Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску

Фотоактивированная локализационная микроскопия ( PALM или FPALM ) [1] [2] и микроскопия стохастической оптической реконструкции (STORM) [3] являются широкопольными (в отличие от методов точечного сканирования, таких как лазерная сканирующая конфокальная микроскопия ) методами флуоресцентной микроскопии изображений, которые позволяют получить изображения с разрешением, превышающим дифракционный предел . Эти методы были предложены в 2006 году после повсеместного появления методов оптической микроскопии сверхвысокого разрешения и были отмечены журналом Nature Methods как методы года в 2008 году . [4]Развитие PALM как целевого метода биофизической визуализации в значительной степени было вызвано открытием новых видов и созданием мутантов флуоресцентных белков, демонстрирующих контролируемый фотохромизм , таких как фотоактивируемый GFP . Однако при сопутствующем развитии STORM, основанного на том же фундаментальном принципе, первоначально использовались парные цианиновые красители. Одна молекула пары (называемая активатором) при возбуждении вблизи ее максимума поглощения служит для реактивации другой молекулы (называемой репортером) в флуоресцентное состояние.

Растущее число красителей используется для PALM, STORM и связанных с ними методов, как органических флуорофоров, так и флуоресцентных белков. Некоторые из них совместимы с визуализацией живых клеток, другие позволяют быстрее получать или более плотно маркировать. Выбор конкретного флуорофора в конечном итоге зависит от области применения и от его фотофизических свойств. [5]

Оба метода претерпели значительные технические разработки, [6] в частности, позволяющие получать многоцветные изображения и расширять их до трех измерений, с наилучшим текущим осевым разрешением 10 нм в третьем измерении, полученным с помощью интерферометрического подхода с двумя противоположными объективами, собирающими флуоресценцию от образец. [7]

Принцип [ править ]

Схематическое изображение реконструкции изображения с высоким разрешением путем локализации центроида многих изображений с низким разрешением точечных излучателей света

Обычная флуоресцентная микроскопия выполняется путем выборочного окрашивания образца флуоресцентными молекулами, либо связанными с антителами, как в иммуногистохимии, либо с использованием флуоресцентных белков, генетически слитых с интересующими генами. Как правило, чем более концентрированы флуорофоры, тем лучше контраст флуоресцентного изображения.

Один флуорофор можно визуализировать под микроскопом (или даже невооруженным глазом [8] ), если количество испускаемых фотонов достаточно велико, а фон, напротив, достаточно низкий. Двумерное изображение точечного источника, наблюдаемое под микроскопом, представляет собой протяженное пятно, соответствующее диску Эйри (участок функции рассеяния точки ) системы визуализации. Способность идентифицировать как два отдельных объекта два близко расположенных флуорофора ограничена дифракцией света. Это количественно определяется критерием Аббе , утверждающим, что минимальное расстояние, которое позволяет разрешить два точечных источника, определяется как

где - длина волны флуоресцентного излучения, NA - числовая апертура микроскопа. Теоретический предел разрешения при самой короткой практической длине волны возбуждения составляет около 150 нм в поперечном измерении и приближается к 400 нм в осевом направлении (при использовании объектива с числовой апертурой 1,40 и длиной волны возбуждения 400 нм).

Однако, если излучение двух соседних флуоресцентных молекул сделать различимым, т.е. фотоны, исходящие от каждой из двух, можно идентифицировать, то можно преодолеть дифракционный предел. [9] После того, как набор фотонов от определенной молекулы собран, он образует ограниченное дифракцией пятно в плоскости изображения микроскопа. Центр этого пятна можно найти, сопоставив наблюдаемый профиль излучения с известной геометрической функцией, обычно гауссовой.функционируют в двух измерениях. Ошибка, которая совершается при локализации центра точечного излучателя, масштабируется в первом приближении как обратный квадратный корень из числа излучаемых фотонов, и если собрано достаточно фотонов, легко получить ошибку локализации, намного меньшую, чем исходная точка. функция распространения.

Множественные близко расположенные излучатели неразличимы. Положение точечного источника можно восстановить, только если испускаемые им фотоны были идентифицированы от фотонов, исходящих от соседних молекул.

Два этапа идентификации и локализации отдельных флуоресцентных молекул в плотной среде, где многие из них присутствуют, лежат в основе PALM, STORM и их развития.

Хотя существует множество подходов к молекулярной идентификации, индуцированный светом фотохромизм выбранных флуорофоров стал наиболее многообещающим подходом для различения соседних молекул путем разделения их флуоресцентного излучения во времени. Включив стохастически редкие подмножества флуорофоров со светом определенной длины волны, отдельные молекулы затем могут быть возбуждены и отображены в соответствии с их спектрами. Чтобы избежать накопления активных флуорофоров в образце, которые в конечном итоге деградировали бы обратно до дифракционно-ограниченного изображения, в PALM используется спонтанно возникающее явление фотообесцвечивания , тогда как обратимое переключение между флуоресцентным включенным состоянием и темным выключенным состоянием краситель эксплуатируется в STORM.

Фотоактивация, локализация и отбеливание

Таким образом, PALM и STORM основаны на сборе под флуоресцентным микроскопом большого количества изображений, каждое из которых содержит всего несколько активных изолированных флуорофоров. Последовательность визуализации позволяет выполнять множество циклов излучения, необходимых для стохастической активации каждого флуорофора из не-излучающего (или менее излучающего) состояния в яркое состояние и обратно в не излучающее или обесцвеченное состояние. Во время каждого цикла плотность активированных молекул поддерживается на достаточно низком уровне, чтобы молекулярные изображения отдельных флуорофоров обычно не перекрывались.

Единый кадр ПЗС, отображающий отдельные флуоресцентные белки, возбужденные в режиме полного внутреннего отражения
Последовательность кадров, содержащих изображения одной молекулы

Локализация отдельных флуорофоров [ править ]

На каждом изображении последовательности положение флуорофора вычисляется с точностью, обычно превышающей дифракционный предел - в типичном диапазоне от нескольких до десятков нм - и полученная информация о положении центров всех локализованных молекулы используются для создания изображений PALM или STORM сверхвысокого разрешения.

Точность локализации можно рассчитать по формуле:

где N - количество собранных фотонов, a - размер пикселя детектора изображения, - средний фоновый сигнал и - стандартное отклонение функции рассеяния точки. [10] Требование одновременной локализации нескольких флуорофоров одновременно на протяженной территории определяет причину, по которой эти методы являются широкопольными, поскольку в качестве детектора используются CCD , EMCCD или CMOS- камера.

Требование повышенного отношения сигнал / шум для максимальной точности локализации определяет частое сочетание этой концепции с широкопольными флуоресцентными микроскопами, позволяющими делать оптические срезы, такими как флуоресцентные микроскопы полного внутреннего отражения (TIRF) и световые флуоресцентные микроскопы .

Изображение сверхвысокого разрешения [ править ]

Разрешение окончательного изображения ограничено точностью каждой локализации и количеством локализаций, а не дифракцией. Таким образом, изображение со сверхвысоким разрешением является пуантилистическим представлением координат всех локализованных молекул. Изображение со сверхвысоким разрешением обычно визуализируется путем представления каждой молекулы в плоскости изображения как двумерного гауссова с амплитудой, пропорциональной количеству собранных фотонов, и стандартным отклонением, зависящим от точности локализации.

Самоорганизация сети хемотаксиса Escherichia coli, полученная с помощью световой микроскопии сверхвысокого разрешения. Шкала в (A – E) указывает 1 мкм. Масштабная полоса в (F – H) указывает 50 нм. [11]

Приложения [ править ]

Многоцветный PALM / STORM [ править ]

Стратегии многоцветной локализационной микроскопии. Слева: спектральное разделение. В центре: множественные активаторы (ШТОРМ). Справа: ратиометрическое изображение

Своеобразные фотофизические свойства флуорофоров, используемых в PALM / STORM визуализации сверхвысокого разрешения, создают как ограничения, так и возможности для получения многоцветных изображений. К настоящему времени появились три стратегии: возбуждение спектрально разделенных флуорофоров с использованием эмиссионного светоделителя [12], использование нескольких активаторов / репортеров в режиме STORM [13] [14] и ратиометрическая визуализация спектрально близких флуорофоров. [15]

3D в PALM и STORM [ править ]

Первоначально разработанные как методы визуализации 2D (x, y), PALM и STORM быстро превратились в методы, поддерживающие 3D (x, y, z). Для определения осевого положения отдельного флуорофора в образце в настоящее время используются следующие подходы: модификация функции рассеяния точки для введения z-зависимых особенностей в 2D (x, y) изображение (наиболее распространенный подход - введение астигматизма в PSF); многоплоскостное обнаружение , при котором осевое положение определяется путем сравнения двух изображений одного и того же PSF, расфокусированных одно относительно другого; интерферометрическое определение осевого положения излучателя с использованием двух противоположных объективов и нескольких детекторов; [7] использование временной фокусировкиограничить возбуждение / активацию; использование возбуждения / активации светового слоя для ограничения слоя толщиной в несколько сотен нанометров, произвольно расположенного вдоль z-плоскости внутри образца.

Визуализация живых клеток [ править ]

Требование нескольких циклов активации, возбуждения и деактивации / обесцвечивания обычно подразумевает длительные периоды времени для формирования изображения ЛАБОРАТОРИИ / ШТОРМА и, следовательно, работы с фиксированным образцом. Еще в 2007 г. был опубликован ряд работ [16], в которых выполнялись PALM / STORM на живых клетках. Возможность получения изображений в реальном времени с высоким разрешением с использованием этих методов в конечном итоге зависит от технических ограничений сбора достаточного количества фотонов от одного излучателя за очень короткое время. Это зависит как от фотофизических ограничений зонда, так и от чувствительности используемого детектора. Относительно медленные (от секунд до десятков секунд) процессы, такие как изменение в организации фокальных спаек , были исследованы с помощью PALM [17].в то время как STORM позволил визуализировать более быстрые процессы, такие как мембранная диффузия ямок, покрытых клатрином, или процессы митохондриального деления / слияния. Многообещающим применением PALM живых клеток является использование фотоактивации для выполнения отслеживания одиночных частиц с высокой плотностью (sptPALM [18] ), преодолевая традиционное ограничение отслеживания одиночных частиц для работы с системами, отображающими очень низкую концентрацию флуорофоров.

Нанофотонные взаимодействия [ править ]

Хотя традиционные измерения PALM и STORM используются для определения физической структуры образца, причем интенсивности флуоресцентных событий определяют достоверность локализации, эти интенсивности также можно использовать для картирования взаимодействий флуорофоров с нанофотонными структурами. Это было выполнено как на металлических ( плазмонных ) структурах, таких как золотые наностержни [19] [20], так и на полупроводниковых структурах, таких как кремниевые нанопроволоки. [21]Эти подходы могут быть использованы либо для флуорофоров, функционализированных на поверхности исследуемого образца (как для упомянутых здесь исследований плазмонных частиц), либо для случайной адсорбции на подложке, окружающей образец, что позволяет полностью 2D-картировать взаимодействия флуорофор-наноструктура во всех положениях. относительно конструкции. [21]

Эти исследования показали, что, в дополнение к стандартной неопределенности локализации из-за подгонки функции рассеяния точки , самоинтерференция света, рассеянного наночастицами, может привести к искажениям или смещению отображаемых функций рассеяния точки [20] [21], что усложняет анализ таких измерений. Однако их можно ограничить, например, путем включения метаповерхностных масок, которые контролируют угловое распределение света, разрешенного в системе измерения. [22]

Различия между PALM и STORM [ править ]

PALM и STORM имеют общий фундаментальный принцип, и многочисленные разработки, как правило, сделали эти две техники еще более взаимосвязанными. Тем не менее, они отличаются некоторыми техническими деталями и принципиальным моментом. С технической стороны, PALM выполняется на биологическом образце с использованием флуорофоров, экзогенно экспрессируемых в форме генетических конструкций слияния с фотоактивируемым флуоресцентным белком. Вместо этого STORM использует иммуномаркирование эндогенных молекул в образце антителами, меченными органическими флуорофорами. В обоих случаях флуорофоры переводятся между активным включенным и неактивным состоянием с помощью света. Однако в PALM фотоактивация и фотообесцвечивание ограничивают жизнь флуорофора ограниченным интервалом времени, и желательно непрерывное излучение флуорофора между ними без какой-либо перемежающейся флуоресценции.В стохастике STORMфотомигание органических флуорофоров (обычно ярче, чем флуоресцентные белки) первоначально использовалось для разделения соседних красителей. В этом отношении, чем сильнее мигание, тем выше вероятность различения двух соседних флуорофоров.

В связи с этим в нескольких исследовательских работах изучали потенциал PALM для количественного определения количества флуорофоров (и, следовательно, представляющих интерес белков), присутствующих в образце, путем подсчета активированных флуорофоров. [11] [23] [24] Подход, используемый для обработки флуоресцентной динамики флуоресцентной метки, использованный в экспериментах, будет определять окончательный вид изображения сверхвысокого разрешения и возможность определения однозначного соответствия между событием локализации и белок в образце.

Мультимедиа [ править ]

  • Воспроизвести медиа

    Иммобилизованные флуоресцентные белки фотоактивируются, возбуждаются и обесцвечиваются

  • Воспроизвести медиа

    Динамическая визуализация дендритных шипов со сверхвысоким разрешением с использованием фотопреобразованного актина с низким сродством. [25]

  • Воспроизвести медиа

    Исследование динамики подкожного актина в нейронах гиппокампа крыс с помощью оптической микроскопии сверхвысокого разрешения [26]

Ссылки [ править ]

  1. ^ Э. Бетциг; Г. Х. Паттерсон; Р. Суграт; О. У. Линдвассер; С. Оленич; Дж. С. Бонифачино; М. В. Дэвидсон; Дж. Липпинкотт-Шварц; HF Hess (2006). «Визуализация внутриклеточных флуоресцентных белков с нанометровым разрешением» . Наука . 313 (5793): 1642–1645. Bibcode : 2006Sci ... 313.1642B . DOI : 10.1126 / science.1127344 . PMID  16902090 .
  2. ^ ST Hess; Т.П. Гиряджан; Доктор медицины Мейсон (2006). «Визуализация сверхвысокого разрешения с помощью флуоресцентной фотоактивационной локальной микроскопии» . Биофизический журнал . 91 (11): 4258–4272. Bibcode : 2006BpJ .... 91.4258H . DOI : 10.1529 / biophysj.106.091116 . PMC 1635685 . PMID 16980368 .  
  3. ^ MJ Rust; М. Бейтс; X. Чжуан (2006). «Субдифракционная визуализация с помощью микроскопии стохастической оптической реконструкции (STORM)» . Природные методы . 3 (20): 793–796. DOI : 10.1038 / nmeth929 . PMC 2700296 . PMID 16896339 .  
  4. ^ «Метод года 2008» . Природные методы . 6 (1): 1–109. 2009. DOI : 10.1038 / nmeth.f.244 .
  5. ^ Ха, Taekjip & Tinnefeld, Филипп (2012). "Фотофизика флуоресцентных зондов для биофизики одиночных молекул и визуализации сверхвысокого разрешения" . Ежегодный обзор физической химии . 63 (1): 595–617. Bibcode : 2012ARPC ... 63..595H . DOI : 10,1146 / annurev-physchem-032210-103340 . PMC 3736144 . PMID 22404588 .  
  6. ^ Бо Хуанг, Хазен Бэбкок и Сяовей Чжуан (2010). «Преодолевая дифракционный барьер: визуализация клеток со сверхвысоким разрешением» . Cell . 143 (7): 1047–58. DOI : 10.1016 / j.cell.2010.12.002 . PMC 3272504 . PMID 21168201 .  
  7. ^ а б Штенгель, Глеб и Гэлбрейт, Джеймс А. и Гэлбрейт, Кэтрин Г. и Липпинкотт-Шварц, Дженнифер и Джиллетт, Дженнифер М. и Мэнли, Сулиана и Суграт, Рашид и Уотерман, Клэр М. и Канчанавонг, Пакорн и Дэвидсон , Майкл В. и Феттер, Ричард Д. и Гесс, Харальд Ф. (2009). «Интерферометрическая флуоресцентная микроскопия сверхвысокого разрешения разрешает трехмерную клеточную ультраструктуру» . Труды Национальной академии наук . 106 (9): 3125–3130. Bibcode : 2009PNAS..106.3125S . DOI : 10.1073 / pnas.0813131106 . PMC 2637278 . PMID 19202073 .  CS1 maint: multiple names: authors list (link)
  8. ^ WE Moerner; Д. П. Фромм (2003). «Методы флуоресцентной спектроскопии одиночных молекул и индивидуальные флуоресцентные зонды» . Обзор научных инструментов . 74 (8): 3597–3619. Bibcode : 2003RScI ... 74.3597M . DOI : 10.1063 / 1.1589587 .
  9. ^ Е. Betzig (1995). «Предлагаемый метод молекулярно-оптической визуализации». Письма об оптике . 20 (3): 237–239. Bibcode : 1995OptL ... 20..237B . DOI : 10.1364 / OL.20.000237 . PMID 19859146 . 
  10. ^ К.И. Мортенсен; Л. С. Черчман; Я. А. Спудич; Х. Фливбьерг (2010). «Оптимизированный анализ локализации для отслеживания одиночных молекул и микроскопии сверхвысокого разрешения» . Природные методы . 7 (5): 377–381. DOI : 10.1038 / nmeth.1447 . PMC 3127582 . PMID 20364147 .  
  11. ^ а б Гринфилд Д., Макэвой А.Л., Шрофф Х., Крукс Г.Е., Вингрин Н.С. и др. (2009). «Самоорганизация сети хемотаксиса Escherichia coli, полученная с помощью световой микроскопии сверхвысокого разрешения» . PLOS Биология . 7 (6): e1000137. DOI : 10.1371 / journal.pbio.1000137 . PMC 2691949 . PMID 19547746 .  
  12. ^ Шрофф Н, Гэлбрейт CG, Гэлбрейт JA, белый Н, Жилетт Дж, Olenych S, Дэвидсон МВт, Betzig Е (2007). «Двухцветная визуализация сверхвысокого разрешения генетически экспрессируемых зондов в индивидуальных адгезионных комплексах» . Труды Национальной академии наук . 104 (51): 20308–20313. Bibcode : 2007PNAS..10420308S . DOI : 10.1073 / pnas.0710517105 . PMC 2154427 . PMID 18077327 .  
  13. ^ М Бейтс; Б Хуанг; Г.Т. Демпси; Х Чжуан (2007). «Многоцветная визуализация сверхвысокого разрешения с фото-переключаемыми флуоресцентными датчиками» . Наука . 317 (5845): 1749–1753. Bibcode : 2007Sci ... 317.1749B . DOI : 10.1126 / science.1146598 . PMC 2633025 . PMID 17702910 .  
  14. ^ Бок, H .; и другие. (2007). «Двухцветная флуоресцентная наноскопия в дальней зоне на основе фотопереключаемых излучателей». В прикладной физике . 88 (2): 161–165. Bibcode : 2007ApPhB..88..161B . DOI : 10.1007 / s00340-007-2729-0 .
  15. ↑ Testa I, Wurm CA, Medda R, Rothermel E, von Middendorf C, Folling J, Jakobs S, Schonle A, Hell SW, Eggeling C (2010). «Многоцветная флуоресцентная наноскопия в фиксированных и живых клетках путем возбуждения обычных флуорофоров одной длиной волны» . Биофизический журнал . 99 (8): 2686–2694. Bibcode : 2010BpJ .... 99.2686T . DOI : 10.1016 / j.bpj.2010.08.012 . PMC 2956215 . PMID 20959110 .  
  16. ^ Гесс, Сэмюэл Т. и Гулд, Трэвис Дж. И Гудети, Манаса В. и Маас, Сара А. и Миллс, Кевин Д. и Циммерберг, Джошуа (2007). «Динамическое кластерное распределение гемагглютинина, разрешенного при 40 нм в мембранах живых клеток, различает теории рафта» . Труды Национальной академии наук . 104 (44): 17370–17375. Bibcode : 2007PNAS..10417370H . DOI : 10.1073 / pnas.0708066104 . PMC 2077263 . PMID 17959773 .  CS1 maint: multiple names: authors list (link)
  17. ^ Шрофф, Х., CG Galbraith, JA Galbraith и E. Betzig (2008). "Фотоактивированная локализационная микроскопия живых клеток наноразмерной динамики адгезии" . Природные методы . 5 (44): 417–423. DOI : 10.1038 / nmeth.1202 . PMC 5225950 . PMID 18408726 .  CS1 maint: multiple names: authors list (link)
  18. ^ S Manley; JM Gillette; Г. Х. Паттерсон; H Shroff; HF Hess; Э. Бетциг; Дж. Липпинкотт-Шварц (2008). «Картирование траекторий одиночных молекул с высокой плотностью при помощи фотоактивированной микроскопии локализации» . Природные методы . 5 (2): 155–157. DOI : 10.1038 / nmeth.1176 . PMID 18193054 . 
  19. ^ Чжоу, Сяочунь; Андой, Неша Мэй; Лю, Гуокун; Чоудхари, Эрик; Хан, Кю-Сун; Шэнь, Хао; Чен, Пэн (2012). «Количественная визуализация сверхвысокого разрешения выявляет картины реакционной способности на отдельных нанокатализаторах» . Природа Нанотехнологии . 7 (4): 237–241. Bibcode : 2012NatNa ... 7..237Z . DOI : 10.1038 / nnano.2012.18 . ISSN 1748-3387 . PMID 22343380 .  
  20. ^ а б Линь, Хунчжэнь; Centeno, Silvia P .; Су, Лян; Кененс, Барт; Роча, Сусана; Слива, Мишель; Хофкенс, Йохан; Удзи-и, Хироши (2012). «Картирование поверхностно-усиленной флуоресценции на металлических наночастицах с помощью локализационной микроскопии фотоактивации сверхвысокого разрешения». ХимФисХим . 13 (4): 973–981. DOI : 10.1002 / cphc.201100743 . ISSN 1439-4235 . PMID 22183928 .  
  21. ^ a b c Джолин, Эрик; Солари, Якопо; Mann, Sander A .; Ван, Цзя; Shimizu, Thomas S .; Гарнетт, Эрик К. (2016). "Визуализация сверхвысокого разрешения взаимодействия света и вещества вблизи одиночных полупроводниковых нанопроволок" . Nature Communications . 7 : 13950. Bibcode : 2016NatCo ... 713950J . DOI : 10.1038 / ncomms13950 . ISSN 2041-1723 . PMC 5187462 . PMID 27996010 .   
  22. ^ Backlund, Mikael P .; Арбаби, Амир; Петров, Петар Н .; Арбаби, Эхсан; Саураб, Саумья; Фараон, Андрей; Моернер, WE (2016). «Устранение смещений локализации, вызванных ориентацией, в микроскопии одиночных молекул с использованием широкополосной метаповерхностной маски» (PDF) . Природа Фотоника . 10 (7): 459–462. Bibcode : 2016NaPho..10..459B . DOI : 10.1038 / nphoton.2016.93 . ISSN 1749-4885 . PMC 5001689 . PMID 27574529 .    
  23. ^ П. Аннибале; S Vanni; М. Скарселли; У Ротлисбергера; Раденович (2011). «Количественная фотоактивированная локализационная микроскопия: раскрытие эффектов фотомигания» . PLOS ONE . 6 (7): p.e22678, 07. Bibcode : 2011PLoSO ... 622678A . DOI : 10.1371 / journal.pone.0022678 . PMC 3144238 . PMID 21818365 .  
  24. Перейти ↑ Lee, Sang-Hyuk and Shin, Jae Yen and Lee, Antony and Bustamante, Carlos (2012). «Подсчет одиночных фотоактивируемых флуоресцентных молекул с помощью фотоактивированной локализационной микроскопии (PALM)» . Труды Национальной академии наук . 109 (43): 17436–17441. Bibcode : 2012PNAS..10917436L . DOI : 10.1073 / pnas.1215175109 . PMC 3491528 . PMID 23045631 .  CS1 maint: multiple names: authors list (link)
  25. ^ Izeddin I, Specht CG, Lelek M, Darzacq X, Triller A и др. (2011). «Динамическая визуализация дендритных шипов сверхвысокого разрешения с использованием низкоаффинного фотопреобразователя актина» . PLOS ONE . 6 (1): e15611. Bibcode : 2011PLoSO ... 615611I . DOI : 10.1371 / journal.pone.0015611 . PMC 3022016 . PMID 21264214 .  
  26. ^ Tatavarty В, Ким Е, Родионов В, Ю. J (2009). "Изучение динамики актина подпосточного отдела в нейронах гиппокампа крыс с помощью оптических изображений сверхвысокого разрешения" . PLOS ONE . 4 (11): e7724. DOI : 10.1371 / journal.pone.0007724 . PMC 2771285 . PMID 19898630 .  

Внешние ссылки [ править ]

  • Микроскопия сверхвысокого разрешения на образовательной странице Zeiss в области микроскопии и цифровой обработки изображений
  • Основные принципы сверхразрешения в образовательных ресурсах Nikon для обучения микроскопии
  • Эрик Бетциг и Харальд Хесс обсуждают: Развитие ЛАДОННОЙ микроскопии
  • Выступление Сяовей Чжуана: микроскопия сверхвысокого разрешения
  • Световая микроскопия: продолжающаяся современная революция (вводный обзор)