Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску

Внеклеточная ДНК плода ( вкДНК ) - это ДНК плода, которая свободно циркулирует в материнской крови . Материнская кровь берется путем венепункции . Анализ cffDNA - это метод неинвазивной пренатальной диагностики, который часто назначают беременным женщинам пожилого возраста . Через два часа после родов cffDNA больше не обнаруживается в материнской крови.

Фон [ править ]

Бесклеточная ДНК плода попадает в кровоток матери.

cffDNA происходит из трофобластов плаценты . [1] [2] фетальной ДНК фрагментируется , когда плацентарные микрочастицы навес в материнской крови циркуляции . [3]

Фрагменты cffDNA составляют приблизительно 200 пар оснований (п.н.) в длину. Они значительно меньше, чем фрагменты материнской ДНК. [4] Разница в размере позволяет отличить cffDNA от материнских фрагментов ДНК. [5] [6]

Примерно от 11 до 13,4 процента внеклеточной ДНК в материнской крови имеет фетальное происхождение. Сумма сильно варьируется от одной беременной женщины к другой. [7] cffDNA присутствует через пять-семь недель беременности. Количество cffDNA увеличивается по мере развития беременности. [8] Количество cffDNA в материнской крови быстро уменьшается после родов. Через два часа после родов cffDNA больше не обнаруживается в материнской крови. [9]

Анализ cffDNA может обеспечить более раннюю диагностику состояний плода, чем современные методы. Поскольку cffDNA обнаруживается в материнской крови, отбор проб не несет сопутствующего риска самопроизвольного аборта . [10] [11] [12] [13] [14] Анализ cffDNA имеет те же этические и практические вопросы, что и другие методы, такие как амниоцентез и взятие проб ворсинок хориона . [15]

Некоторые недостатки отбора образцов cffDNA включают низкую концентрацию cffDNA в материнской крови; различия в количестве cffDNA между людьми; высокая концентрация ДНК, не содержащая материнских клеток, по сравнению с cffDNA в материнской крови. [16]

Новые данные показывают, что частота неудачных тестов cffDNA выше, фракция плода (соотношение ДНК плода по сравнению с материнской ДНК в образце материнской крови) ниже, а PPV для трисомий 18, 13 и SCA снижается при беременностях с ЭКО по сравнению с беременностями, зачатыми спонтанно. [17]

Лабораторные методы [ править ]

Был разработан ряд лабораторных методов для бесклеточного скрининга ДНК плода на генетические дефекты. Основными из них являются (1) массово-параллельное секвенирование с дробовиком (MPSS), (2) целевое массовое параллельное секвенирование (t-MPS) и (3) подход на основе однонуклеотидного полиморфизма (SNP). [18] [19] [20]

Образец периферической крови матери берут путем венесекции примерно на 10 неделе беременности. [21]

Разделение cffDNA [ править ]

Плазма крови отделяется от пробы материнской крови с помощью лабораторной центрифуги . Затем cffDNA выделяют и очищают. [22] Стандартизованный протокол для этого был написан на основе оценки научной литературы . Самый высокий выход при экстракции cffDNA был получен с помощью "QIAamp DSP Virus Kit". [23]

Добавление формальдегида к образцам материнской крови увеличивает выход cffDNA. Формальдегид стабилизирует неповрежденные клетки и, следовательно, препятствует дальнейшему высвобождению материнской ДНК. С добавлением формальдегида процентная доля cffDNA, извлеченной из образца материнской крови, колеблется от 0,32 процента до 40 процентов со средним значением 7,7 процента. [24] Без добавления формальдегида средний процент извлеченной cffDNA составляет 20,2 процента. Однако другие цифры колеблются от 5 до 96 процентов. [25] [26]

Восстановление cffDNA может быть связано с длиной фрагментов ДНК. Другой способ увеличения ДНК плода основан на физической длине фрагментов ДНК. Более мелкие фрагменты могут составлять до семидесяти процентов от общей внеклеточной ДНК в образце материнской крови.

Анализ cffDNA [ править ]

В ПЦР в реальном времени флуоресцентные зонды используются для мониторинга накопления ампликонов . Репортерный флуоресцентный сигнал пропорционален количеству генерируемых ампликонов. Наиболее подходящий протокол ПЦР в реальном времени разработан в соответствии с конкретной мутацией или генотипом, который необходимо выявить. Точечные мутации анализируются с помощью качественной ПЦР в реальном времени с использованием аллель- специфичных зондов. инсерции и делеции анализируются путем измерения дозировки с использованием количественной ПЦР в реальном времени.

cffDNA может быть обнаружена путем обнаружения унаследованных от отца последовательностей ДНК с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). [27] [28]

Количественная ПЦР в реальном времени [ править ]

Пол определяющая область Y гена (SRY) и короткий тандемный повтор Y хромосомы «DYS14» в cffDNA от 511 беременностей анализировали с помощью количественной ПЦР в реальном времени (RT-qPCR). В 401 из 403 беременностей, когда кровь матери была взята на сроке 7 недель или более, были обнаружены оба сегмента ДНК. [29]

Вложенная ПЦР [ править ]

Использование вложенной полимеразной цепной реакции (вложенная ПЦР) оценивали для определения пола путем обнаружения специфического сигнала Y-хромосомы в cffDNA из материнской плазмы. Вложенная ПЦР выявила 53 из 55 плодов мужского пола. CffDNA из плазмы 3 из 25 женщин с плодом женского пола содержала сигнал, специфичный для Y-хромосомы. Чувствительность вложенных ПЦР в этом эксперименте составл ла 96 процентов. Специфичность была 88 процентов. [30]

Цифровая ПЦР [ править ]

Микрожидкостные устройства позволяют количественно определять сегменты вкДНК в материнской плазме с точностью, превышающей точность ПЦР в реальном времени. Точечные мутации , потеря гетерозиготности и анеуплоидия могут быть обнаружены за один этап ПЦР. [31] [32] [33] Цифровая ПЦР может дифференцировать плазму крови матери и ДНК плода мультиплексным способом. [31]

Секвенирование дробовика [ править ]

Высокопроизводительное секвенирование с использованием таких инструментов, как Solexa или Illumina, дает примерно 5 миллионов тегов последовательности на образец материнской сыворотки. Анеуплоидные беременности, такие как трисомия, были выявлены при тестировании на четырнадцатой неделе беременности. Картирование всего генома плода с помощью анализа родительских гаплотипов было завершено с использованием секвенирования cffDNA из материнской сыворотки. [13] Беременные женщины были изучены с использованием двухмерного параллельного секвенирования ДНК материнской плазмы, и трисомия была диагностирована с z-значением выше 3. [34] Секвенирование дало чувствительность 100%, специфичность 97,9%, положительную прогностическую ценность.96,6 процента и отрицательная прогностическая ценность 100 процентов.

Масс-спектрометрия [ править ]

Матричная лазерная десорбция / ионизация - времяпролетная масс-спектрометрия (MALDI-TOF MS) в сочетании с удлинением на одно основание после ПЦР позволяет обнаруживать cffDNA с одноосновной специфичностью и чувствительностью к одной молекуле ДНК. [35] ДНК амплифицируют с помощью ПЦР. Затем разрабатывают линейную амплификацию с реакцией удлинения основания (с третьим праймером) для отжига в области, расположенной выше сайта мутации . К праймеру для удлинения добавляют одно или два основания для получения двух продуктов удлинения из ДНК дикого типа и мутантной ДНК. Одноосновная специфичность обеспечивает преимущества по сравнению с методами на основе гибридизации с использованием TaqMan.датчики гидролиза. При оценке техники не было обнаружено ложноположительных или отрицательных результатов при поиске cffDNA для определения пола плода в шестнадцати образцах материнской плазмы. [35] Пол девяноста одного плода мужского пола был правильно определен с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF. Техника имела точность, чувствительность и специфичность более 99 процентов. [36]

Эпигенетические модификации [ править ]

Можно использовать различия в активации генов между ДНК матери и плода. Эпигенетические модификации (наследственные модификации, которые изменяют функцию гена без изменения последовательности ДНК) могут использоваться для обнаружения cffDNA. [37] [38] гиперметилирован RASSF1 промотор представляет собой универсальный эмбриональной маркер , используемый , чтобы подтвердить наличие cffDNA. [39] Был описан метод, при котором cffDNA экстрагировали из материнской плазмы, а затем переваривали чувствительными к метилированию и нечувствительными рестрикционными ферментами . Затем был проведен ПЦР-анализ RASSF1A, SRY и DYS14 в реальном времени. [39] В ходе процедуры было обнаружено 79 из 90 (88 процентов) образцов материнской крови, в которых присутствовал гиперметилированный RASSF1A.

мРНК [ править ]

Транскрипты мРНК генов, экспрессируемых в плаценте, обнаруживаются в материнской плазме. [40] В этой процедуре плазма центрифугируется, поэтому появляется водный слой. Этот слой переносится и из него извлекается РНК . ОТ-ПЦР используется для обнаружения выбранной экспрессии РНК. Например, плацентарный лактоген человека (hPL) и мРНК бета-ХГЧ стабильны в материнской плазме и могут быть обнаружены. (Нг и др., 2002). Это может помочь подтвердить присутствие cffDNA в материнской плазме. [16]

Приложения [ править ]

Пренатальное распознавание пола [ править ]

Дополнительная информация: Пренатальное распознавание пола

Анализ cffDNA из образца материнской плазмы позволяет пренатально определить пол . Применение пренатального определения пола включает:

  • Тестирование на заболевание : мужской или женский пол плода позволяет определить риск конкретного Х-сцепленного рецессивного генетического заболевания при конкретной беременности, особенно если мать является генетическим носителем заболевания. [41]
  • Подготовка к любым аспектам воспитания, зависящим от пола.
  • Выбор пола , который после доимплантационной генетической диагностики может быть выполнен путем отбора только эмбрионов предпочтительного пола или, после методов постимплантации, путем выполнения аборта с выбором пола в зависимости от результата теста и личных предпочтений.

По сравнению с акушерским ультразвуковым исследованием, которое ненадежно для определения пола в первом триместре, и амниоцентезом, который несет небольшой риск выкидыша , забор материнской плазмы для анализа на cffDNA не представляет риска. [42] Основными мишенями в анализе cffDNA являются ген, ответственный за белок Y области, определяющей пол (SRY), на Y-хромосоме и последовательность DYS14. [43] [44]

Врожденная гиперплазия надпочечников [ править ]

При врожденной гиперплазии надпочечников в коре надпочечников отсутствует соответствующий синтез кортикостероидов, что приводит к избытку андрогенов надпочечников и поражает плоды женского пола. [45] У плодов женского пола происходит внешняя маскулинизация гениталий. [46] матери на зародыши риска данных дексаметазона в течение 6 недель беременности , чтобы подавить гипофиз выпуска андрогенов . [47]

Если в анализе cffDNA, полученном из образца материнской плазмы, отсутствуют генетические маркеры, обнаруженные только на Y-хромосоме, это указывает на плод женского пола. Однако это также может указывать на сбой самого анализа (ложноотрицательный результат). Отцовский генетический полиморфизм и независимые от пола маркеры могут быть использованы для обнаружения cffDNA. Для этого применения должна присутствовать высокая степень гетерозиготности этих маркеров. [48]

Проверка на отцовство [ править ]

Пренатальная ДНК-проверка отцовства имеется в продаже. Тест можно проводить на девятой неделе беременности. [ необходима цитата ]

Заболевания одного гена [ править ]

Аутосомно-доминантные и рецессивные моногенные расстройства, которые были диагностированы пренатально путем анализа наследуемой отцов ДНК, включают муковисцидоз , бета-талассемию , серповидно-клеточную анемию , спинальную мышечную атрофию и миотоническую дистрофию . [27] [43] Пренатальная диагностика заболеваний одного гена, вызванных аутосомно-рецессивной мутацией, наследуемой по материнской линии аутосомно-доминантной мутацией или мутациями больших последовательностей, которые включают дупликацию, расширение или вставку последовательностей ДНК, является более сложной задачей. [49]

В cffDNA труднее обнаружить фрагменты длиной 200-300 п.н., участвующие в нарушениях одного гена.

Например, аутосомно-доминантное заболевание, ахондроплазия , вызывается точечной мутацией гена FGFR3. [50] В двух беременностях с плодом с ахондроплазией была обнаружена отцовская мутация G1138A из cffDNA образца материнской плазмы в одной и мутация G1138A de novo в другом. [50]

В исследованиях генетики хореи Хантингтона с использованием qRT-PCR cffDNA из образцов материнской плазмы CAG-повторы были обнаружены на нормальном уровне (17, 20 и 24). [51]

cffDNA также может использоваться для диагностики нарушений одного гена . [15] Разработки в лабораторных процессах с использованием cffDNA может позволить пренатальную диагностику в анеуплоидиях , такие как трисомия 21 (синдром Дауна) у плода. [52] [32]

Гемолитическая болезнь плода и новорожденного [ править ]

Несовместимость фетальных и материнских антигенов RhD является основной причиной гемолитической болезни новорожденных . [53] Примерно 15 процентов кавказских женщин, 3-5 процентов чернокожих африканских женщин и менее 3 процентов азиатских женщин являются RhD-отрицательными. [54]

Точная пренатальная диагностика важна, потому что заболевание может быть фатальным для новорожденного и потому что матерям из группы риска можно назначать лечение, включая внутримышечный иммуноглобулин (Anti-D) или внутривенный иммуноглобулин . [55]

ПЦР для обнаружения RHD (гена) гена экзоны 5 и 7 из cffDNA , полученной из материнской плазмы от 9 до 13 недель беременности дает высокую степень специфичности, чувствительности и точности диагностики (> 90 процентов) по сравнению с определением RhD от новорожденного пуповинной крови сыворотки . [53] Аналогичные результаты были получены в отношении экзонов 7 и 10. [56] Цифровая капельная ПЦР для определения RhD у плода была сопоставима с обычным методом ПЦР в реальном времени. [57]

Регулярное определение статуса RhD у плода с помощью cffDNA в материнской сыворотке позволяет на раннем этапе вести беременность с повышенным риском, снижая при этом ненужное использование Anti-D более чем на 25 процентов. [58]

Анеуплоидия [ править ]

Половые хромосомы

Анализ материнской сыворотки cffDNA высокой пропускной последовательности может обнаружить общие плода половых хромосом анеуплоидий , такие как синдром Тернера , синдром Клайнфельтера и тройной X синдром , но процедура в положительное прогностическое значение является низким. [59]

Трисомия 21

Трисомия плода по 21 хромосоме является причиной синдрома Дауна. Эта трисомия может быть обнаружена путем анализа cffDNA из материнской крови с помощью массового параллельного секвенирования дробовика (MPSS). [60] Другой метод - цифровой анализ выбранных регионов (DANSR). [60] Такие тесты показывают чувствительность около 99% и специфичность более 99,9%. Следовательно, они не могут рассматриваться как диагностические процедуры, но могут использоваться для подтверждения положительного результата скринингового теста матери, такого как скрининг в первом триместре или ультразвуковые маркеры состояния. [60] [61]

Трисомия 13 и 18

Возможен анализ cffDNA из материнской плазмы с помощью MPSS в поисках трисомии 13 или 18 [62]

Факторы, ограничивающие чувствительность и специфичность, включают уровни cffDNA в материнской плазме; материнские хромосомы могут иметь мозаицизм . [63]

Может быть обнаружен ряд молекул нуклеиновых кислот плода, происходящих из анеуплоидных хромосом, включая мРНК SERPINEB2, оболочку B, гипометилированный SERPINB5 из хромосомы 18, плацентоспецифичный 4 (PLAC4), гиперметилированную синтетазу голокарбоксилазы (HLCS) и мРНК c21orf105 из хромосомы 12. [ ] При полной трисомии аллели мРНК в материнской плазме не соответствуют нормальному соотношению 1: 1, а фактически составляют 2: 1. Отношения аллелей, определяемые эпигенетическими маркерами, также можно использовать для обнаружения полных трисомий. Массивное параллельное секвенирование и цифровая ПЦР для обнаружения анеуплоидии плода могут использоваться без ограничения специфическими для плода молекулами нуклеиновых кислот. (MPSS) имеет чувствительность от 96 до 100%, а специфичностьот 94 до 100% для выявления синдрома Дауна. Его можно проводить на сроке гестации 10 недель . [65] Одно исследование, проведенное в США, оценило уровень ложноположительных результатов в 0,3% и прогностическую ценность положительных результатов в 80% при использовании cffDNA для выявления синдрома Дауна. [66]

Преэклампсия [ править ]

Преэклампсия - сложное состояние беременности, которое обычно проявляется гипертонией и протеинурией после 20 недель беременности. [67] Это связано с плохой цитотрофобластической инвазией миометрия . Начало заболевания на сроке от 20 до 34 недель беременности считается «ранним». [68] Образцы материнской плазмы при беременности, осложненной преэклампсией, имеют значительно более высокие уровни cffDNA, чем при нормальной беременности. [69] [70] [71] Это верно для преэклампсии с ранним началом. [68]

Перспективы на будущее [ править ]

Секвенирование нового поколения может быть использовано для получения последовательности полного генома из cffDNA. Это поднимает этические вопросы. [72] Однако полезность процедуры может возрасти по мере обнаружения четких ассоциаций между конкретными генетическими вариантами и болезненными состояниями. [73] [74]

См. Также [ править ]

  • Тройной тест
  • Квадратный тест
  • Микрохимеризм

Ссылки [ править ]

  1. ^ Alberry M, Мэддокс D, Джонс М, Абдель Хади М, Абдель-Фаттах S, N Avent, Soothill PW (май 2007). «Свободная ДНК плода в материнской плазме при безэмбриональной беременности: подтверждение того, что источником является трофобласт». Пренатальная диагностика . Вили-Блэквелл. 27 (5): 415–8. DOI : 10.1002 / pd.1700 . PMID  17286310 .
  2. ^ Гупта А.К., Holzgreve Вт, Huppertz В, Малек А, Шнайдер Н, Хан S (ноябрь 2004 г.). «Обнаружение ДНК и РНК плода в микрочастицах синцитиотрофобластов, полученных из плаценты, созданных in vitro» . Клиническая химия . Американская ассоциация клинической химии (AACC). 50 (11): 2187–90. DOI : 10,1373 / clinchem.2004.040196 . PMID 15502097 . 
  3. ^ Smets Е.М., Виссер A, Go AT, ван Вугт JM, Oudejans CB (февраль 2006). «Новые биомаркеры преэклампсии». Clinica Chimica Acta; Международный журнал клинической химии . Elsevier BV. 364 (1–2): 22–32. DOI : 10.1016 / j.cca.2005.06.011 . PMID 16139262 . 
  4. ↑ Chan KC, Zhang J, Hui AB, Wong N, Lau TK, Leung TN, Lo KW, Huang DW, Lo YM (январь 2004 г.). «Распределение размеров материнской и плодной ДНК в материнской плазме» . Клиническая химия . Американская ассоциация клинической химии (AACC). 50 (1): 88–92. DOI : 10,1373 / clinchem.2003.024893 . PMID 14709639 . 
  5. ^ Li Y, Циммерман В, Rusterholz С, Кан А, Holzgreve Вт, Hahn S (июнь 2004 г.). «Разделение по размерам циркуляторной ДНК в материнской плазме позволяет легко обнаруживать полиморфизмы ДНК плода» (PDF) . Клиническая химия . Американская ассоциация клинической химии (AACC). 50 (6): 1002–11. DOI : 10,1373 / clinchem.2003.029835 . PMID 15073090 .  
  6. ^ Li Y, Di Наро E, Vitucci A, B Zimmermann, Holzgreve W, S Hahn (февраль 2005). «Обнаружение унаследованных от отца точечных мутаций плода для бета-талассемии с использованием фракционированной по размеру внеклеточной ДНК в материнской плазме» . ДЖАМА . Американская медицинская ассоциация (AMA). 293 (7): 843–9. DOI : 10,1001 / jama.293.7.843 . PMID 15713774 . 
  7. ^ Ван Е, Бэйти А, Struble С, Musci Т, песни К, Олифант А (июль 2013). «Гестационный возраст и влияние веса матери на внеклеточную ДНК плода в плазме матери» . Пренатальная диагностика . 33 (7): 662–6. DOI : 10.1002 / pd.4119 . PMID 23553731 . S2CID 31630351 .  
  8. ↑ Lo YM, Tein MS, Lau TK, Haines CJ, Leung TN, Poon PM, Wainscoat JS, Johnson PJ, Chang AM, Hjelm NM (апрель 1998 г.). «Количественный анализ ДНК плода в материнской плазме и сыворотке: значение для неинвазивной пренатальной диагностики» . Американский журнал генетики человека . Elsevier BV. 62 (4): 768–75. DOI : 10.1086 / 301800 . PMC 1377040 . PMID 9529358 .  
  9. ↑ Lo YM, Zhang J, Leung TN, Lau TK, Chang AM, Hjelm NM (январь 1999 г.). «Быстрое очищение плодной ДНК от материнской плазмы» . Американский журнал генетики человека . Elsevier BV. 64 (1): 218–24. DOI : 10.1086 / 302205 . PMC 1377720 . PMID 9915961 .  
  10. ↑ Lo YM, Hjelm NM, Fidler C, Sargent IL, Murphy MF, Chamberlain PF, Poon PM, Redman CW, Wainscoat JS (декабрь 1998 г.). «Пренатальная диагностика RhD-статуса плода с помощью молекулярного анализа материнской плазмы». Медицинский журнал Новой Англии . Медицинский журнал Новой Англии (NEJM / MMS). 339 (24): 1734–8. DOI : 10.1056 / nejm199812103392402 . PMID 9845707 . 
  11. ^ Allyse M, Сейрс LC, король JS, Нортон ME, Cho MK (ноябрь 2012). «Внеклеточное тестирование ДНК плода на анеуплоидию плода и за ее пределами: проблемы клинической интеграции в контексте США» . Репродукция человека . Издательство Оксфордского университета (ОУП). 27 (11): 3123–31. DOI : 10.1093 / humrep / des286 . PMC 3472618 . PMID 22863603 .  
  12. ^ Mujezinović F, Alfirevic Z (сентябрь 2007). «Осложнения, связанные с процедурой амниоцентеза и взятия проб ворсинок хориона: систематический обзор». Акушерство и гинекология . Ovid Technologies (Wolters Kluwer Health). 110 (3): 687–94. DOI : 10.1097 / 01.aog.0000278820.54029.e3 . PMID 17766619 . S2CID 25548568 .  
  13. ^ a b Lo YM (август 2008 г.). «Нуклеиновые кислоты плода в материнской плазме». Летопись Нью-Йоркской академии наук . Вили-Блэквелл. 1137 (1): 140–3. Bibcode : 2008NYASA1137..140L . DOI : 10.1196 / annals.1448.004 . PMID 18837938 . S2CID 3445205 .  
  14. ^ «Надежный точный пренатальный неинвазивный диагноз» . Проект NHS RAPID .
  15. ^ a b Hahn S, Chitty LS (апрель 2008 г.). «Неинвазивная пренатальная диагностика: современная практика и перспективы на будущее». Текущее мнение в акушерстве и гинекологии . 20 (2): 146–51. DOI : 10.1097 / GCO.0b013e3282f73349 . PMID 18388814 . S2CID 7222299 .  
  16. ^ a b Райт CF, Burton H (22 октября 2008 г.). «Использование бесклеточных нуклеиновых кислот плода в материнской крови для неинвазивной пренатальной диагностики» . Обновление репродукции человека . Издательство Оксфордского университета (ОУП). 15 (1): 139–51. DOI : 10.1093 / humupd / dmn047 . PMID 18945714 . 
  17. ^ Ли TJ, Рольник DL, Менезеш MA, McLennan AC, да Силва Коста F (апрель 2018). «Внеклеточное тестирование ДНК плода в одноэлементных зачатиях ЭКО» . Репродукция человека . 33 (4): 572–578. DOI : 10.1093 / humrep / dey033 . PMID 29462319 . 
  18. Перейти ↑ Dar P, Shani H, Evans MI (июнь 2016 г.). «Бесклеточная ДНК: сравнение технологий». Клиники лабораторной медицины . 36 (2): 199–211. DOI : 10.1016 / j.cll.2016.01.015 . PMID 27235906 . 
  19. ^ Грейс MR, Хардистите E, Dotters-Katz SK, Вор NL, Kuller JA (август 2016). «Скрининг внеклеточной ДНК: сложности и проблемы клинической реализации» . Акушерско-гинекологический осмотр . 71 (8): 477–87. DOI : 10.1097 / OGX.0000000000000342 . PMC 5548289 . PMID 27526871 .  
  20. ^ Allen S, Young E, Bowns B (апрель 2017). «Неинвазивная пренатальная диагностика моногенных заболеваний». Текущее мнение в акушерстве и гинекологии . 29 (2): 73–79. DOI : 10,1097 / GCO.0000000000000347 . PMID 28134670 . S2CID 33474139 .  
  21. ^ Guibert J, Benachi A, Grebille AG, Ernault P, Зорн JR, Коста JM (август 2003). «Кинетика появления гена SRY в материнской сыворотке: обнаружение с помощью ПЦР в реальном времени на ранних сроках беременности после вспомогательных репродуктивных технологий» . Репродукция человека . 18 (8): 1733–6. DOI : 10.1093 / humrep / deg320 . PMID 12871892 . 
  22. ^ Чиу RW, Пун LL, Lau Т.К., Leung Т.Н., Вонг Е.М., Lo YM (сентябрь 2001). «Влияние протоколов обработки крови на количественное определение плодной и общей ДНК в материнской плазме» . Клиническая химия . 47 (9): 1607–13. DOI : 10.1093 / clinchem / 47.9.1607 . PMID 11514393 . 
  23. ^ Legler TJ, Ль Z, Мавра А, оребрение К, Hromadnikova я, Galbiati S, Meaney С, Хультеном М.А., Crea Ж, Олссон М.Л., Мэддокс Д.Г., Хуанг Д, Фишер С. А., Спренгер-Haussels М, Суссан А.А., ван дер Schoot CE (сентябрь 2007 г.). «Отчет о семинаре по выделению ДНК плода из материнской плазмы». Пренатальная диагностика . Вили-Блэквелл. 27 (9): 824–9. DOI : 10.1002 / pd.1783 . PMID 17604339 . 
  24. ^ Dhallan R, Au туалет, Mattagajasingh S, S Emche, Бейлис Р, Damewood М, Кронин М, Chou В, М Мора (март 2004 г.). «Методы увеличения процента свободной ДНК плода, извлеченной из материнского кровообращения» . ДЖАМА . Американская медицинская ассоциация (AMA). 291 (9): 1114–9. DOI : 10,1001 / jama.291.9.1114 . PMID 14996781 . 
  25. ^ Benachi A, Yamgnane A, Olivi M, Думез Y, Gautier E, Коста JM (январь 2005). «Влияние формальдегида на пропорцию ДНК плода в плазме и сыворотке матери in vitro» . Клиническая химия . Американская ассоциация клинической химии (AACC). 51 (1): 242–4. DOI : 10,1373 / clinchem.2004.038125 . PMID 15514098 . 
  26. ^ Chinnapapagari С.К., Holzgreve Вт, Lapaire О, Циммерман В, С Хан (март 2005 г.). «Обработка образцов материнской крови формальдегидом не изменяет долю циркулирующих нуклеиновых кислот плода (ДНК и мРНК) в материнской плазме» . Клиническая химия . Американская ассоциация клинической химии (AACC). 51 (3): 652–5. DOI : 10,1373 / clinchem.2004.042119 . PMID 15738521 . 
  27. ^ a b Traeger-Synodinos J (2006). «ПЦР в реальном времени для пренатальной и преимплантационной генетической диагностики моногенных заболеваний». Молекулярные аспекты медицины . Elsevier BV. 27 (2–3): 176–91. DOI : 10.1016 / j.mam.2005.12.004 . PMID 16430951 . 
  28. ↑ Boon EM, Schlecht HB, Martin P, Daniels G, Vossen RH, den Dunnen JT, Bakker B, Elles R (октябрь 2007 г.). «Обнаружение Y-хромосомы с помощью ПЦР в реальном времени и полимеризации, активируемой пирофосфолизом, с использованием свободной ДНК плода, выделенной из материнской плазмы». Пренатальная диагностика . Вили-Блэквелл. 27 (10): 932–7. DOI : 10.1002 / pd.1804 . PMID 17600849 . 
  29. ^ Хилл М, Pařízek А, Cibula D, Kancheva R, Йирасек JE, Jirkovská М, Великова М, Kubátová Дж, Климкова М, Паскова А, ZIZKA Z, Kancheva л, Kazihnitková Н, Zamrazilová л, Starka л (октябрь 2010 г.). «Метаболом стероидов в жидкостях организма плода и матери на поздних сроках беременности человека». Журнал стероидной биохимии и молекулярной биологии . Elsevier BV. 122 (4): 114–32. DOI : 10.1016 / j.jsbmb.2010.05.007 . PMID 20580824 . S2CID 25820012 .  
  30. ^ Al-Yatama МК, Мустафа А.С., Али S, Abraham S, Хан Z, Khaja N (май 2001). «Обнаружение ДНК Y-хромосомы в плазме и моче беременных женщин с использованием вложенной полимеразной цепной реакции». Пренатальная диагностика . Вили-Блэквелл. 21 (5): 399–402. DOI : 10.1002 / pd.69 . PMID 11360283 . 
  31. ^ a b Zimmermann BG, Grill S, Holzgreve W, Zhong XY, Jackson LG, Hahn S (декабрь 2008 г.). «Цифровая ПЦР: новый мощный инструмент для неинвазивной пренатальной диагностики?» . Пренатальная диагностика . Вили-Блэквелл. 28 (12): 1087–93. DOI : 10.1002 / pd.2150 . PMID 19003785 . S2CID 2909830 .  
  32. ↑ a b Lo YM, Lun FM, Chan KC, Tsui NB, Chong KC, Lau TK, Leung TY, Zee BC, Cantor CR, Chiu RW (август 2007 г.). «Цифровая ПЦР для молекулярной диагностики хромосомной анеуплоидии плода» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . Труды Национальной академии наук. 104 (32): 13116–21. DOI : 10.1073 / pnas.0705765104 . PMC 1934923 . PMID 17664418 .  
  33. ↑ Quake S (июль 2007 г.). «На стыке физики и биологии». Биотехнологии . 43 (1): 19. PMID 17695250 . 
  34. ↑ Chiu RW, Lo YM (ноябрь 2010 г.). «Связанные с беременностью микроРНК в материнской плазме: канал связи плода и матери?» . Клиническая химия . Американская ассоциация клинической химии (AACC). 56 (11): 1656–7. DOI : 10,1373 / clinchem.2010.153684 . PMID 20837782 . 
  35. ^ а б Дин С (2008). «MALDI-TOF масс-спектрометрия для анализа внеклеточной ДНК плода в материнской плазме». Пренатальная диагностика . Методы молекулярной биологии . Методы молекулярной биологии ™. 444 . Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. С. 253–67. DOI : 10.1007 / 978-1-59745-066-9_20 . ISBN 978-1-58829-803-4. PMID  18425487 .
  36. ^ Akolekar R, Фаркаш DH, VanAgtmael AL, Bombard AT, Nicolaides KH (октябрь 2010). «Определение пола плода с использованием циркулирующей внеклеточной ДНК плода (ccffDNA) на сроке от 11 до 13 недель». Пренатальная диагностика . Вили-Блэквелл. 30 (10): 918–23. DOI : 10.1002 / pd.2582 . PMID 20721878 . S2CID 20744999 .  
  37. ^ Tong Ю.К., Чиу RW, Чан KC, Leung TY, Lo YM (сентябрь 2012). «Технические проблемы иммунопреципитации метилированной ДНК плода для неинвазивной диагностики трисомии 21». Природная медицина . Springer Nature. 18 (9): 1327–8, ответ автора 1328–9. DOI : 10.1038 / nm.2915 . PMID 22961155 . S2CID 31316176 .  
  38. ^ Papageorgiou Е.А., Karagrigoriou A, E Tsaliki, Velissariou V, Картер NP, Patsalis PC (апрель 2011). «Коэффициент метилирования ДНК плода позволяет проводить неинвазивную пренатальную диагностику трисомии 21» . Природная медицина . Springer Nature. 17 (4): 510–3. DOI : 10.1038 / nm.2312 . PMC 3977039 . PMID 21378977 .  
  39. ^ a b White HE, Dent CL, Hall VJ, Crolla JA, Chitty LS (14 сентября 2012 г.). Oudejans C (ред.). «Оценка нового теста для обнаружения фетального маркера RASSF1A: повышение диагностической надежности неинвазивной пренатальной диагностики» . PLOS ONE . Публичная научная библиотека (PLoS). 7 (9): e45073. Bibcode : 2012PLoSO ... 745073W . DOI : 10.1371 / journal.pone.0045073 . PMC 3443218 . PMID 23024794 .  
  40. ↑ Ng EK, Tsui NB, Lam NY, Chiu RW, Yu SC, Wong SC, Lo ES, Rainer TH, Johnson PJ, Lo YM (август 2002 г.). «Присутствие фильтруемой и нефильтруемой мРНК в плазме онкологических больных и здоровых людей» . Клиническая химия . 48 (8): 1212–7. DOI : 10.1093 / clinchem / 48.8.1212 . PMID 12142376 . 
  41. Перейти ↑ Baird PA, Anderson TW, Newcombe HB, Lowry RB (май 1988). «Генетические расстройства у детей и молодых людей: популяционное исследование» . Американский журнал генетики человека . 42 (5): 677–93. PMC 1715177 . PMID 3358420 .  
  42. ^ Scheffer PG, van der Schoot CE, Page-Christiaens GC, Bossers B, van Erp F, de Haas M (январь 2010). «Достоверность определения пола плода по материнской плазме». Акушерство и гинекология . Ovid Technologies (Wolters Kluwer Health). 115 (1): 117–26. DOI : 10,1097 / aog.0b013e3181c3c938 . PMID 20027043 . S2CID 26126381 .  
  43. ^ a b Bustamante-Aragones A, Gonzalez-Gonzalez C, de Alba MR, Ainse E, Ramos C (март 2010 г.). «Неинвазивная пренатальная диагностика с использованием вкфДНК в материнской крови: современное состояние». Экспертный обзор молекулярной диагностики . Informa UK Limited. 10 (2): 197–205. DOI : 10,1586 / erm.09.86 . PMID 20214538 . S2CID 207219250 .  
  44. ^ Циммерман В, Эль-Sheikhah А, Николаидес К, Holzgreve Вт, Hahn S (сентябрь 2005 г.). «Оптимизированное количественное ПЦР-измерение мужской плодной ДНК в материнской плазме в реальном времени» . Клиническая химия . Американская ассоциация клинической химии (AACC). 51 (9): 1598–604. DOI : 10,1373 / clinchem.2005.051235 . PMID 16020496 . 
  45. ^ Finning KM, Chitty LS (апрель 2008). «Неинвазивное определение пола плода: влияние на клиническую практику». Семинары по медицине плода и новорожденного . Elsevier BV. 13 (2): 69–75. DOI : 10.1016 / j.siny.2007.12.007 . PMID 18243829 . 
  46. ^ Маркей CM, Wadia PR, Рубин Б., Sonnenschein C, Soto AM (июнь 2005). «Долгосрочные эффекты воздействия на плод низких доз ксеноэстрогена бисфенола-А в женских половых путях мышей» . Биология размножения . Издательство Оксфордского университета (ОУП). 72 (6): 1344–51. DOI : 10.1095 / biolreprod.104.036301 . PMID 15689538 . 
  47. ^ Сейрс LC, Cho MK (июль 2011). «Внеклеточное тестирование нуклеиновых кислот плода: обзор технологии и ее применения». Акушерско-гинекологический осмотр . Ovid Technologies (Wolters Kluwer Health). 66 (7): 431–42. DOI : 10.1097 / ogx.0b013e31822dfbe2 . PMID 21944155 . S2CID 17018886 .  
  48. ↑ Hill M, Barrett AN, White H, Chitty LS (октябрь 2012 г.). «Использование внеклеточной ДНК плода в материнском кровообращении». Лучшие практики и исследования. Клиническое акушерство и гинекология . Elsevier BV. 26 (5): 639–54. DOI : 10.1016 / j.bpobgyn.2012.03.004 . PMID 22542961 . 
  49. ^ Norbury G, Norbury CJ (апрель 2008). «Неинвазивная пренатальная диагностика заболеваний одного гена: насколько мы близки?». Семинары по медицине плода и новорожденного . Elsevier BV. 13 (2): 76–83. DOI : 10.1016 / j.siny.2007.12.008 . PMID 18234572 . 
  50. ^ a b Li Y, Page-Christiaens GC, Gille JJ, Holzgreve W, Hahn S (январь 2007 г.). «Неинвазивное пренатальное обнаружение ахондроплазии в фракционированной по размеру внеклеточной ДНК с помощью анализа MALDI-TOF MS». Пренатальная диагностика . Вили-Блэквелл. 27 (1): 11–7. DOI : 10.1002 / pd.1608 . PMID 17154237 . 
  51. ^ [1] de Die-Smulders CE, de Wert GM, Liebaers I, Tibben A, Evers-Kiebooms G (2013). «Репродуктивные возможности будущих родителей в семьях с болезнью Гентингтона: клинические, психологические и этические размышления» . Обновление репродукции человека . 19 (3): 304–15. DOI : 10.1093 / humupd / dms058 . PMID 23377865 . 
  52. ^ Вентилятор HC, Блюменфельд YJ, Chitkara U, Hudgins L, Quake SR (октябрь 2008). «Неинвазивная диагностика анеуплоидии плода с помощью дробовика секвенирования ДНК из материнской крови» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . Труды Национальной академии наук. 105 (42): 16266–71. Bibcode : 2008PNAS..10516266F . DOI : 10.1073 / pnas.0808319105 . PMC 2562413 . PMID 18838674 .  
  53. ^ а б Кардо Л., Гарсия Б. П., Альварес Ф. В. (август 2010 г.). «Неинвазивное генотипирование RHD плода в первом триместре беременности». Клиническая химия и лабораторная медицина . Walter de Gruyter GmbH. 48 (8): 1121–6. DOI : 10.1515 / cclm.2010.234 . PMID 20482298 . S2CID 31027958 .  
  54. ^ Chinen П.А., Nardozza Л.М., Martinhago компакт - диск, Camano л, Даэр S, Парес БД, Minett Т, Арауйо Жуниор Е, Морон АФ (ноябрь 2010 г.). «Неинвазивное определение резус-группы крови плода, статуса антигена D с помощью бесклеточного анализа ДНК в плазме крови матери: опыт в бразильской популяции». Американский журнал перинатологии . Георг Тиме Верлаг KG. 27 (10): 759–62. DOI : 10,1055 / с-0030-1253560 . PMID 20408112 . 
  55. ^ Okwundu CI, Афолаби BB (январь 2013). «Внутримышечные против внутривенных анти-D для предотвращения аллоиммунизации резус во время беременности». Кокрановская база данных систематических обзоров (1): CD007885. DOI : 10.1002 / 14651858.CD007885.pub2 . PMID 23440818 . 
  56. ^ Айкут А, Онай Н, Sagol S, О.Гюндуз С, Р Ozkinay, Cogulu O (декабрь 2013 г. ). «Определение резус-статуса плода с помощью анализа ДНК материнской плазмы» . Балканский журнал медицинской генетики . Walter de Gruyter GmbH. 16 (2): 33–8. DOI : 10.2478 / bjmg-2013-0029 . PMC 4001413 . PMID 24778561 .  
  57. ^ Свободова я, Pazourková Е, Hořínek А, Novotná М, Calda Р, Korabečná М (2015). «Выполнение цифровой ПЦР капель при неинвазивном генотипировании RHD плода - сравнение с рутинным подходом на основе ПЦР в реальном времени» . PLOS ONE . 10 (11): e0142572. Bibcode : 2015PLoSO..1042572S . DOI : 10.1371 / journal.pone.0142572 . PMC 4642940 . PMID 26562517 .  
  58. ^ Папасавва Т., Мартин П., Леглер Т.Дж., Лиасидес М., Анастасиу Г., Кристофидес А., Христодулу Т., Деметриу С., Керимис П., Контос С., Леонтиадес Г., Папапетру Д., Патроклос Т., Филакту М., Зоттис Н., Карици Е. E, Kountouris P, Veldhuisen B, van der Schoot E, Kleanthous M (апрель 2016 г.). «Распространенность статуса RhD и клиническое применение неинвазивного пренатального определения RHD плода в плазме крови матери: 5-летний опыт работы на Кипре» . BMC Research Notes . Springer Nature. 9 (1): 198. DOI : 10,1186 / s13104-016-2002-х . PMC 4818414 . PMID 27036548 .  
  59. ↑ Zhang B, Lu BY, Yu B, Zheng FX, Zhou Q, Chen YP, Zhang XQ (апрель 2017 г.). «Неинвазивный пренатальный скрининг на анеуплоидии общих половых хромосом плода из материнской крови» . Журнал международных медицинских исследований . Публикации SAGE. 45 (2): 621–630. DOI : 10.1177 / 0300060517695008 . PMC 5536640 . PMID 28357876 .  
  60. ^ a b c Каземи М., Салехи М., Хейроллахи М. (10 августа 2016 г.). «Синдром Дауна: текущее состояние, проблемы и перспективы на будущее» . Международный журнал молекулярной и клеточной медицины . 5 (3): 125–133. PMC 5125364 . PMID 27942498 .  
  61. ^ Mersy E, Смитс LJ, ван Winden Л. де Die-Smulders CE, Paulussen AD, Macville М.В., Coumans А.Б., Frints SG (2013). «Неинвазивное обнаружение трисомии плода 21: систематический обзор и отчет о качестве и результатах исследований диагностической точности, проведенных в период с 1997 по 2012 год» . Обновление репродукции человека . 19 (4): 318–29. DOI : 10.1093 / humupd / dmt001 . PMID 23396607 . 
  62. ^ Кларк-Ganheart CA, Икбал С.Н., Браун DL, черный S, Fries MH (май 2014). «Понимание ограничений циркулирующей внеклеточной ДНК плода: пример двух уникальных случаев» . Журнал клинической гинекологии и акушерства . 3 (2): 38–70. DOI : 10,14740 / jcgo229w . PMC 4185925 . PMID 25298847 .  
  63. ^ Wataganara T, LeShane ES, Farina A, Messerlian GM, Ли T, Canick JA, Bianchi DW (февраль 2003). «Уровни внеклеточной ДНК плода в материнской сыворотке повышаются в случаях трисомии 13, но не в случае трисомии 18». Генетика человека . 112 (2): 204–8. DOI : 10.1007 / s00439-002-0853-9 . PMID 12522563 . S2CID 9721963 .  
  64. ↑ Chiu RW, Lo YM (апрель 2011 г.). «Неинвазивная пренатальная диагностика с помощью анализа нуклеиновых кислот плода в плазме матери: наступление совершеннолетия». Семинары по медицине плода и новорожденного . Elsevier BV. 16 (2): 88–93. DOI : 10.1016 / j.siny.2010.10.003 . PMID 21075065 . 
  65. ^ Неинвазивная пренатальная диагностика анеуплоидии плода с использованием бесклеточных нуклеиновых кислот плода в материнской крови: клиническая политика (вступает в силу 01.05.2013) из Oxford Health Plan
  66. ^ Бьянки DW, Паркер Р. Л., Вентворт Дж, Madankumar R, Саффер С, Дас А.Ф., Крэйг JA, Чудова Д.И., Девере ЛП, Джонс кВт, Оливер К, Рава Р.П., Sehnert AJ (февраль 2014). «Секвенирование ДНК по сравнению со стандартным пренатальным скринингом на анеуплоидию». Медицинский журнал Новой Англии . 370 (9): 799–808. DOI : 10.1056 / NEJMoa1311037 . PMID 24571752 . S2CID 13278444 .  . Недавнее исследование, опубликованное в Медицинском журнале Новой Англии, продемонстрировало возможность использования НИПТ в популяции с низким уровнем риска.
  67. ^ Хендерсон JT, Томпсон JH, Burda BU, Кантор A (апрель 2017). «Скрининг на преэклампсию: отчет о доказательствах и систематический обзор для Целевой группы США по профилактическим услугам». ДЖАМА . Американская медицинская ассоциация (AMA). 317 (16): 1668–1683. DOI : 10,1001 / jama.2016.18315 . PMID 28444285 . S2CID 205077025 .  
  68. ^ а б Севал ММ, Карабулут Х.Г., Тюкюн А, Коч А (2015). «Бесклеточная ДНК плода в плазме беременных с преэклампсией». Клиническое и экспериментальное акушерство и гинекология . 42 (6): 787–91. PMID 26753487 . 
  69. ↑ Lo YM, Lau TK, Zhang J, Leung TN, Chang AM, Hjelm NM, Elmes RS, Bianchi DW (октябрь 1999 г.). «Повышенная концентрация ДНК плода в плазме беременных женщин, вынашивающих плод с трисомией 21» . Клиническая химия . 45 (10): 1747–51. DOI : 10.1093 / clinchem / 45.10.1747 . PMID 10508120 . 
  70. Перейти ↑ Leung TN, Zhang J, Lau TK, Chan LY, Lo YM (январь 2001 г.). «Повышенная концентрация ДНК плода в плазме матери у женщин, у которых в конечном итоге развивается преэклампсия» . Клиническая химия . 47 (1): 137–9. DOI : 10.1093 / clinchem / 47.1.137 . PMID 11148193 . 
  71. ^ Zhong XY, Holzgreve W, S Hahn (2002). «Уровни бесклеточной ДНК плода в материнской плазме повышаются до начала преэклампсии». Гипертония при беременности . Informa UK Limited. 21 (1): 77–83. DOI : 10,1081 / PRG-120002911 . PMID 12044339 . S2CID 72519129 .  
  72. ^ Yurkiewicz ИК, Корф BR, Lehmann LS (январь 2014). «Пренатальное полногеномное секвенирование - этично ли стремление узнать будущее плода?». Медицинский журнал Новой Англии . 370 (3): 195–7. DOI : 10.1056 / NEJMp1215536 . PMID 24428465 . S2CID 205109276 .  
  73. ↑ Wellcome Trust Case Control Consortium (июнь 2007 г.). «Общегеномное ассоциативное исследование 14 000 случаев семи распространенных заболеваний и 3 000 общих контрольных» . Природа . 447 (7145): 661–78. Bibcode : 2007Natur.447..661B . DOI : 10,1038 / природа05911 . PMC 2719288 . PMID 17554300 .  
  74. ^ Mailman MD, Feolo M, Jin Y, Kimura M, Tryka K, Bagoutdinov R и др. (Октябрь 2007 г.). «База данных генотипов и фенотипов NCBI dbGaP» . Генетика природы . 39 (10): 1181–6. DOI : 10.1038 / ng1007-1181 . PMC 2031016 . PMID 17898773 .