Магнитно-активированная сортировка клеток (MACS) - это метод разделения различных популяций клеток в зависимости от их поверхностных антигенов ( молекул CD ), изобретенный Miltenyi Biotec . Название MACS является зарегистрированным товарным знаком компании.
Метод был разработан с помощью системы MACS Miltenyi Biotec, в которой используются суперпарамагнитные наночастицы и колонки. Суперпарамагнитные наночастицы имеют размер порядка 100 нм. Они используются для маркировки целевых ячеек, чтобы захватить их внутри столбца. Колонка помещается между постоянными магнитами, так что, когда комплекс магнитных частиц и клеток проходит через нее, меченые клетки могут быть захвачены. Колонка состоит из стальной ваты, которая увеличивает градиент магнитного поля для максимальной эффективности разделения, когда колонка помещается между постоянными магнитами.
Сортировка клеток с магнитной активацией - широко используемый метод в таких областях, как иммунология, исследования рака, нейробиология и исследования стволовых клеток. Miltenyi продает микрогранулы, которые представляют собой магнитные наночастицы, конъюгированные с антителами, которые можно использовать для нацеливания на определенные клетки.
Процедура [ править ]
Метод MACS позволяет разделять клетки с помощью магнитных наночастиц, покрытых антителами против определенного поверхностного антигена. Это заставляет клетки, экспрессирующие этот антиген, прикрепляться к магнитным наночастицам. После инкубации шариков и клеток раствор переносят в колонку в сильном магнитном поле. На этом этапе клетки, прикрепленные к наночастицам (экспрессирующие антиген), остаются на колонке, в то время как другие клетки (не экспрессирующие антиген) проходят через нее. С помощью этого метода клетки могут быть разделены положительно или отрицательно в отношении конкретного антигена (ов). [ необходима цитата ]
Положительный и отрицательный выбор [ править ]
При положительном отборе клетки, экспрессирующие интересующий антиген (ы), которые прикреплены к магнитной колонке, вымываются в отдельный сосуд после удаления колонки из магнитного поля. Этот метод полезен для выделения определенного типа клеток, например лимфоцитов CD4 .
При отрицательном отборе используется антитело против поверхностного антигена (ов), которые, как известно, присутствуют на клетках, которые не представляют интереса. После введения раствора клеток / магнитных наночастиц на колонку клетки, экспрессирующие эти антигены, связываются с колонкой, и фракция, которая проходит через колонку, собирается, поскольку она почти не содержит клеток с этими нежелательными антигенами.
Модификации [ править ]
Магнитные наночастицы, конъюгированные с антителом против интересующего антигена, не всегда доступны, но есть способ обойти это. Поскольку антитела, конъюгированные с флуорофором , гораздо более распространены, можно использовать магнитные наночастицы, покрытые антителами против флуорохромов. Их инкубируют с флуоресцентно меченными антителами против интересующего антигена и, таким образом, они могут служить для разделения клеток по отношению к антигену. [ необходима цитата ]
Использование в отборе спермы для оплодотворения [ править ]
Это метод, который позволяет нам отбирать сперматозоиды с лучшими качествами, чтобы использовать их в процедурах вспомогательной репродукции и устранять апоптозные. Это способ увеличить вероятность беременности. Метод MACS включает использование крошечных биоразлагаемых магнитных частиц, прикрепленных к антителу (белок аднексин V). Этот белок распознает сперматозоиды, которые умрут до оплодотворения яйцеклетки, связывает их и позволяет отделить их от здоровых сперматозоидов. После того, как частицы с белком аднексина V добавлены к образцу спермы, он проходит через колонки в присутствии магнитного поля, так что апоптозная сперма будет удерживаться колонкой, а здоровая сперма проходит через колонку под действием силы тяжести. Таким образом, мы можем получить здоровую сперму с лучшими физиологическими качествами для использования в процедурах вспомогательной репродукции.
Нет никаких доказательств того, что сортировка клеток с магнитной активацией (MACS) может влиять на количество беременностей, живорождений или выкидышей. [1]
В каких случаях это указывается [ править ]
Этот метод отбора спермы может принести большую пользу парам, у которых причиной бесплодия является мужской фактор или неизвестное происхождение. Врачи указывают на использование этой методики в следующих случаях: Пациенты с патологическим анализом фрагментации ДНК сперматозоидов. Пациенты, которые прошли более двух курсов лечения без наступления беременности. Пациенты с повторными абортами без видимой причины. Плохое эмбриональное качество. Для пациентов, проходящих курс химиотерапии или лучевой терапии. Бесплодие неизвестного происхождения.
Частые вопросы [ править ]
Сколько стоит техника MACS?
Цена на технику MACS обычно составляет около 300-350 евро. Обычно система здравоохранения в настоящее время не финансирует методику MACS в лечении вспомогательной репродукции.
Из скольких неудачных циклов рекомендуется использовать методику MACS?
MACS следует использовать всякий раз, когда в образце спермы обнаруживается уровень апоптоза выше нормы, чтобы избежать повреждения клеток сперматозоидами. Следовательно, он показан в случаях: тяжелого мужского фактора, неудачной имплантации (обычно мы говорим о двух переносах с высококачественными эмбрионами, которые не привели к беременности) и тех предыдущих циклах ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение), в которых оплодотворение или развитие эмбриона имели не было так, как ожидалось, несмотря на то, что образец спермы был нормальным или почти нормальным.
Можно ли проводить MACS со спермой, полученной при биопсии яичек?
Это невозможно, так как сперматозоиды, полученные этим методом, встречаются редко. Поэтому, когда они проходят через столбцы аднексина V, очень вероятно, что их будет недостаточно для проведения лечения.
См. Также [ править ]
Ссылки [ править ]
- ^ Лепайн S, S Макдауэлл, Серл Л.М., Kroon В, Д Glujovsky, Yazdani А (30 июля 2019). «Передовые методы отбора сперматозоидов для вспомогательной репродукции» . Кокрановская база данных систематических обзоров . DOI : 10.1002 / 14651858.CD010461.pub3 . PMC 6699650 .
- С. Мильтеньи, В. Мюллер, В. Вейхель и А. Радбрух, «Высокоградиентное магнитное разделение клеток с помощью MACS», Cytometry, vol. 11, вып. 2. С. 231–238, 1990.
