В области микробиологии , полосы являются методом , используемым для выделения чистого штамма из одного вида микроорганизма, часто бактерии . Затем из полученных колоний могут быть взяты образцы, и микробиологическая культура может быть выращена на новой чашке, чтобы можно было идентифицировать, изучить или протестировать организм.
Современный метод полосовой пластинки развился благодаря усилиям Роберта Коха и других микробиологов по получению микробиологических культур бактерий для их изучения. Метод разведения или выделения штрихом был впервые разработан Лёффлером и Гаффки в лаборатории Коха, который включает разбавление бактерий путем систематического нанесения штрихов на поверхность агара в чашке Петри для получения изолированных колоний, которые затем разрастаются до определенного количества клеток. , или изолированные колонии. Если на поверхности агара растут микроорганизмы, которые генетически одинаковы, культура считается микробиологической культурой .
Техника [ править ]
Штрихи - это быстрый и, в идеале, простой процесс разбавления изоляции. Техника осуществляется путем разбавления сравнительно большой концентрации бактерий до меньшей концентрации. Уменьшение количества бактерий должно показать, что колонии достаточно разнесены, чтобы влиять на разделение различных типов микробов . Штрихи выполняются с помощью стерильного инструмента, такого как ватный тампон или, как правило, петля для посева . Асептические методы используются для поддержания микробиологических культур и предотвращения загрязнения питательной среды.. Существует множество различных методов нанесения штрихов на тарелку. Выбор метода зависит от индивидуальных предпочтений и может также зависеть от количества микробов, содержащихся в образце.
Трехфазная полоса, известная как Т-образная полоса, рекомендуется для новичков. Штрихи выполняются с помощью стерильного инструмента, такого как ватный тампон или обычно петля для посева . Посевную петлю сначала стерилизуют, пропуская ее через пламя. Когда петля остынет, ее окунают в посевной материал, например бульон или образец пациента, содержащий многие виды бактерий. Затем инокуляционную петлю протягивают по поверхности агара.вперед и назад зигзагообразным движением, пока не будет покрыто примерно 30% пластины. Затем петлю повторно стерилизуют и пластину поворачивают на 90 градусов. Начиная с ранее нанесенного участка, петля протягивается через него два-три раза, продолжая зигзагообразный узор. Затем процедура повторяется еще раз, стараясь не коснуться ранее нанесенных полосами секторов. Каждый раз петля собирает все меньше и меньше бактерий, пока не соберет только отдельные бактериальные клетки, которые могут вырасти в колонию. Пластина должна показать самый сильный рост в первой части. Вторая секция будет иметь меньший рост и несколько изолированных колоний, тогда как последняя секция будет иметь наименьший рост и много изолированных колоний.
Среда роста [ править ]
Образец распределяют по одному квадранту чашки Петри, содержащей питательную среду . Бактериям для роста нужны разные питательные вещества. Это включает воду, источник энергии, источники углерода, серы, азота, фосфора, некоторых минералов и других витаминов и факторов роста. Очень распространенный тип сред, используемый в микробиологических лабораториях, известен как агар , гелеобразное вещество, получаемое из морских водорослей. Питательный агар имеет много ингредиентов с неизвестным количеством питательных веществ в них. С одной стороны, это может быть очень селективная среда для использования, поскольку упомянутые бактерии являются особенными. Если в среде есть определенное питательное вещество, бактерии наверняка не смогут расти и могут погибнуть.. С другой стороны, это средство массовой информации очень сложное. Сложные среды важны, потому что они обеспечивают широкий диапазон роста микробов. Эта среда в значительной степени поддерживает рост бактерий, отчасти благодаря большому количеству питательных веществ. Выбор среды для выращивания зависит от того, какой микроорганизм культивируется или для которого выбран.
Инкубация [ править ]
В зависимости от штамма чашку затем можно инкубировать , обычно в течение 24–36 часов, чтобы бактерии могли размножаться. В конце инкубации должно быть достаточно бактерий, чтобы образовать видимые колонии в областях, затронутых петлей посева. Из этих смешанных колоний можно идентифицировать отдельные виды бактерий или грибов на основе их морфологических различий (размер / форма / цвет), а затем субкультивировать в чашку с новой средой, чтобы получить чистую культуру для дальнейшего анализа.
Автоматизированное оборудование используется на промышленном уровне для нанесения штрихов на твердую среду с целью достижения лучшей стерилизации и однородности штрихов, а также для надежно более быстрой работы. При ручном нанесении штрихов важно избегать царапин на твердой среде, так как последующие штриховые линии будут повреждены, а неравномерное отложение посевного материала на поврежденных участках среды приведет к кластерному росту микробов, который может распространяться на соседние штриховые линии.
Важность [ править ]
Бактерии существуют в воде, почве и пище, на коже и нормальной флоре кишечника . Ассортимент микробов , существующих в окружающей среде и на теле человека, огромен. В человеческом теле есть миллиарды бактерий, которые создают нормальную флору, борющуюся с вторгающимися патогенами. Бактерии часто встречаются в смешанных популяциях. Очень редко можно найти единственный встречающийся вид бактерий. Чтобы иметь возможность изучать культурные, морфологические и физиологические характеристики отдельных видов, жизненно важно, чтобы бактерии были отделены от других видов, которые обычно происходят из окружающей среды. Это важно для определения бактерии.в клиническом образце. Когда бактерии разделены и изолированы, можно идентифицировать возбудителя бактериального заболевания.
См. Также [ править ]
- Бактериальный газон
Ссылки [ править ]
- Блэк, Жаклин Г. Микробиология: принципы и исследования Мэримаунтского университета, 1999 г.
- Биотехнология и биомедицинская инженерия: виртуальная лаборатория Амриты Вишва Видьяпитам.
- http://www.personal.psu.edu/faculty/k/h/khb4/enve301/301labs/lab4pureculture.html
- Бауман, Р. (2004) Микробиология. Пирсон Бенджамин Каммингс.
- Austerjost J, Marquard D, Raddatz L, Geier D, Becker T, Scheper T, Lindner, P, Beutel S. 2017. Приложение для интеллектуальных устройств для автоматического определения колоний E. coli на чашках с агаром. Инженерия в науках о жизни. 17 (8): 959-966.
- Бхаттачарджи К., Джоши С. 2016. Селективная среда для восстановления и подсчета эндолитических бактерий. Журнал микробиологических методов. 129 (1): 44-54.
- Brugger S, Baumberger C, Jost M, Jenni W, Brugger U, Mühlemann K. 2012. Автоматический подсчет бактериальных колониеобразующих единиц на чашках с агаром. PLoS ONE. 7 (3): 1-6.
- Чанг Дж., Гриншпун С., Виллек К., Манчер Дж., Доннелли С. 1995. Факторы, влияющие на точность подсчета микробиологических колоний для отбора проб и анализа биоаэрозолей. Журнал Американской ассоциации промышленной гигиены. 56 (10): 979-986.
- Чой Q, Ким HJ, Ким JW, Квон ГК, Ку Ш. 2018. Сравнение ручной и автоматической системы штриховки в лаборатории клинической микробиологии: оценка эффективности Previ Isola для посева крови и образцов биологических жидкостей. Журнал клинического лабораторного анализа. 32 (5): 1-7.
- Гын С., Мёнджу Р., Чунг-Мин Р. 2019. Помимо двух отсеков Чашка Петри: Оптимизация стимулирования роста и индуцированной устойчивости огурцов, подвергшихся воздействию газообразных летучих бактерий в миниатюрной тепличной системе. Растительные методы. 15 (1): 1-11.
- Гивари С., Кубасад Г., Дешпанде П. 2012. Сравнительная оценка апикальной экструзии бактерий с использованием ручных и вращающихся систем: исследование in vitro. Журнал консервативной стоматологии. 15 (1): 32-35.
- Джонс Д., Смит Х., Тим Х., Рёст Г. 2012. О распространении фаговой инфекции бактерий в чашке Петри. Журнал SIAM по прикладной математике, 72 (2): 670-688.
- Кабанова Н., Стулова И., Вилу Р. 2013. Микрокалориметрическое исследование роста Lactococcus lactis IL1403 при низкой концентрации глюкозы в жидкостях и твердых гелях агара. Thermochimica Acta, 559: 69-75.
- Ноттингем П., Рашбрук А., Джури К. 1975. Влияние техники посева и температуры инкубации на количество бактерий. IFST. 10 (3): 273-279.
- Сафват, Н. 2013. Автоматизация и не только: повышение эффективности на пути от сбора до ухода. Наблюдатель в медицинской лаборатории. 45 (1).
- Томасино С., Пайнс Р., Коттрилл М., Гамильтон М. 2008. Определение эффективности жидких спороцидов против спор Bacillus subtilis на твердой непористой поверхности с использованием количественного трехэтапного метода: совместное исследование. Журнал AOAC International, 91 (4): 833-852.
- Ван З, Лю И, Фэн С., Ван С. 2016. Выделение и идентификация сахаромицетов в винодельческом регионе Шато Чанъюй Мозер XV. Сельскохозяйственная наука и технологии. 17 (12): 2689-2691, 2700.
Внешние ссылки [ править ]
- Метод посева на чашках с агаром для получения изолированных колоний (видео).
