Первичные и вторичные антитела
Первичные и вторичные антитела представляют собой две группы антител , которые классифицируются на основе того, связываются ли они с антигенами или белками напрямую или нацелены на другое (первичное) антитело, которое, в свою очередь, связано с антигеном или белком .
Первичные антитела могут быть очень полезны для обнаружения биомаркеров таких заболеваний, как рак, диабет, болезни Паркинсона и Альцгеймера, и они используются для изучения всасывания, распределения, метаболизма и выделения (ADME) и множественной лекарственной устойчивости (MDR). ) лечебных средств.
Вторичные антитела обеспечивают обнаружение и усиление сигнала, а также расширяют возможности антител за счет конъюгации с белками. [1] Вторичные антитела особенно эффективны при иммуномечении . Вторичные антитела связываются с первичными антителами, которые непосредственно связаны с целевым антигеном (антигенами). При иммуномечении Fab -домен первичного антитела связывается с антигеном и обнажает его Fc-домен .ко вторичному антителу. Затем домен Fab вторичного антитела связывается с доменом Fc первичного антитела. Поскольку домен Fc постоянен в пределах одного и того же класса животных, требуется только один тип вторичного антитела для связывания со многими типами первичных антител. Это снижает стоимость за счет маркировки только одного типа вторичных антител, а не маркировки различных типов первичных антител. Вторичные антитела помогают повысить чувствительность и усиление сигнала благодаря тому, что несколько вторичных антител связываются с первичным антителом. [2]
Вторичные антитела с полной молекулой иммуноглобулина являются наиболее часто используемым форматом, но они могут быть подвергнуты ферментативной обработке для уточнения анализа. Фрагменты F(ab') 2 генерируются при расщеплении пепсином для удаления большей части Fc-фрагмента, что позволяет избежать распознавания Fc-рецепторами живых клеток или белка A или белка G. [3] Расщепление папаином генерирует Fab-фрагменты, которые удаляют весь Fc-фрагмент, включая шарнирную область, с получением двух моновалентных фрагментов Fab. Их можно использовать для блокирования эндогенных иммуноглобулинов на клетках, тканях или других поверхностях, а также для блокирования экспонированных иммуноглобулинов в многочисленных экспериментах по мечению с использованием первичных антител одного и того же вида. [4]
Вторичные антитела могут быть конъюгированы с ферментами, такими как пероксидаза хрена (HRP) или щелочная фосфатаза (AP); или флуоресцентные красители , такие как изотиоцианат флуоресцеина (FITC), производные родамина , красители Alexa Fluor ; или другие молекулы для использования в различных приложениях. Вторичные антитела используются во многих биохимических анализах [5] , включая:
