Метод Kinyoun или окрашивание Kinyoun (холодный метод), разработанный Джозефом Дж. Киньюном , представляет собой процедуру, используемую для окрашивания кислотоустойчивых видов бактерий родов Mycobacterium и Nocardia [1] и апикомплексного рода Cryptosporidium . Это разновидность метода, разработанного Робертом Кохом в 1882 году. У некоторых видов бактерий в клеточных стенках есть восковой липид, называемый миколиновой кислотой, который позволяет им окрашивать кислотостойкость лучше, чем краситель по Граму. Уникальная способность микобактерий противостоять обесцвечиванию под действием кислоты и спирта, поэтому их называют кислотоустойчивыми. [2]Он включает нанесение основного красителя ( основной фуксин ), обесцвечивающего средства (кислотно-спиртовой) и контрастного красителя ( метиленовый синий ). [3] В отличие от окрашивания по Цилю-Нильсену ( окрашивание ZN), метод окрашивания по Киньюну не требует нагревания. [4] [5] В красителях Циля-Нильсена тепло действует как физическая протрава, а фенол (карбол карбол фушин) действует как химическая протрава. Поскольку окрашивание по Киньюну является холодным методом (без применения тепла), концентрация используемого карбол фушина увеличивается. [6]
| Применение | Реагент | Цвет ячейки | |
|---|---|---|---|
| Кислотный быстро | Некислотное быстрое | ||
| Первичный краситель | Карбол фуксин | красный | красный |
| Обесцвечивающее средство | Кислый спирт | красный | Бесцветный |
| Счетчик пятен | Метиленовый синий | красный | Синий |
Процедура окрашивания [ править ]
Сделайте кислотостойкое пятно [7] [ править ]
Материалы [ править ]
- Слайд с мазком организма
- Карбол Фуксин
- Кислота-Спирт
- Метиленовый синий
- библейская бумага
- Микроскоп
Инструкции [ править ]
- Сделайте мазок на предметном стекле с организмами
- Очистить слайд, восковую этикетку, размазать организм, высушить на воздухе в течение 10 минут, закрепить нагреванием
- Окуните слайд в Carbol Fuchsin на 20 минут.
- Полоскание слайда
- Окуните предметное стекло в кислотно-спиртовой раствор на 3-5 секунд.
- Полоскание слайда
- Окуните предметное стекло в метиленовый синий на 30 секунд.
- Полоскание слайда
- Промокните предметное стекло сухой бумагой для выпечки.
- Наблюдайте под микроскопом.
Модификация [ править ]
Метод Киньюна можно модифицировать как средство, устойчивое к слабым кислотам, при котором вместо соляной кислоты используется 5% -ная серная кислота. Слабое кислотостойкое окрашивание в дополнение к окрашиванию микобактерий будет окрашивать организмы, которые не могут поддерживать карбол-фуксин после обесцвечивания с помощью HCl.
См. Также [ править ]
Ссылки [ править ]
- ^ Geo F. B и др., Jawetz, Melnick and Adelberg's Medical Microbiology, 25-е издание, Lange Medical, 2004, стр.182.
- ^ .dalynn (октябрь 2014 г.). "КИНЁН КАРБОЛ ФУЧСИН ПЯТЬ" (PDF) .
- ^ Хасси, М., Zayaitz, A., "Acid-Fast Stain Протоколы" архивации 2011-10-01 в Wayback Machine , Американское общество микробиологии , 8 сентября 2008 года Проверено 1 ноября 2014 года.
- ^ Мюррей PR, Барон E, Pfaller M, Tenover F, Yolken, Eds. Руководство по клинической микробиологии. 7-е изд. Вашингтон, округ Колумбия: ASM, 1999.
- ^ Барон EJ, Finegold SM. Диагностическая микробиология Бейли и Скотта. 8-е изд. Сент-Луис: Мосби, 1990.
- ^ Анантанараян и Учебник микробиологии Паникера, 9-е издание, Universities Press (Индия), 2013, стр. 353
- ^ https://faculty.mtsac.edu/cbriggs/Micr-22NewLabmanual2Aug2018.pdf
