Из Википедии, свободной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Анализ белка BCA в 96-луночном планшете

Кислоты анализ бицинхониновый ( ВСА анализ ), также известный как анализ Smith После его изобретателя, Пол К. Смит в Pierce Chemical Company , [1] теперь часть Thermo Fisher Scientific, является биохимическим анализом для определения общей концентрации белок в растворе (0,5 мкг / мл до 1,5 мг / мл), аналогичны Метод Лоури , белкового анализ Брэдфорда или биурет реагента . Общая концентрация белка проявляется в изменении цвета раствора образца с зеленого на фиолетовый пропорционально концентрации белка, которую затем можно измерить с помощью колориметрического метода. техники.

Механизм [ править ]

Раствор складе ВСА содержит следующие ингредиенты в высокой щелочной раствор с рН 11,25: бицинхониновой кислоты , карбоната натрия , бикарбоната натрия , тартрата натрия и меди (II) сульфата пентагидрата.

Анализ BCA в основном основан на двух реакциях. Во-первых, пептидные связи в белке восстанавливают ионы Cu 2+ из сульфата меди (II) до Cu + (реакция, зависящая от температуры). Уменьшенное количество Cu 2+ пропорционально количеству белка, присутствующего в растворе. Затем две молекулы бицинхониновой кислоты хелатируют с каждым ионом Cu + , образуя комплекс пурпурного цвета, который сильно поглощает свет с длиной волны 562 нм .

На комплекс бицинхониновой кислоты Cu + в образцах белка влияет присутствие боковых цепей цистеин / цистин, тирозин и триптофан. При более высоких температурах (от 37 до 60 ° C) пептидные связи способствуют образованию реакционного комплекса. Инкубирование анализа BCA при более высоких температурах рекомендуется как способ повышения чувствительности анализа при минимизации отклонений, вызванных неодинаковым аминокислотным составом. [2]

Количество белка, присутствующего в растворе, может быть определено количественно путем измерения спектров поглощения и сравнения с белковыми растворами известной концентрации.

См. Также [ править ]

Ссылки [ править ]

  1. ^ Смит, ПК; и другие. (1985). "Измерение белка с использованием бицинхониновой кислоты". Анальный. Биохим . 150 (1): 76–85. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (85) 90442-7 . PMID  3843705 .
  2. ^ Olsen BJ, Марквелл J (2007). «Анализы для определения концентрации белка» (PDF) . Текущие протоколы в науке о белке : 14–17.
  • Wiechelman, K .; Браун Р. и Фицпатрик Дж. (1988). «Исследование протеина бицинхониновой кислоты: идентификация групп, ответственных за формирование цвета». Анальный. Биохим . 175 (1): 231–7. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (88) 90383-1 . PMID  3245570 .
  • Stoscheck, CM. (1990). «Количественное определение белка». Методы в энзимологии . 182 : 50–69. DOI : 10.1016 / 0076-6879 (90) 82008-P . ISBN 9780121820831. PMID  2314256 .

Внешние ссылки [ править ]

  • OpenWetWare
  • BCA анализ химии