Иммуномагнитная сепарация ( ИМС ) – это лабораторный инструмент, позволяющий эффективно изолировать клетки из жидкости организма или культивируемых клеток . Его также можно использовать как метод количественной оценки патогенности продуктов питания, крови или фекалий. Анализ ДНК подтвердил совместное использование этого метода и полимеразной цепной реакции (ПЦР). [1] Еще одним лабораторным инструментом разделения является аффинная магнитная сепарация (АМС), которая больше подходит для выделения прокариотических клеток. [2]
IMS занимается выделением клеток, белков и нуклеиновых кислот путем специфического захвата биомолекул путем прикрепления небольших намагниченных частиц, шариков, содержащих антитела и лектины . [3] Эти шарики имеют покрытие для связывания с целевыми биомолекулами, аккуратно разделяются и проходят несколько циклов промывки для получения целевых молекул, связанных с этими суперпарамагнитными шариками , которые могут различаться в зависимости от силы магнитного поля, и целевые молекулы затем элюируются для собрать супернатант , а затем определить концентрацию целевых биомолекул. IMS позволяет получить определенные концентрации специфических молекул внутри целевых бактерий.
Смесь клеточной популяции будет помещена в магнитное поле, где клетки затем прикрепятся к суперпарамагнитным шарикам, конкретным примером являются шарики Dynabeads (4,5 мкм), которые останутся после удаления избытка субстрата, связываясь с целевым антигеном. Dynabeads состоит из железосодержащих сердцевин, покрытых тонким слоем полимерной оболочки, обеспечивающей поглощение биомолекул. Гранулы покрыты первичными антителами, специфическими антителами, лектинами, ферментами или стрептавидином; [3] Связь между намагниченными шариками, покрытыми материалами, представляет собой расщепляемый ДНК-линкер, отделяющий клетки от шариков, когда культивирование клеток более желательно. [4]
Многие из этих бусин имеют одинаковые принципы разделения; однако наличие и разная сила магнитных полей требует определенных размеров шариков, исходя из разветвлений разделения клеточной популяции. Шарики большего размера (>2 мкм) представляют собой наиболее часто используемый ассортимент, производимый компанией Dynal (Dynal [UK] Ltd., Wirral, Мерсисайд, Великобритания; Dynal, Inc., Лейк-Саксесс, Нью-Йорк). В то время как более мелкие шарики (<100 нм) в основном используются для системы MACS, производимой MilteNY Biotech (MilteNY Biotech Ltd., Бисли, Суррей, Великобритания; MilteNY Biotech Inc., Оберн, Калифорния). [3]
Иммуномагнитная сепарация используется в различных научных областях, включая молекулярную биологию, микробиологию и иммунологию. (3) Этот метод разделения заключается не только в разделении клеток внутри крови, но также может быть использован для методов отделения от первичных опухолей и при исследовании метастазов путем разделения на составные части, создания задержки единичных клеток, а затем позволяя подходящему антителу метить клетку. При исследовании метастазов этот метод разделения может оказаться необходимым для разделения, если имеется популяция клеток и требуется изолировать опухолевые клетки в опухолях, периферической крови и костном мозге . [5]
Антитела, покрывающие парамагнитные шарики, будут связываться с антигенами, присутствующими на поверхности клеток, таким образом захватывая клетки и способствуя концентрации этих прикрепленных к шарикам клеток. Процесс концентрации создается магнитом, расположенным сбоку от пробирки и подносящим к нему шарики. Системы MACS (система магнитного разделения ячеек): [6] [3]