Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Чашка агара
ИспользуетМикробиологическая культура
Искусство
Похожие материалыЧашка Петри
Среда для выращивания
Загрязнение на чашке с агаром

Чашка с агаром - это чашка Петри , содержащая агар в качестве твердой питательной среды плюс питательные вещества, используемые для культивирования микроорганизмов . Иногда для воздействия на рост добавляют селективные соединения, например антибиотики . [1]

96 пиннер, используемый для точечных анализов дрожжевых, грибковых или бактериальных клеток

Отдельные микроорганизмы, помещенные на чашку, вырастут в отдельные колонии , каждая из которых является клоном, генетически идентичным отдельному организму-предку (за исключением низкой неизбежной скорости мутаций ). Таким образом, планшет можно использовать либо для оценки концентрации организмов в жидкой культуре, либо для подходящего разведения этой культуры с использованием счетчика колоний , либо для создания генетически чистых культур из смешанной культуры генетически различных организмов.

Доступно несколько методов для нанесения пластин на клетки. Один из методов известен как « полосы ». В этом методе капля культуры на конце тонкой стерильной петли проволоки, иногда называемой инокулятором, наносится на поверхность агара, оставляя организмы, большее число в начале полосы и меньшее число в конце. В какой-то момент во время успешной «полоски» количество депонированных организмов будет таким, что отдельные отдельные колонии будут расти в этой области, которую можно удалить для дальнейшего культивирования с использованием другой стерильной петли. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы не допустить загрязнения чашек. [1]

Другой способ посева организмов на чашки с агаром - это точечный анализ . Этот тип анализа часто используется для проверки жизнеспособности клеток и выполняется с помощью пиннеров (часто также называемых лягушками). Третий используемый метод - использование стерильных стеклянных шариков для нанесения клеток на поверхность. В этом методе клетки выращивают в жидкой культуре, небольшой объем которой наносится пипеткой на чашку с агаром, а затем распределяется с шариками. Посев на реплики - это еще один метод высева клеток на чашки с агаром. Эти четыре метода являются наиболее распространенными, но возможны и другие. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы предотвратить загрязнение чашек с агаром. Таким образом, покрытие часто выполняется в шкафу с ламинарным потоком.или на рабочем столе рядом с горелкой Бунзена . [2]

История [ править ]

В 1881 году Фанни Хессе , которая работала техником у своего мужа Вальтера Гессе в лаборатории Роберта Коха , предложила агар в качестве эффективного закрепляющего агента, поскольку он некоторое время был обычным явлением при приготовлении джема. [3]

Типы [ править ]

Чашка агара просматривается в электронном счетчике колоний
Агаровая культура колоний E. coli

Как и другие питательные среды , составы агара, используемые в чашках, можно классифицировать как «определенные» или «неопределенные»; Определенная среда синтезируется из отдельных химических веществ, необходимых организму, поэтому точный молекулярный состав известен, в то время как неопределенная среда производится из натуральных продуктов, таких как дрожжевой экстракт , где точный состав неизвестен. [4]

Чашки с агаром могут быть сформулированы как разрешающие, с целью обеспечения роста любых присутствующих организмов, так и ограничительные или селективные, с целью обеспечения роста только определенной подгруппы этих организмов. [5] Это может принимать форму потребности в питании, например, предоставление определенного соединения, такого как лактоза, в качестве единственного источника углерода и, таким образом, выбора только организмов, которые могут метаболизировать это соединение, или путем включения определенного антибиотика или другого вещества для выбора только организмы, которые устойчивык этому веществу. Это до некоторой степени коррелирует с определенными и неопределенными медиа; Неопределенные среды, изготовленные из натуральных продуктов и содержащие неизвестную комбинацию очень многих органических молекул, обычно более терпимы с точки зрения удовлетворения потребностей более широкого круга организмов, в то время как определенные среды могут быть точно адаптированы для отбора организмов с конкретными свойствами.

Чашки с агаром также могут быть индикаторными чашками, в которых организмы не отбираются на основе роста, а вместо этого отличаются изменением цвета в некоторых колониях, обычно вызванным действием фермента на какое-либо соединение, добавленное в среду. [6]

Чашки инкубируют от 12 часов до нескольких дней в зависимости от проводимого теста.

Некоторые часто используемые типы чашек с агаром:

Красные кровяные тельца на чашке с агаром используются для диагностики инфекции . Слева положительный результат на стафилококк , справа - положительный результат посева на стрептококк .

Кровяной агар [ править ]

Гемолизы Streptococcus spp. (слева) α-гемолиз ( S. mitis ); (в центре) β-гемолиз ( S. pyogenes ); (справа) γ-гемолиз (= негемолитический, S. salivarius )

Пластина с кровяным агаром [ править ]

Чашки с кровяным агаром (БАП) содержат кровь млекопитающих (обычно овец или лошадей), обычно в концентрации 5–10%. BAP - это обогащенные дифференциальные среды, используемые для выделения требовательных организмов и определения гемолитической активности. β-Гемолитическая активность показывает лизис и полное переваривание содержимого красных кровяных телец, окружающих колонию. Примеры включают Streptococcus haemolyticus . α-Гемолиз вызывает только частичный лизис красных кровяных телец (клеточная мембрана остается неповрежденной) и приобретает зеленый или коричневый цвет из-за преобразования гемоглобина в метгемоглобин. Примером этого может быть Streptococcus viridans . γ-Гемолиз (или негемолитический) - это термин, относящийся к отсутствию гемолитической активности. [7]БАП также содержат мясной экстракт , триптон , хлорид натрия и агар.

Шоколадный агар [ править ]

Шоколадный агар - это разновидность пластинки с кровяным агаром, в которой клетки крови лизируются путем нагревания клеток до 56 ° C. Он используется для выращивания привередливых респираторных бактерий, таких как Haemophilus influenzae . На самом деле в тарелке нет шоколада ; он назван только по окраске.

Агар с лошадиной кровью [ править ]

Агар с конской кровью - это разновидность обогащенной кровью микробиологической питательной среды. Поскольку он обогащен, он способствует росту некоторых требовательных бактерий и позволяет определять гемолитическую активность этих бактериальных культур.

Агар Тайера-Мартина [ править ]

Агар Тайера-Мартина - это шоколадный агар, предназначенный для выделения Neisseria gonorrhoeae .

Тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахарозный агар [ править ]

Агар тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахароза усиливает рост Vibrio spp. , в том числе Vibrio cholerae . [8]

Общие бактериальные среды [ править ]

Четыре типа чашек с агаром, демонстрирующих дифференцированный рост в зависимости от метаболизма бактерий
  • Желчь эскулин агар используется для выделения Enterococcus и группы D Streptococcus видов
  • CLED-агар - агар с дефицитом цистеина , лактозы и электролитов используется для выделения и дифференциации бактерий мочевыводящих путей, поскольку он подавляет скопление видов Proteus и может различать ферментеры лактозы и неферментеры.
  • Среда Гранада используется для выделения и дифференциации Streptococcus группы B , Streptococcus agalactiae из клинических образцов. Он растет в среде Гранады, поскольку красные колонии и большинство сопутствующих бактерий подавляются.
  • Кишечный агар Hektoen предназначен для выделения и восстановления фекальных бактерий семейства Enterobacteriaceae . Это особенно полезно при изоляции сальмонелл и шигелл .
  • Бульон лизогении
  • Агар МакКонки представляет собой селективную и дифференциальную среду, используемую для дифференциации грамотрицательных бактерий при подавлении роста грамположительных бактерий. Добавление солей желчных кислот и кристаллического фиолетового к агару подавляет рост большинства грамположительных бактерий, делая агар МакКонки селективным. Лактоза и нейтральный красный добавляют, чтобы отличить ферментеры лактозы, которые образуют розовые колонии, от неферментеров лактозы, которые образуют прозрачные колонии. Альтернативная среда, эозин-метиленовый синий, служит аналогичной цели.
  • Маннитоловый солевой агар также является селективной и дифференциальной средой. Маннит указывает организмы, брожение маннит: маннит брожения производит молочную кислоту , снижение рН и поворачивая пластину желтого цвета. Соль выбрать для галофилов ; организмы, которые не выдерживают высокого содержания соли, не могут хорошо расти.
  • Агар Мюллера-Хинтона содержит говяжий настой, пептон и крахмал и используется в первую очередь для тестирования чувствительности к антибиотикам. Это может быть кровяной агар .
Грибы ( аскомицеты ), растущие в аксенических культурах , каждая из которых является культурой одного выбранного организма и свободна от всех других организмов, что позволяет изучать культивируемый организм изолированно
Aspergillus niger, выращиваемый на картофельном агаре с декстрозой
  • Питательный агар обычно используется для выращивания неприхотливых организмов и наблюдения за производством пигментов. Его безопасно использовать в школьных научных лабораториях, потому что он не способствует избирательному росту патогенных бактерий.
  • Агар Ёноз позволяет более быструю бактериологическую диагностику, поскольку колонии сальмонелл и шигелл можно четко и надежно отличить от других энтеробактерий. Урожайность Salmonella в образцах стула, полученных при использовании этой среды, выше, чем при использовании агара LEIFSON или агара Salmonella – Shigella .
  • Агар с фенилэтиловым спиртом выбирает виды стафилококков , подавляя при этом грамотрицательные бактерии (например, Escherichia coli , Shigella , Proteus и т. Д.).
  • Агар R2A, неспецифическая среда, имитирующая воду, поэтому используется для анализа воды.
  • Триптический (триптиказный) соевый агар (TSA) - это среда общего назначения, получаемая путем ферментативного переваривания соевого шрота и казеина . Часто это основная среда для других типов агара; например, чашки с кровяным агаром получают путем обогащения чашек с TSA кровью. Чашки TSA поддерживают рост многих полужадных бактерий, включая некоторые виды Brucella , Corynebacterium , Listeria , Neisseria и Vibrio .
  • Ксилоза - лизин - дезоксихолат использует агар для культуры стула образцов и содержит два индикатора. Он разработан для подавления грамположительных бактерий, при этом стимулируется рост грамотрицательных бацилл . Колонии ферментеров лактозы кажутся желтыми. Он также используется для культивирования возможных сальмонелл, которые могут присутствовать в образце пищи. Большинство колоний сальмонелл имеют на себе черный центр.
  • Цетримидный агар используется для селективного выделения грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosa .
  • Агар Тинсдейла содержит теллурит калия , который может изолировать Corynebacterium diphteriae . [8]

Грибковые среды [ править ]

Вид снизу чашки с агаром Сабуро с колонией Trichophyton rubrum var. Родайни
  • Агар Сабуро используется для культивирования грибов и имеет низкий pH, который подавляет рост большинства бактерий; он также содержит антибиотик гентамицин, специфически подавляющий рост грамотрицательных бактерий.
  • Агар для настаивания сена специфичен для культивирования слизистой плесени (которая не является грибком).
  • Картофельный агар с декстрозой используется для культивирования некоторых видов грибов.
  • Агар с солодовым экстрактом имеет высокое содержание пептона и является кислым. Он в основном используется для изоляции грибковых микроорганизмов.

Моховые СМИ [ править ]

  • Кноп агар используют для аксенического культивирования протонемы и целых растений мха , таких как Physcomitrella patens , модельного организма . [9]

Дрожжевые среды [ править ]

  • Среда YEPD часто используется в качестве общей среды для роста дрожжей, таких как Saccharomyces cerevisiae и Candida albicans.
  • Среда для споруляции используется, когда должны образоваться споры. Его также можно использовать при работе с грибами или бактериями, в зависимости от того, способен ли штамм образовывать споры.
дрожжи Candida albicans, растущие как дрожжевые клетки, так и нитчатые клетки на агаре YPD

См. Также [ править ]

  • Микробное искусство
  • Вирусный налет

Различные специфические типы агара:

  • Казеиновый питательный агар
  • MRS агар
  • Нью-йоркский агар

Ссылки [ править ]

  1. ^ a b Мэдиган М., Мартинко Дж., ред. (2005). Брок Биология микроорганизмов (11-е изд.). Прентис Холл. ISBN 0-13-144329-1.
  2. ^ Сандерс, Эрин Р. (11 мая 2012 г.). «Асептические лабораторные методы: методы нанесения покрытия» . Журнал визуализированных экспериментов (63): e3064. DOI : 10.3791 / 3064 . PMC 4846335 . PMID 22617405 . Архивировано 14 ноября 2017 года . Дата обращения 3 мая 2018 .  
  3. ^ "История чашки агара" . Новости лаборатории . Архивировано из оригинального 11 февраля 2010 года . Проверено 22 февраля 2010 .
  4. ^ Барон S; и др., ред. (1996). Медицинская микробиология Барона (4-е изд.). Медицинский филиал Техасского университета. ISBN 0-9631172-1-1. (через книжную полку NCBI) .
  5. ^ Райан KJ; Рэй CG, ред. (2004). Шеррис Медицинская микробиология (4-е изд.). Макгроу Хилл. ISBN 0-8385-8529-9.
  6. ^ «Индикаторы» . Проверено 12 июля 2018 .
  7. ^ "Чашки кровяного агара и протоколы гемолиза" . Архивировано из оригинала на 2012-02-02 . Проверено 28 октября 2014 .
  8. ^ а б Фишер, Брюс; Харви, Ричард П .; Чампе, Памела С. (2007). Иллюстрированные обзоры Липпинкотта: микробиология (серия иллюстрированных обзоров Липпинкотта) . Хагерствон, доктор медицины: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. ISBN 978-0-7817-8215-9.
  9. ^ Рески, Ральф ; Абель, Вольфганг О. (1985). «Индукция почкования на хлоронемах и стеблях мха Physcomitrella patens с использованием изопентениладенина» . Planta . 165 (3): 354–358. DOI : 10.1007 / bf00392232 . PMID 24241140 . S2CID 11363119 .  

Внешние ссылки [ править ]

  • Видео приготовления агара с овечьей кровью
  • Друзья науки - Все об агаре
  • Видео о методах асептического покрытия
  • Видео о том, как использовать стеклянные бусины для расклейки образцов