Изобретенный и назван по имени Александра Даунса [1] [2] , A гомогенизатора Даунса или «Douncer», представляет собой цилиндрическую стеклянную трубку, закрытую с одного конца, с двумя стеклянными пестики тщательно указанных наружных диаметров, предназначенные для нежной гомогенизации в эукариотических клетки (например, клетки млекопитающих). Гомогенизаторы Даунса до сих пор широко используются для выделения клеточных органелл.
Два песта-гомогенизатора Даунса (известные как «рыхлый» или «A» и «плотный» или «B» песты) имеют тщательно определенный внешний диаметр относительно внутреннего диаметра цилиндра. Пест «А» (свободный) имеет зазор от стенки цилиндра (~ 0,0025 - 0,0055 дюйма), в то время как пест «В» (плотный) имеет зазор (~ 0,0005 - 0,0025 дюйма). [3] Это позволяет тканям и клеткам лизироваться под действием напряжения сдвига с минимальной (если есть) степенью нагревания, тем самым оставляя экстрагированные органеллы или термочувствительные ферментные комплексы в значительной степени нетронутыми.
Обычно мягкую ткань (например, печень млекопитающего) разрезают или разбивают на более мелкие кусочки и помещают в стеклянный цилиндр вместе с подходящим объемом подходящего буфера для лизиса . Гомогенизация осуществляется определенным числом «проходов» пестов, сначала свободным пестиком, затем плотным пестиком, вверх и вниз по цилиндру. [4] Типично от пяти до десяти проходов. Гомогенизаторы Dounce обычно производятся из боросиликатного стекла, но они все еще хрупкие, и с ними следует обращаться с осторожностью. Перед использованием в гомогенизаторе Даунса необходимо предварительно гомогенизировать особо твердые или жесткие ткани.
Эукариотические клетки с прочными клеточными стенками, такие как Saccharomyces cerevisiae , нельзя лизировать непосредственно с помощью гомогенизатора Даунса, если только клеточная стенка не будет сначала разрушена (например, литиказой или зимолиазой в случае S. cerevisiae ).
Рекомендации
- ^ Dounce, AL ; Монти, KJ; Пейт, С. (1954). «Образование геля из ядер клеток, выделенных по усовершенствованной методике». FASEB J. 13 : 201. ISSN 0014-9446 .
- ^ Даунс, А.Л. (1955). «СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПОВРЕЖДЕННЫХ МИТОХОНДРИЙ И ЯДЕР ИЗ ОДНОГО ГОМОГЕНАТА И ВЛИЯНИЕ РАЗРУШЕНИЯ МИТОХОНДРИЙ НА СВОЙСТВА ЯДЕР КЛЕТОК» . Журнал клеточной биологии . 1 (2): 139–153. DOI : 10,1083 / jcb.1.2.139 . ISSN 0021-9525 . PMC 2223770 .
- ^ http://www.kimble-chase.com/literature/TissueGrinders.pdf
- ^ Деннисон, К. (2013). Руководство по выделению белков . Сосредоточьтесь на структурной биологии. Springer Нидерланды. п. 42. ISBN 978-94-017-0269-0. Проверено 8 января 2019 .