Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Схема реакции SNAP-тега

SNAP-tag® представляет собой метку белка с собственной меткой, коммерчески доступную в различных векторах экспрессии. SNAP-tag представляет собой полипептид из 182 остатков (19,4 кДа), который может быть слит с любым представляющим интерес белком и дополнительно специфически и ковалентно помечен подходящим лигандом, таким как флуоресцентный краситель . С момента своего появления SNAP-tag нашел множество применений в биохимии и для исследования функции и локализации белков и ферментов в живых клетках. [1] По сравнению с существующими стандартными методами маркировки, используемыми в флуоресцентной микроскопии, использование SNAP-тегов дает значительные преимущества. SNAP-tag® является зарегистрированным товарным знаком New England Biolabs, Inc.

Приложения [ править ]

Клеточная биология использует инструменты, которые позволяют манипулировать и визуализировать белки в живых клетках. Важным примером является использование флуоресцентных белков, таких как зеленый флуоресцентный белок (GFP) или желтый флуоресцентный белок (YFP). Методы молекулярной биологии позволяют вводить эти флуоресцентные белки и экспрессировать их в живых клетках в виде слитых белков. Однако фотофизические свойства флуоресцентных белков обычно не подходят для спектроскопии одиночных молекул. Флуоресцентные белки имеют, по сравнению с коммерчески доступными красителями, гораздо более низкий квантовый выход флуоресценции и быстро разрушаются при возбуждении сфокусированным лазерным лучом (фотообесцвечивание).

Белок SNAP-tag® представляет собой сконструированную версию широко распространенного у млекопитающих фермента AGT [2], кодируемого у человека геном O-6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы (MGMT). SNAP-tag был получен с использованием стратегии направленной эволюции [3], что привело к варианту hAGT, который принимает производные O 6 -бензилгуанина вместо восстановления алкилированных производных гуанина в поврежденной ДНК.

Ортогональная метка, названная CLIP-tag ™, была дополнительно сконструирована из SNAP-метки, чтобы принимать производные O 2 -бензилцитозина в качестве субстратов вместо O 6 -бензилгуанина. [4] Позднее была разработана версия с расщепленной меткой SNAP, подходящая для анализа комплементации белков и исследований белок-белкового взаимодействия. [5]

Помимо флуоресцентной микроскопии , SNAP-метка и CLIP-метка оказались полезными для выяснения множества биологических процессов, включая идентификацию мультибелковых комплексов с использованием различных подходов, таких как FRET , [6] перекрестное связывание, [6] анализ близости лигирования . [7] Другое применение включает измерение периода полужизни белка in vivo [8] и взаимодействия малых молекул с белками. [9] SNAP-tag® является зарегистрированным товарным знаком New England Biolabs, Inc. CLIP-tag ™ является товарным знаком New England Biolabs, Inc.

См. Также [ править ]

Ссылки [ править ]

  1. ^ Crivat G; Тараска Ю.В. (январь 2012 г.). «Визуализация белков внутри клеток с флуоресцентными метками» . Тенденции в биотехнологии . 30 (1): 8–16. DOI : 10.1016 / j.tibtech.2011.08.002 . PMC  3246539 . PMID  21924508 .
  2. ^ Juillerat A; Гронемейер Т; Кепплер А; Gendreizig S; Выберите H; Vogel H; Джонссон К. (апрель 2003 г.). «Направленная эволюция O6-алкилгуанин-ДНК-алкилтрансферазы для эффективного мечения слитых белков малыми молекулами in vivo» . Химия и биология . 10 (4): 313–317. DOI : 10.1016 / S1074-5521 (03) 00068-1 . PMID 12725859 . 
  3. ^ Моллвиц, Биргит; Брюнк, Элизабет; Шмитт, Симона; Пойер, Флоренция; Баннварт, Майкл; Шильц, Марк; Ротлисбергер, Урсула; Джонссон, Кай (07.02.2012). «Направленная эволюция суицидного белка O6-алкилгуанин-ДНК-алкилтрансферазы для повышения реактивности приводит к получению алкилированного белка с исключительной стабильностью» . Биохимия . 51 (5): 986–994. DOI : 10.1021 / bi2016537 . ISSN 0006-2960 . PMID 22280500 .  
  4. ^ Готье А; Жюльерат А; Heinis C; Corrêa IR Jr; Киндерманн М; Beaufils F; Джонссон К. (февраль 2008 г.). «Разработанная белковая метка для мечения нескольких белков в живых клетках» . Химия и биология . 15 (2): 128–136. DOI : 10.1016 / j.chembiol.2008.01.007 . PMID 18291317 . 
  5. ^ Ми М; Naoki T; Uchida K; Кобатаке Э (октябрь 2012 г.). «Разработка анализа комплементации белков расщепленной метки SNAP для визуализации белок-белковых взаимодействий в живых клетках» . Аналитик . 137 (20): 4760–4765. DOI : 10.1039 / c2an35762c . PMID 22910969 . S2CID 6217675 .  
  6. ^ a b Maurel D; Компс-Аграр L; Brock C; Rives ML; Bourrier E; Ayoub MA; Bazin H; Tinel N; Durroux T; Prézeau L; Trinquet E; Pin JP (июнь 2008 г.). «Анализ взаимодействия белок-белок на клеточной поверхности с помощью технологий FRET и snap-tag с временным разрешением: приложение к олигомеризации GPCR» . Природные методы . 5 (6): 561–567. DOI : 10.1038 / nmeth.1213 . PMC 2642604 . PMID 18488035 .  
  7. ^ Гу GJ; Фридман М; Jost C; Johnsson K; Kamali-Moghaddam M; Plückthun A; Landegren U; Седерберг О. (январь 2013 г.). «Опосредованное белковой меткой конъюгация олигонуклеотидов с рекомбинантными аффинными связывающими веществами для лигирования близости» . Новая биотехнология . 30 (2): 144–152. DOI : 10.1016 / j.nbt.2012.05.005 . PMID 22664266 . 
  8. ^ Бодор DL; Родригес М.Г.; Moreno N; Янсен Л.Е. (июнь 2012 г.). Анализ белкового обмена с помощью количественной импульсной визуализации на основе SNAP . Текущие протоколы в клеточной биологии . 55 . С. Unit8.8. DOI : 10.1002 / 0471143030.cb0808s55 . ЛВП : 10400,7 / 614 . ISBN 978-0471143031. PMID  23129118 .
  9. ^ Чидли C; Haruki H; Педерсен MG; Muller E; Джонссон К. (июнь 2011 г.). «Скрининг на основе дрожжей показывает, что сульфасалазин ингибирует биосинтез тетрагидробиоптерина» . Природа Химическая биология . 7 (6): 375–383. DOI : 10,1038 / nchembio.557 . PMID 21499265 . 

Дальнейшее чтение [ править ]

  • Кепплер А; Киндерманн М; Gendreizig S; Выберите H; Vogel H; Джонссон К. (2004). «Мечение белков слияния O6-алкилгуанин-ДНК-алкилтрансферазы с небольшими молекулами in vivo и in vitro». Методы . 32 (4): 437–444. DOI : 10.1016 / j.ymeth.2003.10.007 . PMID  15003606 .
  • Кепплер А; Выберите H; Arrivoli C; Vogel H; Джонссон К. (2004). «Мечение гибридных белков синтетическими флуорофорами в живых клетках» . Proc. Natl. Акад. Sci. США . 101 (27): 9955–9959. DOI : 10.1073 / pnas.0401923101 . PMC  454197 . PMID  15226507 .
  • Жюльерат А; Heinis C; Sielaff I; Barnikow J; Jaccard H; Kunz B; Терских А; Джонссон К. (2005). «Инженерная субстратная специфичность O6-алкилгуанин-ДНК-алкилтрансферазы для специфического мечения белков в живых клетках». ChemBioChem . 6 (7): 1263–1269. DOI : 10.1002 / cbic.200400431 . PMID  15934048 . S2CID  23926764 .

Внешние ссылки [ править ]

  • Darstellung SNAP-Tag и CLIP-Tag (NEB)
  • Самомаркированные белковые бирки. В кн . : Биофорум. Jg. 2005, № 6, С. 50-51.