесен маркер размера с бромфеноловым синим, в другие карманы образцы были добавлены бромкрезоловым зеленым.

Для разделения денатурированные образцы наносят на гель полиакриламида, который помещают в буфер для электрофореза с подходящими электролитами. После этого прикладывается напряжение (обычно около 100 В, 10-20 В на см длины геля), которое вызывает миграцию отрицательно заряженных молекул через гель в направлении положительно заряженного анода . Гель действует как сито. Небольшие белки относительно легко перемещаются через сетку геля, в то время как более крупные белки с большей вероятностью удерживаются и, таким образом, более медленно мигрируют через гель, что позволяет разделять белки по размеру молекул. Электрофорез длится от получаса до нескольких часов в зависимости от напряжения и длины используемого геля.

Наиболее быстро мигрирующие белки (с молекулярной массой менее 5 кДа) образуют буферный фронт вместе с анионными компонентами буфера для электрофореза, которые также мигрируют через гель. Область переднего фронта буфера становится видимой путем добавления сравнительно небольшого количества анионного красителя бромфенолового синего в буфер для образца. Из-за относительно небольшого размера молекулы бромфенолового синего он мигрирует быстрее, чем белки. Путем оптического контроля мигрирующей цветной полосы можно остановить электрофорез до того, как краситель полностью пройдет через гель и покинет его.

Наиболее часто используемый метод - это прерывистый SDS-PAGE. В этом методе белки сначала мигрируют в собирающий гель с нейтральным pH, в котором они концентрируются, а затем они мигрируют в разделяющий гель с основным pH, в котором и происходит фактическое разделение. Укладка и разделение гелей различаются разным размером пор (4-6% T и 10-20% T), ионной силой и значениями pH (pH 6,8 или pH 8,8). Электролит наиболее часто используемый является SDS-содержащих Трис - глицин - хлорид буфера системы. При нейтральном pH глицин преимущественно образует цвиттерионныйформы, при высоком pH глицины теряют положительные заряды и становятся преимущественно анионными. В собирающем геле более мелкие отрицательно заряженные ионы хлорида мигрируют перед белками (как ведущие ионы), а несколько более крупные, отрицательно и частично положительно заряженные ионы глицината мигрируют за белками (как начальные замыкающие ионы), тогда как в сравнительно основной разделяющий гель: оба иона мигрируют перед белками. Градиент pH между буферами накопительного геля и разделительного геля приводит к эффекту накопления на границе стекирующего геля с разделительным гелем, поскольку глицинат частично теряет свои замедляющие положительные заряды по мере увеличения pH, а затем, как предыдущий замыкающий ион, обгоняет белки и становится ведущим ионом,что приводит к тому, что полосы различных белков (видимые после окрашивания) становятся более узкими и резкими - эффект наложения. Для разделения более мелких белков и пептидов TRIS-Трициновая буферная система Шеггера и фон Ягова используется из-за более широкого распространения белков в диапазоне от 0,5 до 50 кДа. [18]

Окрашивание гелем [ править ]

Окрашенный кумасси 10% гель трис / трицин. В левой полосе для оценки размера использовали маркер размера молекулярной массы (сверху вниз: 66, 45, 35, 24, 18 и 9 кДа). На оставшихся дорожках разделяли очищенные дрожжевые белки.

В конце электрофоретического разделения все белки сортируются по размеру и затем могут быть проанализированы другими методами, например окрашиванием белков, таким как окрашивание Кумасси (наиболее распространенное и простое в использовании), [19] [20] окрашивание серебром (наивысшая чувствительность ), [21] [22] [23] [24] [25] [26] окрашивает все окрашивания, окрашивание амидо черным 10B , [20] быстрое окрашивание FCF зеленым , [20] флуоресцентные окрашивания, такие как окрашивание эпикоккононом [27] и Оранжевая окраска SYPRO [28] и иммунологическое обнаружение, такое как вестерн-блоттинг.. [29] [30] Флуоресцентные красители имеют сравнительно более высокую линейность между количеством белка и интенсивностью цвета, примерно на три порядка величины выше предела обнаружения , то есть количество белка можно оценить по интенсивности цвета. При использовании флуоресцентного белкового красителя трихлорэтанола последующее окрашивание белка исключается, если его добавляли к раствору геля и гель облучали УФ-светом после электрофореза. [31] [32]

При окрашивании кумасси гель фиксируется в 50% этаноле и 10% растворе ледяной уксусной кислоты в течение 1 часа. Затем раствор заменяют на свежий, и через 1–12 часов гель заменяют на окрашивающий раствор (50% метанол, 10% ледяная уксусная кислота, 0,1% кумасси бриллиантовый синий) с последующей сменой обесцвечивания несколько раз обесцвечивающим раствором 40%. метанол, 10% ледяная уксусная кислота.

Анализ [ править ]

Окрашивание белков в геле создает документально подтвержденный рисунок полос различных белков. Гликопротеины имеют разные уровни гликозилирования и более неравномерно адсорбируют SDS при гликозилировании, что приводит к более широким и размытым полосам. [33] Мембранные белки из-за их трансмембранного домена часто состоят из более гидрофобных аминокислот, имеют более низкую растворимость в водных растворах, имеют тенденцию связывать липиды и склонны осаждаться в водных растворах из-за гидрофобных эффектов.когда нет достаточного количества моющего средства. Это преципитация проявляется для мембранных белков в SDS-PAGE в «хвосте» над полосой трансмембранного белка. В этом случае можно использовать больше SDS (за счет использования более или более концентрированного буфера для образца), и количество белка в приложении для образца может быть уменьшено. Перегрузка геля растворимым белком создает полукруглую полосу этого белка (например, в маркерной полосе изображения при 66 кДа), позволяя покрыть другие белки с аналогичными молекулярными массами. Низкий контраст (как на маркерной полосе изображения) между полосами внутри полосы указывает либо на присутствие многих белков (низкая чистота), либо, если используются очищенные белки и низкий контраст наблюдается только ниже одной полосы, это указывает на протеолитическую деградацию. белка,который сначала вызывает полосы деградации, а после дальнейшей деградации дает однородный цвет («мазок») под полосой.[34] Документирование рисунка полос обычно делается путем фотографирования или сканирования. Для последующего выделения молекул в отдельных полосахможет быть проведена экстракция гелем .

Архивирование [ править ]

Два геля SDS после завершения разделения образцов и окрашивания в рамке для сушки

После окрашивания белком и документирования рисунка полос полиакриламидный гель можно высушить для архивного хранения. Позже из него можно будет извлечь белки. Гель помещают в сушильную раму (с использованием тепла или без него) или в вакуумную сушилку. Сушильная рама состоит из двух частей, одна из которых служит основой для влажной целлофановой пленки, к которой добавляются гель и однопроцентный раствор глицерина . Затем накладывается вторая влажная целлофановая пленка без пузырей, вторая часть рамки надевается сверху и рамка фиксируется зажимами. Удаление пузырьков воздуха позволяет избежать фрагментации геля во время сушки. Вода испаряется через целлофановую пленку. В отличие от сушильной рамы, вакуумная сушилка создает вакуум и нагревает гель примерно до 50 ° C.

Определение молекулярной массы [ править ]

Белки маркера размера (черный X) показывают приблизительно прямую линию в представлении log M над Rf. Молекулярная масса неизвестного белка (красный X) может быть определена по оси ординат.

Для более точного определения молекулярной массы в разделяющем геле измеряют расстояния относительной миграции отдельных полос белка. [35] [36]Для повышения точности измерения обычно проводят в трех экземплярах. Относительная подвижность (называемая значением Rf или значением Rm) представляет собой частное от расстояния полосы белка и расстояния до фронта буфера. Расстояния полос и фронт буфера измеряются от начала разделительного геля. Расстояние до фронта буфера примерно соответствует расстоянию до бромфенолового синего, содержащегося в буфере для образца. Относительные расстояния между белками маркера размера нанесены на график полулогарифмически относительно их известных молекулярных масс. Путем сравнения с линейной частью построенного графика или с помощью регрессионного анализа молекулярная масса неизвестного белка может быть определена по его относительной подвижности. Полосы белков с гликозилированием могут быть размытыми. [33]Белки со многими основными аминокислотами (например, гистоны ) [37] могут приводить к завышению молекулярной массы или даже не мигрировать в гель вообще, потому что при электрофорезе они перемещаются медленнее из-за положительных зарядов или даже в противоположном направлении. . Соответственно, многие кислые аминокислоты могут привести к ускоренной миграции белка и недооценке его молекулярной массы. [38]

Приложения [ править ]

SDS-PAGE в сочетании с окрашиванием белков широко используется в биохимии для быстрого и точного разделения и последующего анализа белков. Он требует сравнительно низких затрат на приборы и реагенты и является простым в использовании методом. Из-за его низкой масштабируемости он в основном используется в аналитических целях и меньше - в препаративных, особенно когда необходимо выделить большие количества белка.

Кроме того, SDS-PAGE используется в сочетании с вестерн-блоттингом для определения присутствия определенного белка в смеси белков или для анализа посттрансляционных модификаций . Посттрансляционные модификации белков могут приводить к другой относительной подвижности (т. Е. Сдвигу полосы ) или к изменению связывания детектирующего антитела, используемого в вестерн-блоттинге (т. Е. Полоса исчезает или появляется).

В масс-спектрометрии белков SDS-PAGE является широко используемым методом подготовки проб перед спектрометрией, в основном с использованием расщепления в геле . Что касается определения молекулярной массы белка, SDS-PAGE немного более точен, чем аналитическое ультрацентрифугирование , но менее точен, чем масс-спектрометрия или, игнорируя посттрансляционные модификации, расчет молекулярной массы белка по ДНК. последовательность .

В медицинской диагностике SDS-PAGE используется как часть теста на ВИЧ и для оценки протеинурии . В тесте на ВИЧ белки ВИЧ разделяются с помощью SDS-PAGE и впоследствии обнаруживаются с помощью вестерн-блоттинга с использованием ВИЧ-специфических антител пациента, если они присутствуют в его сыворотке крови . SDS-PAGE для протеинурии оценивает уровни различных белков сыворотки в моче, например альбумина , альфа-2-макроглобулина и IgG .

Варианты [ править ]

SDS-PAGE - это наиболее широко используемый метод гель-электрофоретического разделения белков. Двумерный гель-электрофорез последовательно сочетает изоэлектрическое фокусирование или ВАС-ПААГ с SDS-ПААГ. Native PAGE используется, если необходимо сохранить укладку нативного белка. Для разделения мембранных белков BAC-PAGE или CTAB-PAGE можно использовать в качестве альтернативы SDS-PAGE. Для электрофоретического разделения более крупных белковых комплексов можно использовать электрофорез в агарозном геле , например SDD-AGE . Некоторые ферменты можно определить по их активности с помощью зимографии .

Альтернативы [ править ]

Будучи одним из наиболее точных и недорогих методов разделения и анализа белков, SDS-PAGE денатурирует белки. Если необходимы неденатурирующие условия, белки разделяют с помощью нативного PAGE или других хроматографических методов с последующим фотометрическим количественным определением , например аффинной хроматографией (или даже тандемной аффинной очисткой ), эксклюзионной хроматографией , ионообменной хроматографией . [39] Белки также можно разделить по размеру при фильтрации с тангенциальным потоком [40] или ультрафильтрации . [41]Отдельные белки могут быть выделены из смеси аффинной хроматографией или анализом с пониженным содержанием белка . Некоторые исторически ранние и экономически эффективные, но грубые методы разделения обычно основаны на серии экстракций и осаждений с использованием космотропных молекул, например осаждение сульфатом аммония и осаждение полиэтиленгликоля .

История [ править ]

В 1948 году Арне Тизелиус был удостоен Нобелевской премии по химии за открытие принципа электрофореза как миграции заряженных и растворенных атомов или молекул в электрическом поле. [42] Использование твердой матрицы (первоначально бумажных дисков) в зонном электрофорезе улучшило разделение. Прерывистый электрофорез 1964 г., проведенный Л. Орнштейном и Б. Дж. Дэвисом, позволил улучшить разделение за счет эффекта суммирования. [43]Использование сшитых полиакриламидных гидрогелей, в отличие от ранее использовавшихся бумажных дисков или крахмальных гелей, обеспечило более высокую стабильность геля и отсутствие микробного разложения. Денатурирующий эффект SDS в полиакриламидных гелях непрерывного действия и последующее улучшение разрешения были впервые описаны в 1965 году Дэвидом Ф. Саммерсом в рабочей группе Джеймса Э. Дарнелла по разделению полиовирусных белков. [44] Текущий вариант SDS-PAGE был описан в 1970 году Ульрихом К. Лэммли и первоначально использовался для характеристики белков в головке бактериофага Т4 . [1]Эта статья Лэммли широко цитируется как изобретение современного SDS-PAGE, но на самом деле этот метод был изобретен Джейком Майзелем, который был в творческом отпуске в лаборатории MRC, когда Лэммли присоединился к лаборатории в качестве постдокторанта. Майзель поделился своей предыдущей технологией с Лэммли, и вместе они внесли дальнейшие улучшения. Лэммли и Майзель планировали продолжить работу с докладом о методах, но этого не произошло. Майзель в кратких комментариях излагает историю развития SDS-PAGE. [45]

Ссылки [ править ]

  1. ^ а б Лэммли, Великобритания (1970). «Расщепление структурных белков во время сборки головки бактериофага Т4». Природа . 227 (5259): 680–685. Bibcode : 1970Natur.227..680L . DOI : 10.1038 / 227680a0 . ISSN  0028-0836 . PMID  5432063 . S2CID  3105149 .
  2. ^ Neue Zürcher Zeitung: Интервью с Ульрихом Ляммли на немецком языке . NZZ Folio, No. 11, 2005. По состоянию на 4 марта 2012 г.
  3. ^ a b c d Рейнольдс Дж. А., Чарльз Танфорд (1970). «Связывание додецилсульфата с белками при высоких соотношениях связывания. Возможные последствия для состояния белков в биологических мембранах» . Proc Natl Acad Sci USA . 66 (3): 1002–7. Bibcode : 1970PNAS ... 66.1002R . DOI : 10.1073 / pnas.66.3.1002 . PMC 283150 . PMID 5269225 .  
  4. Перейти ↑ Smith, BJ (1984). "SDS полиакриламидный гель-электрофорез белков". Белки . Методы молекулярной биологии. 1 . С. 41–56. DOI : 10.1385 / 0-89603-062-8: 41 . ISBN 0-89603-062-8. PMID  20512673 .
  5. ^ Стаикос, Георгиос; Дондос, Анастасиос (2009). «Изучение комплексов додецилсульфат-белок натрия: доказательство их червеобразной конформации, если рассматривать их как полимеры со случайной спиралью». Коллоидная и полимерная наука . 287 (8): 1001–1004. DOI : 10.1007 / s00396-009-2059-3 . ISSN 0303-402X . S2CID 97367384 .  
  6. ^ Турро, Николас Дж .; Йекта, Ахмад (1978). «Люминесцентные зонды для растворов моющих средств. Простая процедура определения среднего числа агрегации мицелл». Журнал Американского химического общества . 100 (18): 5951–5952. DOI : 10.1021 / ja00486a062 . ISSN 0002-7863 . 
  7. ^ Берг, Джереми М. (2015-04-08). Биохимия . Тимочко, Джон Л., 1948-, Гатто, Грегори Дж., Младший (Грегори Джозеф), Страйер, Люберт. (Восьмое изд.). Нью-Йорк. ISBN 9781464126109. OCLC  913469736 .
  8. Перейти ↑ Manning M, Colón W (2004). «Структурная основа кинетической стабильности белка: устойчивость к додецилсульфату натрия предполагает центральную роль жесткости и склонность к структуре бета-листа» . Биохимия . 43 (35): 11248–54. DOI : 10.1021 / bi0491898 . PMID 15366934 . 
  9. ^ Буксбаум, Энгельберт (2003). «Катионный электрофорез и электроперенос мембранных гликопротеинов». Аналитическая биохимия . 314 (1): 70–76. DOI : 10.1016 / S0003-2697 (02) 00639-5 . ISSN 0003-2697 . PMID 12633604 .  
  10. ^ Акин, Дайан Т .; Шапира, Раймонд; Кинкейд, Джозеф М. (1985). «Определение молекулярных масс биологически активных белков электрофорезом в полиакриламидном геле цетилтриметиламмония». Аналитическая биохимия . 145 (1): 170–176. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (85) 90343-4 . ISSN 0003-2697 . PMID 4003759 .  
  11. Перейти ↑ Simpson, RJ (2010). "CTAB-PAGE". Протоколы Колд-Спринг-Харбор . 2010 (4): pdb.prot5412. DOI : 10,1101 / pdb.prot5412 . ISSN 1559-6095 . PMID 20360366 .  
  12. ^ Хартингер, Иоахим; Стениус, Катинка; Хёгеманн, Дагмар; Ян, Рейнхард (1996). «16-BAC / SDS-PAGE: система двумерного гель-электрофореза, подходящая для разделения интегральных мембранных белков». Аналитическая биохимия . 240 (1): 126–133. DOI : 10.1006 / abio.1996.0339 . ISSN 0003-2697 . PMID 8811889 .  
  13. Перейти ↑ Margolis J, Kenrick KG (1969). «Двумерное разрешение белков плазмы с помощью комбинации полиакриламидного диска и градиентного гель-электрофореза» . Природа . 221 (5185): 1056–7. Bibcode : 1969Natur.221.1056M . DOI : 10.1038 / 2211056a0 . PMID 5774398 . S2CID 4197850 .  
  14. ^ a b c Хахманн, Джон П .; Амши, Джозеф В. (2005). «Модели модификации белков в гелях трис-глицина и бис-трис-гелей с нейтральным pH во время электрофореза: влияние pH геля». Аналитическая биохимия . 342 (2): 237–245. DOI : 10.1016 / j.ab.2005.04.015 . ISSN 0003-2697 . PMID 15935323 .  
  15. ^ Вильтфанг, Йенс; Арольд, Норберт; Нойхофф, Фолькер (1991). «Новая многофазная буферная система для электрофореза в полиакриламидном геле додецилсульфата натрия белков и пептидов с молекулярными массами 100 000-1000 и их обнаружения с пикомолярной чувствительностью». Электрофорез . 12 (5): 352–366. DOI : 10.1002 / elps.1150120507 . ISSN 0173-0835 . PMID 1718736 . S2CID 40101706 .   
  16. ^ Мебиус, Ян; Денкер, Катрин; Зикманн, Альберт (2007). «Дисульфонат трис-батофенантролина рутения (II) хорошо подходит для Tris-Glycine PAGE, но не для гелей Bis-Tris». Протеомика . 7 (4): 524–527. DOI : 10.1002 / pmic.200600642 . ISSN 1615-9853 . PMID 17309097 . S2CID 25822873 .   
  17. ↑ Ян М. Розенберг (22 декабря 2006 г.). Анализ и очистка белков: настольные методы . Springer Science & Business Media. С. 103–. ISBN 978-0-8176-4412-3.
  18. ^ Шеггер, Германн; фон Ягов, Гебхард (1987). «Электрофорез в трицин-додецилсульфат-полиакриламидном геле для разделения белков в диапазоне от 1 до 100 кДа». Аналитическая биохимия . 166 (2): 368–379. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (87) 90587-2 . ISSN 0003-2697 . PMID 2449095 .  
  19. ^ Fazekas de St. Groth, S .; Вебстер, Р.Г.; Датынер, А. (1963). «Две новые процедуры окрашивания для количественной оценки белков на электрофоретических полосках». Biochimica et Biophysica Acta . 71 : 377–391. DOI : 10.1016 / 0006-3002 (63) 91092-8 . PMID 18421828 . 
  20. ^ a b c Уилсон CM (1979). «Исследования и критика Amido Black 10B, Coomassie Blue R и Fast Green FCF как красителей для белков после электрофореза в полиакриламидном геле». Анальная биохимия . 96 (2): 263–78. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (79) 90581-5 . PMID 89822 . 
  21. ^ Меррил, CR; Switzer, RC; Кеурен, М.Л. Ван (1979). «Следы полипептидов в клеточных экстрактах и ​​жидкостях человеческого тела, обнаруженные с помощью двумерного электрофореза и высокочувствительного окрашивания серебром» . Proc Natl Acad Sci USA . 76 (9): 4335–4339. Bibcode : 1979PNAS ... 76.4335M . DOI : 10.1073 / pnas.76.9.4335 . PMC 411569 . PMID 92027 .  
  22. ^ RC Швей, CR Меррил, С. Шифрин (сентябрь 1979), "Высокочувствительный серебром для обнаружения белков и пептидов в полиакриламидном геле", Anal Biochem (на немецком языке ), 98 (1), стр. 231-237, DOI : 10.1016 / 0003-2697 (79) 90732-2 , PMID 94518 CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  23. ^ Blum, H .; Beier, H .; Гросс, HJ (1987). «Улучшенное окрашивание серебром растительного белка, РНК и ДНК в гелях PAA». Электрофорез . 8 : 93–99. DOI : 10.1002 / elps.1150080203 . S2CID 84471792 . 
  24. ^ Rabilloud, T .; и другие. (1988). «Улучшение и упрощение низкофонового окрашивания белков серебром с помощью дитионита натрия». Электрофорез . 9 (6): 288–291. DOI : 10.1002 / elps.1150090608 . PMID 2466660 . S2CID 33007991 .  
  25. ^ Rabilloud, Т. (1992). «Сравнение низкофонового окрашивания диаммином серебра и белком нитрата серебра». Электрофорез . 13 (7): 429–439. DOI : 10.1002 / elps.1150130190 . PMID 1425556 . S2CID 43084621 .  
  26. ^ Lelong, C .; Chevallet, M .; Luche, S .; Рабийо, Т. (2009). Окрашивание белков серебром в гелях 2DE (PDF) . Методы Мол биол. 519 . С. 339–350. DOI : 10.1007 / 978-1-59745-281-6_21 . ISBN  978-1-58829-937-6. PMID  19381593 . S2CID  52820065 .
  27. ^ Мориц, Кристиан П .; Marz, Sabrina X .; Рейсс, Ральф; Шуленборг, Томас; Фриауф, Экхард (февраль 2014 г.). « Окрашивание эпикоккононом: мощный контроль нагрузки для вестерн-блотов ». Протеомика . 14 (2–3): 162–8. DOI : 10.1002 / pmic.201300089 . PMID 24339236 . S2CID 206368546 .  
  28. ^ Александр Петрович Демченко: Продвинутые репортеры флуоресценции в химии и биологии III: Приложения в зондировании и визуализации. Полоса 3 от Продвинутых репортеров флуоресценции в химии и биологии . Springer 2011, ISBN 978-3-642-18035-4 , S. 179ff. 
  29. ^ Галлахер, Шон; Чакаварти, Деб (2008). «Окрашивание белков в гелях» . Журнал визуализированных экспериментов (17). DOI : 10.3791 / 760 . ISSN 1940-087X . PMC 3253607 . PMID 19066521 .   
  30. ^ Уилсон CM (1983). «Окрашивание белков на гелях: сравнение красителей и процедур» . Методы Энзимол . 91 : 236–47. DOI : 10.1016 / s0076-6879 (83) 91020-0 . PMID 6190068 . 
  31. ^ Ладнер CL, Ян J, Turner RJ, Эдвардс Р. (2004). «Видимое флуоресцентное обнаружение белков в полиакриламидных гелях без окрашивания» . Анальная биохимия . 326 (1): 13–20. DOI : 10.1016 / j.ab.2003.10.047 . PMID 14769330 . 
  32. ^ Джильда JE, Gomes А.В. (2013). «Окрашивание общего белка без красителей является лучшим контролем нагрузки по сравнению с β-актином для вестерн-блоттинга» . Анальная биохимия . 440 (2): 186–8. DOI : 10.1016 / j.ab.2013.05.027 . PMC 3809032 . PMID 23747530 .  
  33. ^ a b Крио-ЭМ Часть A: Подготовка проб и сбор данных . Академическая пресса. 30 сентября 2010. с. 28. ISBN 978-0-08-095695-4.
  34. ^ Ричард Р. Берджесс; Мюррей П. Дойчер (3 ноября 2009 г.). Руководство по очистке белков . Академическая пресса. С. 184–. ISBN 978-0-08-092317-8.
  35. ^ Филип Л. Р. Боннер; Алан Дж. Харгривз (24 августа 2011 г.). Основные методы лаборатории биологии: Карманный справочник . Джон Вили и сыновья. С. 140–. ISBN 978-1-119-95644-0.
  36. ^ Martin Holtzhauer (13 сентября 2006). Основные методы для биохимической лаборатории . Springer Science & Business Media. С. 243–. ISBN 978-3-540-32786-8.
  37. ^ WJ ван Venrooij; Равиндер Н. Майни (6 декабря 2012 г.). Руководство по биологическим маркерам болезней . Springer Science & Business Media. С. 50–. ISBN 978-94-011-1670-1.
  38. ^ Гуань, Ихун; Чжу, Циньфан; Хуанг, Делай; Чжао, Шуйи; Ян Ло, Ли; Пэн, Цзиньжун (2015). «Уравнение для оценки разницы между теоретически предсказанными и отображаемыми в SDS PAGE молекулярными массами для кислого пептида» . Научные отчеты . 5 (1): 13370. Bibcode : 2015NatSR ... 513370G . DOI : 10.1038 / srep13370 . ISSN 2045-2322 . PMC 4550835 . PMID 26311515 .   
  39. ↑ Ян-Кристер Янсон (3 января 2012 г.). Очистка белков: принципы, методы высокого разрешения и применения . Джон Вили и сыновья. ISBN 978-1-118-00219-3.
  40. ↑ Мохамед А. Десаи (2000). Последующая обработка белков: методы и протоколы . Springer Science & Business Media. п. 35. ISBN 978-1-59259-027-8.
  41. ↑ Гош Раджа (11 июня 2003 г.). Биоразделение белков с использованием ультрафильтрации: теория, приложения и новые разработки . World Scientific. п. 142. ISBN. 978-1-78326-126-0.
  42. ^ Педерсен, Т. (2007). «Переворачивание СТРАНИЦЫ: ощущение электрофореза в SDS-поликриламидном геле в течение ночи». Журнал FASEB . 22 (4): 949–953. DOI : 10,1096 / fj.08-0402ufm . ISSN 0892-6638 . PMID 18378803 . S2CID 33466516 .   
  43. ^ Орнштейн, L .; Дэвис, Б.Дж. (1964). «Дисковый электрофорез –1. Предпосылки и теория». Ann NY Acad Sci . 121 (2): 321–349. Bibcode : 1964NYASA.121..321O . DOI : 10.1111 / j.1749-6632.1964.tb14207.x . PMID 14240533 . S2CID 28591995 .  
  44. ^ Саммерс Д. Ф., Майзель СП, Дарнелл Дж. Э. (1965). «Доказательства вирус-специфических некапсидных белков в инфицированных полиовирусом клетках HeLa» . Proc Natl Acad Sci USA . 54 (2): 505–13. Полномочный код : 1965PNAS ... 54..505S . DOI : 10.1073 / pnas.54.2.505 . PMC 219696 . PMID 4285933 .  
  45. ^ Майзель, Jr, J (2000-12-01). «Электрофорез в полиакриламидном геле SDS». Направления биохимических наук . 25 (12): 590–592. DOI : 10.1016 / S0968-0004 (00) 01693-5 . PMID 11116183 . 

Внешние ссылки [ править ]

  • OpenWetWare: протокол для BisTris SDS-PAGE