EHA101 была одной из первых и наиболее широко используемых вспомогательных плазмид Agrobacterium для переноса генов растений. Созданный в 1985 году в лаборатории Мэри-Делл Чилтон в Вашингтонском университете в Сент-Луисе , он был назван в честь сконструировавшего его аспиранта . EH означает «Элизабет Худ», а A — « Agrobacterium ». Вспомогательный штамм EHA101 является производным A281, гипервирулентного штамма A. tumefaciens , который вызывает большие быстрорастущие опухоли на пасленовых растениях. [1] [2] Этот штамм используется для переноса интересующих генов во многие сотни видов растений по всему миру.
Для рекальцитрантных культур, таких как кукуруза , пшеница и рис , для переноса генов часто используются вспомогательные штаммы EHA. [3] [4] [5] Эти штаммы эффективно стимулируют перенос Т-ДНК из-за гипервирулентности генов vir [2] , предполагая, что более высокий уровень успеха может быть достигнут на этих «трудно трансформируемых» культурах или сортах .
Хромосомным фоном EHA101 является C58C1, вылеченный штамм нопалина . [1] Вспомогательные штаммы были получены из A281, который представляет собой A136 (pTiBo542). A281 был генетически сконструирован путем двойного кроссовера, сайт-направленной делеции, чтобы получить EHA101, штамм с делецией Т-ДНК, пригодный для переноса гена-мишени в растения. [2] EHA101 устойчив к канамицину за счет гена npt I вместо Т-ДНК. Родительский штамм A281 не проявляет устойчивости к антибиотикам на более высоких уровнях, чем обычный A. tumefaciens.штаммы. Более того, другие трансконъюгированные штаммы на фоне C58C1 не проявляют такой повышенной устойчивости к антибиотикам. Следовательно, эти характеристики являются не просто проявлением хромосомного фона, а, скорее всего, взаимодействием этой плазмиды Ti и хромосомного фона С58.
Ген npt I вместо Т-ДНК в EHA101 требует, чтобы бинарные плазмиды, введенные в штамм, кодировали устойчивость к лекарственным препаратам, отличным от канамицина. Штаммы EHA105 были получены из EHA101 путем направленной делеции гена устойчивости к канамицину из плазмиды Ti, в остальном штаммы идентичны. [6] Этот последний штамм был полезен для биотехнологов растений, которые используют канамицин в качестве селектируемого маркера на своих бинарных плазмидах.