Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Хромогенная иммуногистохимия нормальной почки, направленная на белок CD10 .
Иммунофлуоресценция кожи человека с использованием антитела против IgA. Кожа пациента с пурпурой Геноха – Шенлейна : отложения IgA обнаруживаются в стенках мелких поверхностных капилляров (желтые стрелки). Бледно-волнистая зеленая область сверху - это эпидермис , нижняя фиброзная область - дерма .

Иммуногистохимия ( ИГХ ) - наиболее распространенное применение иммуноокрашивания . Он включает в себя процесс выборочной идентификации антигенов (белков) в клетках участка ткани с использованием принципа специфического связывания антител с антигенами в биологических тканях . [1] IHC берет свое название от корней «иммуно» в отношении антител, используемых в процедуре, и «гисто», что означает ткань (сравните с иммуноцитохимией ). Альберт Кунс разработал и впервые применил эту процедуру в 1941 году. [2]

Визуализировать взаимодействие антитело-антиген можно несколькими способами, в основном одним из следующих:

Иммуногистохимическое окрашивание широко используется для диагностики аномальных клеток, таких как те, которые обнаруживаются в раковых опухолях. Специфические молекулярные маркеры характерны для определенных клеточных событий, таких как пролиферация или гибель клеток ( апоптоз ). [4] Иммуногистохимия также широко используется в фундаментальных исследованиях для понимания распределения и локализации биомаркеров и дифференциально экспрессируемых белков в разных частях биологической ткани.

Подготовка образца [ править ]

Подготовка образца имеет решающее значение для сохранения морфологии клеток, архитектуры ткани и антигенности целевых эпитопов . Это требует надлежащего сбора, фиксации и разрезания тканей . Для фиксации ткани часто используется раствор формалина , но могут применяться и другие методы.

Подготовка срезов ткани [ править ]

Затем ткань можно разрезать или использовать целиком, в зависимости от цели эксперимента или самой ткани. Перед разрезанием образец ткани можно залить средой, например парафином или криомедиа. Срезы можно нарезать с помощью различных инструментов, чаще всего микротома , криостата или вибратома . Образцы обычно нарезают в диапазоне от 3 до 5 мкм . [ необходимая цитата ] Затем срезы помещают на предметные стекла, обезвоживают с помощью спиртовых промывок с возрастающей концентрацией (например, 50%, 75%, 90%, 95%, 100%) и очищают с помощью детергента, такого как ксилол, перед тем, как отобразить под микроскоп.

В зависимости от метода фиксации и сохранения ткани для образца могут потребоваться дополнительные шаги, чтобы сделать эпитопы доступными для связывания антител, включая депарафинизацию и поиск антигена. Для фиксированных формалином и залитых парафином тканей часто требуется извлечение антигена, которое включает предварительную обработку срезов нагреванием или протеазой . [1] [5] Эти шаги могут иметь значение между окрашиванием целевых антигенов или отсутствием окрашивания.

Снижение неспецифического иммуноокрашивания [ править ]

В зависимости от типа ткани и метода обнаружения антигена может потребоваться блокировка или подавление эндогенного биотина или ферментов до окрашивания антителами. Хотя антитела проявляют предпочтительную авидность к специфическим эпитопам, они могут частично или слабо связываться с сайтами неспецифических белков (также называемыми реактивными сайтами), которые аналогичны родственным сайтам связывания на антигене-мишени. Большое количество неспецифического связывания вызывает сильное фоновое окрашивание, которое маскирует обнаружение целевого антигена. Чтобы уменьшить фоновое окрашивание при IHC, ICC и других методах иммуноокрашивания, образцы инкубируют с буфером, который блокирует реактивные сайты, с которыми в противном случае могут связываться первичные или вторичные антитела. Общая блокировкабуферы включают нормальную сыворотку, обезжиренное сухое молоко, BSA или желатин. Для большей эффективности доступны коммерческие блокирующие буферы с запатентованными составами. Методы устранения фонового окрашивания включают разведение первичных или вторичных антител, изменение времени или температуры инкубации и использование другой системы обнаружения или другого первичного антитела. Контроль качества должен, как минимум, включать ткань, которая, как известно, экспрессирует антиген, в качестве положительного контроля и отрицательные контроли ткани, которая, как известно, не экспрессирует антиген, а также тестируемую ткань, зондируемую таким же образом, с исключением первичного антитела (или лучше , абсорбция первичного антитела). [1]

Образец маркировки [ править ]

Типы антител [ править ]

Антитела, используемые для специфического обнаружения, могут быть поликлональными или моноклональными . Поликлональные антитела получают путем инъекции животным представляющего интерес белка или пептидного фрагмента и выделения антител из цельной сыворотки после стимуляции вторичного иммунного ответа. Таким образом, поликлональные антитела представляют собой гетерогенную смесь антител, распознающих несколько эпитопов . Моноклональные антитела получают путем инъекции животному, а затем взятия определенного образца иммунной ткани, выделения родительской клетки и использования полученной иммортализованной линии для создания антител. Это заставляет антитела проявлять специфичность в отношении одного эпитопа. [6]

Для стратегий иммуногистохимического обнаружения антитела классифицируются как первичные или вторичные реагенты. Первичные антитела вырабатываются против интересующего антигена и обычно неконъюгированы (немечены), в то время как вторичные антитела вырабатываются против иммуноглобулинов первичных видов антител. Вторичное антитело обычно конъюгировано с линкерной молекулой, такой как биотин , которая затем привлекает репортерные молекулы, или само вторичное антитело непосредственно связывается с репортерной молекулой. [3]

Репортеры IHC [ править ]

Молекулы-репортеры различаются в зависимости от метода обнаружения, наиболее популярными из которых являются хромогенное и флуоресцентное обнаружение, опосредованное ферментом или флуорофором соответственно. С хромогенными репортерами ферментная метка реагирует с субстратом, давая сильно окрашенный продукт, который можно проанализировать с помощью обычного светового микроскопа. Хотя список ферментных субстратов обширен, щелочная фосфатаза (AP) и пероксидаза хрена (HRP) являются двумя ферментами, наиболее широко используемыми в качестве меток для обнаружения белков. Доступен ряд хромогенных, флуорогенных и хемилюминесцентных субстратов для использования с любым ферментом, включая DAB или BCIP / NBT., которые вызывают коричневое или пурпурное окрашивание, соответственно, везде, где связаны ферменты. Реакция с DAB может быть улучшена с использованием никеля , [7] производит глубокое фиолетовое / черное окрашивание.

Флуоресцентные репортеры - это небольшие органические молекулы, используемые для обнаружения IHC и традиционно включающие FITC , TRITC и AMCA, в то время как коммерческие производные, включая Alexa Fluors и Dylight Fluors, демонстрируют аналогичные улучшенные характеристики, но различаются по цене. Для хромогенных и флуоресцентных методов обнаружения денситометрический анализ сигнала может предоставить полу- и полностью количественные данные, соответственно, для корреляции уровня репортерного сигнала с уровнем экспрессии или локализации белка.

Хромогенная иммуногистохимия: клетка подвергается действию первичного антитела (красный цвет), которое связывается со специфическим антигеном (фиолетовый квадрат). Первичное антитело связывает вторичное (зеленое) антитело, которое химически связано с ферментом (синий). Фермент меняет цвет субстрата на более пигментированный (коричневая звездочка).

Методы обнаружения целевого антигена [ править ]

Прямой метод является одним шагом окрашивания методом и включает меченого антитела (например , FITC , -conjugated антисыворотки ) взаимодействие непосредственно с антигеном в срезах ткани. Хотя этот метод использует только одно антитело и, следовательно, является простым и быстрым, чувствительность ниже из-за небольшого усиления сигнала, в отличие от непрямых подходов. [3] Однако эта стратегия используется реже, чем ее многоэтапный аналог.

Косвенный метод включает немеченого первичного антитела (первый слой) , который связывается с мишенью антигена в ткани и меченым вторичным антителом (второй слой) , который вступает в реакцию с первичным антителом. Как упоминалось выше, вторичные антитела должны вырабатываться против IgG того вида животных, у которых было повышено первичное антитело. Этот метод более чувствителен, чем стратегии прямого обнаружения, из-за усиления сигнала из-за связывания нескольких вторичных антител с каждым первичным антителом, если вторичное антитело конъюгировано с флуоресцентным или ферментным репортером. [3]

Дальнейшее усиление может быть достигнуто , если вторичное антитело конъюгирует с несколькими биотином молекул, которые могут вербуют комплексы авидина -, стрептавидин - или NeutrAvidin белок -связанного фермент. [3] Разница между этими тремя биотин-связывающими белками заключается в их индивидуальной аффинности связывания с эндогенными тканевыми мишенями, что приводит к неспецифическому связыванию и высокому фону; ранжирование этих белков, основанное на их аффинности неспецифического связывания, от наивысшего к низшему: 1) авидин, 2) стрептавидин и 3) белок нейтр-авидин.

Непрямой метод, помимо большей чувствительности, также имеет то преимущество, что необходимо генерировать только относительно небольшое количество стандартных конъюгированных (меченых) вторичных антител. Например, меченое вторичное антитело, продуцируемое против кроличьего IgG, которое можно приобрести "с полки", можно использовать с любым первичным антителом кролика. Это возможно, потому что все кроличьи IgG в этом примере будут иметь одну и ту же Fc (константную) область, таким образом, даже при небольшом количестве образованных вторичных антител против кролика, каждое из них может прикрепиться к любому первичному антителу кролика. [3]Это особенно полезно, когда исследователь маркирует более одного первичного антитела, будь то из-за поликлональной селекции, производящей массив первичных антител для единственного антигена, или когда есть интерес к множеству антигенов. При использовании прямого метода необходимо пометить каждое первичное антитело для каждого интересующего антигена.

Контрасты [ править ]

После иммуногистохимического окрашивания антигена-мишени часто применяется второе окрашивание для обеспечения контраста, который помогает выделиться первичному окрашиванию. Многие из этих красителей проявляют специфичность к определенным классам биомолекул, в то время как другие окрашивают всю клетку. [3] Для ИГХ доступны как хромогенные, так и флуоресцентные красители, чтобы предоставить широкий спектр реагентов для любого дизайна эксперимента, в том числе: обычно используются гематоксилин , краситель Хёхста и DAPI .

Устранение неполадок [ править ]

В иммуногистохимических методах есть несколько этапов до окончательного окрашивания тканевого антигена, что может вызвать множество проблем, включая сильное фоновое окрашивание, слабое окрашивание целевого антигена и автофлуоресценцию . Эндогенный биотин или репортерные ферменты или перекрестная реактивность первичных / вторичных антител являются частыми причинами сильного фонового окрашивания, в то время как слабое окрашивание может быть вызвано низкой активностью фермента или активностью первичных антител. Кроме того, автофлуоресценция может быть связана с природой ткани или методом фиксации. Эти аспекты подготовки ткани и окрашивания антител должны систематически рассматриваться для выявления и преодоления проблем с окрашиванием. [8]

Диагностические маркеры IHC [ править ]

ИГХ - это превосходный метод обнаружения и огромное преимущество, заключающееся в возможности точно показать, где именно находится данный белок в исследуемой ткани. Это также эффективный способ исследования тканей. Это сделало этот метод широко используемым в нейробиологии , позволяя исследователям изучать экспрессию белков в определенных структурах мозга. Его главный недостаток заключается в том, что, в отличие от методов иммуноблоттинга , где окрашивание проверяется по лестнице молекулярной массы , с помощью ИГХ невозможно показать, что окрашивание соответствует интересующему белку. По этой причине первичные антитела должны быть хорошо подтверждены с помощью вестерн-блоттинга или аналогичной процедуры. Этот метод еще более широко используется в диагностике.хирургическая патология при иммунофенотипировании опухолей (например, иммуноокрашивание на е-кадгерин для дифференциации DCIS (протоковая карцинома in situ: окрашивание положительно) и LCIS (лобулярная карцинома in situ: не дает положительного окрашивания) [9] ). Совсем недавно иммуногистохимические методы стали полезными для дифференциальной диагностики множественных форм карциномы слюнных желез, головы и шеи. [10]

Разнообразие маркеров ИГХ, используемых в диагностической хирургической патологии, весьма велико. Многие клинические лаборатории в больницах третичного уровня имеют меню из более чем 200 антител, используемых в качестве диагностических, прогностических и прогностических биомаркеров. Примеры некоторых часто используемых маркеров:

  • BrdU : используется для идентификации реплицирующихся клеток. Используется для выявления опухолей, а также в исследованиях нейробиологии. [11]
  • Цитокератины : используются для идентификации карцином, но могут также экспрессироваться в некоторых саркомах. [12]
  • CD15 и CD30: используются при болезни Ходжкина .
  • Альфа-фетопротеин : при опухолях желточного мешка и гепатоцеллюлярной карциноме .
  • CD117 (KIT): для опухолей стромы желудочно-кишечного тракта (GIST) и опухолей тучных клеток.
  • CD10 (CALLA): при почечно-клеточном раке и остром лимфобластном лейкозе .
  • Специфический антиген простаты (ПСА): при раке простаты .
  • Окрашивание эстрогенами и рецепторами прогестерона (ER & PR) используется как для диагностики (опухоли груди и гинекологии), так и для прогнозирования рака груди и для прогнозирования ответа на терапию (рецептор эстрогена).
  • Идентификация В-клеточных лимфом с помощью CD20 .
  • Идентификация Т-клеточных лимфом с помощью CD3 .
Окрашивание ПИН-4 доброкачественной железы (слева) и аденокарциномы простаты (справа) с помощью коктейля ПИН-4. В аденокарциноме отсутствуют базальные эпителиальные клетки (окрашенные в темно-коричневый цвет с помощью p63 , CK-5 и CK-14 ). Кроме того, в образцах, окрашенных PIN-4, клетки аденокарциномы обычно имеют красные цитоплазмы (окрашенные AMACR ).
  • Коктейль PIN-4, нацеленный на p63 , CK-5 , CK-14 и AMACR (последний также известный как P504S), и используемый для отличия аденокарциномы простаты от доброкачественных желез.

Направляющая терапия [ править ]

При раке изменяются различные молекулярные пути, и некоторые изменения могут быть нацелены на лечение рака. Иммуногистохимия может использоваться для оценки того, какие опухоли, вероятно, будут реагировать на терапию, путем обнаружения присутствия или повышенных уровней молекулярной мишени.

Химические ингибиторы [ править ]

Биология опухоли учитывает ряд потенциальных внутриклеточных мишеней. Многие опухоли гормонально зависимы. Присутствие рецепторов гормонов можно использовать для определения того, может ли опухоль реагировать на антигормональную терапию. Одним из первых препаратов для лечения рака груди был тамоксифен , антиэстроген . Такие рецепторы гормонов можно обнаружить с помощью иммуногистохимии. [13] Иматиниб , внутриклеточный ингибитор тирозинкиназы , был разработан для лечения хронического миелолейкоза , заболевания, характеризующегося образованием специфической аномальной тирозинкиназы. Имитаниб доказал свою эффективность при опухолях, которые экспрессируют другие тирозинкиназы, в первую очередь KIT. Большинство стромальных опухолей желудочно-кишечного трактаэкспресс KIT, который может быть обнаружен с помощью иммуногистохимии. [14]

Моноклональные антитела [ править ]

Основная статья: терапия моноклональными антителами

Многие белки, которые, как было показано с помощью иммуногистохимии, сильно активируются при патологических состояниях, являются потенциальными мишенями для лечения с использованием моноклональных антител . Моноклональные антитела из-за своего размера используются против мишеней на клеточной поверхности. Среди сверхэкспрессированных мишеней присутствуют члены семейства EGFR , трансмембранные белки с внеклеточным рецепторным доменом, регулирующие внутриклеточную тирозинкиназу. [15] Из них HER2 / neu (также известный как Erb-B2) был первым, который был разработан. Эта молекула сильно экспрессируется в различных типах раковых клеток, в первую очередь в раке груди. Таким образом, антитела против HER2 / neu были одобрены FDA для клинического лечения рака под названием препарата Герцептин.. Существуют коммерчески доступные иммуногистохимические тесты, Dako HercepTest, Leica Biosystems Oracle [16] и Ventana Pathway. [17]

Аналогичным образом, EGFR (HER-1) сверхэкспрессируется при различных формах рака, включая рак головы, шеи и толстой кишки. Иммуногистохимия используется для определения пациентов, которым могут быть полезны терапевтические антитела, такие как Эрбитукс (цетуксимаб). [18] Коммерческие системы для определения EGFR с помощью иммуногистохимии включают Dako PharmDx.

Картирование экспрессии белка [ править ]

Иммуногистохимия также может использоваться для более общего профилирования белков при условии наличия антител, проверенных для иммуногистохимии. Атлас белков человека отображает карту экспрессии белков в нормальных органах и тканях человека. Комбинация иммуногистохимии и тканевых микрочипов обеспечивает модели экспрессии белков в большом количестве различных типов тканей. Иммуногистохимия также используется для определения профиля белков при наиболее распространенных формах рака человека. [19] [20]

См. Также [ править ]

  • Кожные заболевания по данным иммунофлуоресценции
  • Хромогенная гибридизация in situ

Ссылки [ править ]

  1. ^ a b c Рамос-Вара, Дж. А; Миллер М.А. (2014). «Когда тканевые антигены и антитела уживутся: пересмотр технических аспектов иммуногистохимии - красный, коричневый и синий методы» . Ветеринарная патология . 51 (1): 42–87. DOI : 10.1177 / 0300985813505879 . PMID  24129895 .
  2. ^ Coons AH, Creech HJ, Jones RN: Иммунологические свойства антитела, содержащего флуоресцентную группу. Proc Soc Exp Biol Med 1941; 47: 200-202.
  3. ^ a b c d e f g Рамос-Вара, Дж. А. (2005). «Технические аспекты иммуногистохимии» . Ветеринарная патология . 42 (4): 405–426. DOI : 10.1354 / vp.42-4-405 . PMID 16006601 . 
  4. ^ Уайтсайд, G; Мунглани, Р. (1998). «Тройное мечение TUNEL, Hoechst и иммуногистохимия: усовершенствованный метод обнаружения апоптоза в срезах ткани - обновление». Протоколы исследования мозга . 3 (1): 52–53. DOI : 10.1016 / s1385-299x (98) 00020-8 . PMID 9767106 . 
  5. ^ AbD Serotec. «Совет IHC 1: Получение антигена - что делать PIER или HIER?» . AbD Serotec . Архивировано из оригинала на 2016-04-23 . Проверено 26 мая 2015 .
  6. ^ Pohanka, Miroslav (2009). «Продукция моноклональных и поликлональных антител - подготовка мощного элемента биораспознавания» (PDF) . J Appl Biomed . 7 (3): 115–121. DOI : 10.32725 / jab.2009.012 . Архивировано из оригинального (PDF) 18 апреля 2017 года . Проверено 18 апреля 2017 .
  7. ^ Ковентри, BJ; Брэдли, Дж; Скиннер, JM (июль 1995 г.). «Различия между стандартной и высокочувствительной иммуногистологией на срезах тканей - сравнение методов окрашивания иммунопероксидазой с использованием компьютерных методов анализа видеоизображений». Патология . 27 (3): 221–3. DOI : 10.1080 / 00313029500169013 . PMID 8532386 . 
  8. ^ Торлакович, Эмина Э .; Cheung, Кэрол С .; д'Арриго, Коррадо; Дитель, Манфред; Фрэнсис, Гленн Д.; Гилкс, К. Блейк; Холл, Жаклин А .; Хорник, Джейсон Л .; Ибрагим, Мердол; Маркетти, Антонио; Миллер, Кейт; Ван Крикен, Дж. Хан; Нильсен, Сорен; Swanson, Paul E .; Выберг, Могенс; Чжоу, Сяогэ; Тейлор, Клайв Р. (2017). «Эволюция обеспечения качества для клинической иммуногистохимии в эпоху точной медицины - Часть 2». Прикладная иммуногистохимия и молекулярная морфология . 25 (2): 79–85. DOI : 10,1097 / PAI.0000000000000444 . hdl : 2066/173083 . PMID 28182587 . 
  9. ^ О'Мэлли Ф и Пиндер С, Патология груди, 1-е. Эд. Elsevier 2006. ISBN 978-0-443-06680-1. 
  10. ^ Чжу, С., Конрад, С. Хант, Дж. Обзор и обновления иммуногистохимии в выбранных слюнных железах и опухолях головы и шеи. Academic Search Premier.
  11. ^ Филипп, Taupin (2006). «Иммуногистохимия BrdU для изучения нейрогенеза взрослых: парадигмы, подводные камни, ограничения и проверка» . Обзоры исследований мозга . 53 (1): 198–214. DOI : 10.1016 / j.brainresrev.2006.08.002 . PMID 17020783 . 
  12. Перейти ↑ Leader M, Patel J, Makin C, Henry K (декабрь 1986). «Анализ чувствительности и специфичности маркера цитокератина CAM 5.2 для эпителиальных опухолей. Результаты исследования 203 сарком, 50 карцином и 28 злокачественных меланом». Гистопатология . 10 (12): 1315–24. DOI : 10.1111 / j.1365-2559.1986.tb02574.x . PMID 2434403 . 
  13. ^ Йоргенсен, Ян Трёст; Кирстен Ванг Нильсен; Бент Эйлерцен (апрель 2007 г.). «Фармакодиагностика и таргетная терапия - рациональный подход к индивидуализации лечебной противоопухолевой терапии рака груди». Онколог . 12 (4): 397–405. DOI : 10.1634 / теонколог . 12-4-397 . ISSN 1083-7159 . PMID 17470682 .  
  14. ^ Gold JS, DeMatteo RP (август 2006). «Комбинированная хирургическая и молекулярная терапия: модель желудочно-кишечной стромальной опухоли» . Анна. Surg . 244 (2): 176–84. DOI : 10.1097 / 01.sla.0000218080.94145.cf . PMC 1602162 . PMID 16858179 .  
  15. Перейти ↑ Harari, PM (декабрь 2004 г.). «Стратегии ингибирования рецепторов эпидермального фактора роста в онкологии» . Эндокринный рак . 11 (4): 689–708. DOI : 10,1677 / erc.1.00600 . ISSN 1351-0088 . PMID 15613446 . Архивировано из оригинала на 2012-07-30 . Проверено 14 марта 2008 .  
  16. ^ "leicabiosystems.com" . leicabiosystems.com . Проверено 16 июня 2013 .
  17. ^ Press, Майкл Ф .; Заутер, Гвидо; Бернштейн, Лесли; Вильялобос, Ивонн Э .; Мирлахер, Мартина; Чжоу, Цзянь-Юань; Варде, Руба; Ли, Юн-Тянь; Гусман, Роберта; Ма, Янлин; Салливан-Галлей, Джейн; Сантьяго, Анджела; Park, Jinha M .; Рива, Алессандро; Сламон, Деннис Дж. (15 сентября 2005 г.). «Диагностическая оценка HER-2 как молекулярной мишени: оценка точности и воспроизводимости лабораторных исследований в крупных проспективных рандомизированных клинических исследованиях» . Клинические исследования рака . 11 (18): 6598–6607. DOI : 10.1158 / 1078-0432.CCR-05-0636 . ISSN 1078-0432 . PMID 16166438 . Проверено 14 марта 2008 .  
  18. ^ Bibeau F, Boissière-Michot F, Sabourin JC, и др. (Сентябрь 2006 г.). «Оценка экспрессии рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) в первичных колоректальных карциномах и связанных с ними метастазах на срезах тканей и тканевых микроматрицах» . Арка Вирхова . 449 (3): 281–7. DOI : 10.1007 / s00428-006-0247-9 . PMC 1888717 . PMID 16865406 .  
  19. ^ "Атлас человеческого белка" . www.proteinatlas.org . Проверено 2 октября 2017 .
  20. ^ Улен, Матиас; Фагерберг, Линн; Hallström, Björn M .; Линдског, Сесилия; Оксволд, Пер; Мардиноглу, Адиль; Сивертссон, Аса; Кампф, Кэролайн; Шёстедт, Эвелина (23 января 2015 г.). «Тканевая карта протеома человека» . Наука . 347 (6220): 1260419. DOI : 10.1126 / science.1260419 . ISSN 0036-8075 . PMID 25613900 .  

Внешние ссылки [ править ]

  • Атлас белков человека
  • Рамос-Вара Дж.А., Миллер М.А. (2014). «Когда тканевые антигены и антитела уживутся: пересмотр технических аспектов иммуногистохимии - красный, коричневый и синий методы» . Ветеринарная патология . 51 (1): 42–87. DOI : 10.1177 / 0300985813505879 . PMID  24129895 .
  • Обзор иммуногистохимии - описывает все аспекты ИГХ, включая подготовку образцов, окрашивание и устранение неполадок
  • Иммунофлуоресцентное окрашивание парафиновой ткани (IF-P)
  • Совет IHC 1: Получение антигена - что делать PIER или HIER?
  • Методы гистохимического окрашивания - Отделение патологии Университета Рочестера
  • Протокол иммуногистохимического окрашивания
  • Бернетт Р., Гишард И., Барале Е. (1997). «Иммуногистохимия для световой микроскопии в оценке безопасности терапевтических агентов: обзор». Токсикология . 119 (1): 83–93. DOI : 10.1016 / S0300-483X (96) 03600-1 . PMID  9129199 .
  • Иммуногистохимия в Национальной медицинской библиотеке США по медицинским предметным рубрикам (MeSH)
  • Joyner, A .; Уолл, Н. (2008). «Иммуногистохимия целых эмбрионов мышей» . Протоколы Колд-Спринг-Харбор . 2008 (2): pdb.prot4820. DOI : 10,1101 / pdb.prot4820 . PMID  21356665 .