Из Википедии, бесплатной энциклопедии
  (Перенаправлен с полиакриламидного геля )
Перейти к навигации Перейти к поиску
"СТРАНИЦА" перенаправляется сюда. Об инициативе администрации Обамы см. Послы президента по вопросам глобального предпринимательства . Чтобы узнать о других значениях, см. Страницу .

Изображение СТРАНИЦЫ SDS. Молекулярные маркеры (лестница) находятся в левой полосе.

Электрофорез в полиакриламидном геле ( PAGE ) - это метод, широко используемый в биохимии , судебной химии , генетике , молекулярной биологии и биотехнологии для разделения биологических макромолекул , обычно белков или нуклеиновых кислот , в зависимости от их электрофоретической подвижности . Электрофоретическая подвижность зависит от длины, конформации и заряда молекулы. Полиакриламидгель-электрофорез - мощный инструмент, используемый для анализа образцов РНК. Когда полиакриламидный гель денатурируется после электрофореза, он предоставляет информацию о составе образца РНК. [1]

Гидратация из акрилонитрила приводит к образованию акриламида молекул ( С
3ЧАС
5NO ) нитрилгидратазой . [2] Перед добавлением воды мономер акриламида находится в порошкообразном состоянии. Акриламид токсичен для нервной системы человека, поэтому при работе с ним необходимо соблюдать все меры безопасности. Акриламид растворим в воде и при добавлении воды полимеризуется, что приводит к образованию полиакриламида. [2] Полезно получать полиакриламидный гель путем гидратации акрилмида, поскольку размер пор можно регулировать. Повышенные концентрации акриламида приводят к уменьшению размера пор после полимеризации. Полиакриламидный гель с маленькими порами помогает лучше исследовать более мелкие молекулы, поскольку маленькие молекулы могут проникать в поры и проходить через гель, в то время как большие молекулы захватываются в отверстиях пор.

Как и во всех формах гель-электрофореза , молекулы могут работать в своем естественном состоянии , сохраняя структуру молекул более высокого порядка. Этот метод называется native-PAGE. В качестве альтернативы можно добавить химический денатурант, чтобы удалить эту структуру и превратить молекулу в неструктурированную молекулу, подвижность которой зависит только от ее длины (поскольку все комплексы белок-SDS имеют одинаковое отношение массы к заряду). Эта процедура называется SDS-PAGE.. Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) - это метод разделения молекул на основе разницы в их молекулярной массе. При pH, при котором проводят гель-электрофорез, молекулы SDS заряжаются отрицательно и связываются с белками в заданном соотношении, примерно одна молекула SDS на каждые 2 аминокислоты. [3] : 164–79Таким образом, детергент обеспечивает всем белкам одинаковое отношение заряда к массе. Связываясь с белками, детергент разрушает их вторичную, третичную и / или четвертичную структуру, денатурируя их и превращая в отрицательно заряженные линейные полипептидные цепи. Под воздействием электрического поля в PAGE отрицательно заряженные полипептидные цепи перемещаются к аноду с различной подвижностью. Их подвижность или расстояние, пройденное молекулами, обратно пропорционально логарифму их молекулярной массы. [4]Сравнивая относительное отношение расстояния, пройденного каждым белком, к длине геля (Rf), можно сделать выводы об относительной молекулярной массе белков, где длина геля определяется расстоянием, пройденным небольшой молекулой. как следящий краситель. [5]

Для нуклеиновых кислот мочевина является наиболее часто используемым денатурирующим агентом. Для белков додецилсульфат натрия (SDS) представляет собой анионный детергент, применяемый к образцам белков для покрытия белков, чтобы передать два отрицательных заряда (от каждой молекулы SDS) на каждые две аминокислоты денатурированного белка. [3] : 161–3 2-меркаптоэтанолможет также использоваться для разрыва дисульфидных связей, обнаруженных между белковыми комплексами, что способствует дальнейшей денатурированию белка. В большинстве белков связывание SDS с полипептидными цепями обеспечивает равномерное распределение заряда на единицу массы, что приводит к фракционированию по приблизительному размеру во время электрофореза. Белки с более высоким гидрофобным содержанием - например, многие мембранные белки и те, которые взаимодействуют с поверхностно-активными веществами в своей природной среде - по сути сложнее точно обработать с помощью этого метода из-за большей вариабельности соотношения связанных SDS. [6]С процедурной точки зрения совместное использование как Native, так и SDS-PAGE может быть использовано для очистки и разделения различных субъединиц белка. Native-PAGE сохраняет олигомерную форму нетронутой и будет показывать полосу на геле, которая представляет уровень активности. SDS-PAGE денатурирует и разделяет олигомерную форму на ее мономеры, показывая полосы, которые представляют их молекулярные массы. Эти полосы можно использовать для идентификации и оценки чистоты белка. [3] : 161–3

Процедура [ править ]

Подготовка образца [ править ]

Образцы могут быть любым материалом, содержащим белки или нуклеиновые кислоты. Они могут быть получены биологическим путем, например, из прокариотических или эукариотических клеток, тканей, вирусов, образцов окружающей среды или очищенных белков. В случае твердых тканей или клеток они часто сначала разрушаются механически с помощью блендера (для больших объемов образцов), с использованием гомогенизатора (меньшие объемы), с помощью ультразвукового устройства или с использованием циклического воздействия высокого давления, а также комбинации биохимических и биохимических методов. механические методы, включая различные типы фильтрации и центрифугирования, могут использоваться для разделения различных клеточных компартментов и органелл перед электрофорезом. Синтетические биомолекулы, такие как олигонуклеотиды также могут использоваться в качестве аналитов.

Восстановление типичной дисульфидной связи с помощью DTT посредством двух последовательных реакций тиол-дисульфидного обмена .

Образец для анализа при желании необязательно смешивают с химическим денатурирующим агентом, обычно SDS для белков или мочевиной для нуклеиновых кислот. SDS - это анионный детергент, который денатурирует вторичные и не связанные дисульфидными связями третичные структуры и дополнительно накладывает отрицательный заряд на каждый белок пропорционально его массе. Мочевина разрывает водородные связи между парами оснований нуклеиновой кислоты, вызывая отжиг составляющих цепей. Нагревание образцов до температуры не менее 60 ° C дополнительно способствует денатурации. [7] [8] [9] [10]

В дополнение к SDS, белки необязательно могут быть кратковременно нагреты почти до кипения в присутствии восстанавливающего агента, такого как дитиотреитол (DTT) или 2-меркаптоэтанол (бета-меркаптоэтанол / BME) , который дополнительно денатурирует белки за счет уменьшения дисульфидных связей, таким образом преодолевая некоторые формы третичного сворачивания белка и разрушая структуру четвертичного белка (олигомерные субъединицы). Это известно как сокращение SDS-PAGE.

В раствор может быть добавлен следящий краситель. Обычно он имеет более высокую электрофоретическую подвижность, чем аналиты, что позволяет экспериментатору отслеживать продвижение раствора через гель во время электрофоретического анализа.

Приготовление акриламидных гелей [ править ]

Гели обычно состоят из акриламида , бисакриламида , необязательного денатурирующего агента (SDS или мочевина) и буфера с отрегулированным pH. Раствор можно дегазировать под вакуумом, чтобы предотвратить образование пузырьков воздуха во время полимеризации. В качестве альтернативы, бутанол может быть добавлен в растворяющий гель (для белков) после его заливки, поскольку бутанол удаляет пузырьки и делает поверхность гладкой. [11] Источник свободных радикалов и стабилизатор, такой как персульфат аммония и TEMED , добавляются для инициирования полимеризации. [12] В результате реакции полимеризации образуется гель из-за добавленного бисакриламида., которые могут образовывать поперечные связи между двумя молекулами акриламида. Отношение бисакриламида к акриламиду можно варьировать для специальных целей, но обычно оно составляет примерно 1: 35. Концентрация акриламида в геле также может варьироваться, обычно в диапазоне от 5% до 25%. Гели с более низким процентным содержанием лучше подходят для разделения молекул с очень высокой молекулярной массой, тогда как для разделения более мелких белков требуется гораздо более высокое процентное содержание акриламида. Средний диаметр пор полиакриламидных гелей определяется общей концентрацией акриламидов (% T с T = общая концентрация акриламида и бисакриламида) и концентрацией сшивающего бисакриламида (% C с C = концентрация бисакриламида). [13]Размер пор уменьшается обратно до% T. Что касается% C, концентрация 5% дает самые маленькие поры, поскольку влияние бисакриламида на размер пор имеет форму параболы с вершиной в 5%.

Гели обычно полимеризуются между двумя стеклянными пластинами в литейном устройстве для геля с гребенкой, вставленной вверху для создания лунок для образцов. После полимеризации геля гребешок можно удалить, и гель готов для электрофореза.

Электрофорез [ править ]

В PAGE используются различные буферные системы в зависимости от природы образца и цели эксперимента. Буферы, используемые на аноде и катоде, могут быть одинаковыми или разными. [9] [14] [15]

Электрическое поле прикладывается к гелю, заставляя отрицательно заряженные белки или нуклеиновые кислоты мигрировать через гель от отрицательного электрода (который является катодом, поскольку это электролитический, а не гальванический элемент) и к положительному электроду ( анод). В зависимости от размера каждая биомолекула движется через матрицу геля по-разному: небольшие молекулы легче проходят через поры в геле, а более крупные - сложнее. Гель обычно протекает в течение нескольких часов, хотя это зависит от напряжения, приложенного к гелю; миграция происходит быстрее при более высоких напряжениях, но эти результаты обычно менее точны, чем при более низких напряжениях. По прошествии установленного времени биомолекулы мигрировали на разные расстояния в зависимости от их размера. Более мелкие биомолекулы перемещаются дальше по гелю,в то время как более крупные остаются ближе к исходной точке. Таким образом, биомолекулы могут быть разделены примерно по размеру, который зависит в основном от молекулярной массы в денатурирующих условиях, но также зависит от конформации более высокого порядка в естественных условиях. Подвижность геля определяется как скорость миграции при градиенте напряжения 1 В / см и измеряется в см.2 / сек / В. [3] : 161–3 Для аналитических целей, относительная подвижность биомолекул, R f , отношение расстояния, пройденного молекулой по гелю, к общему расстоянию перемещения следящего красителя в зависимости от молекулярной массы молекулы ( или иногда логарифм MW, или, скорее, M r , молекулярный радиус). Такие обычно линейные графики представляют стандартные маркеры или калибровочные кривые, которые широко используются для количественной оценки различных размеров биомолекул. [3] : 161–3

Однако некоторые гликопротеины аномально действуют на гелях с SDS. Кроме того, сообщается, что анализ более крупных белков в диапазоне от 250 000 до 600 000 Да является проблематичным из-за того, что такие полипептиды неправильно перемещаются в обычно используемых гелевых системах. [16]

Дальнейшая обработка [ править ]

Два SDS-PAGE-геля после завершения цикла

После электрофореза гель может быть окрашен (для белков, чаще всего с помощью кумасси бриллиантового синего R-250 или авторадиографии; для нуклеиновых кислот - бромидом этидия ; или для любого из них - окрашиванием серебром ), что позволяет визуализировать разделенные белки, или подвергнуться дальнейшей обработке ( например Вестерн-блоттинг ). После окрашивания биомолекулы разных видов проявляются в виде отдельных полос внутри геля. Обычно маркеры размера молекулярной массы известной молекулярной массы размещаются на отдельной дорожке в геле для калибровки геля и определения приблизительной молекулярной массы неизвестных биомолекул путем сравнения пройденного расстояния относительно маркера.

Для белков SDS-PAGE обычно является первым выбором в качестве анализа чистоты из-за его надежности и простоты. Присутствие SDS и стадия денатурирования разделяют белки примерно по размеру, но может происходить аберрантная миграция некоторых белков. Различные белки также могут окрашиваться по-разному, что мешает количественной оценке путем окрашивания. PAGE можно также использовать в качестве препаративного метода очистки белков. Например, количественный препаративный электрофорез в нативном непрерывном полиакриламидном геле ( QPNC-PAGE ) представляет собой метод разделения нативных металлопротеинов в сложных биологических матрицах.

Химические ингредиенты и их роль [ править ]

Полиакриламидный гель (ПАГ) был известен как потенциальная среда для заливки срезов тканей еще в 1964 году, и две независимые группы использовали ПАГ в электрофорезе в 1959 году. [17] [18] Он обладает несколькими электрофоретически желательными свойствами, которые делают его универсальной средой. . Это синтетический, термостойкий, прозрачный, прочный, химически относительно инертный гель, который может быть приготовлен с широким диапазоном средних размеров пор. [19]Размер пор геля и воспроизводимость размера пор геля определяются тремя факторами: общим количеством присутствующего акриламида (% T) (T = общая концентрация мономера акриламида и бисакриламида), количеством сшивающего агента (% C ) (C = концентрация бисакриламида) и время полимеризации акриламида (см. QPNC-PAGE). Размер пор уменьшается с увеличением% T; при сшивании 5% C дает наименьший размер пор. Любое увеличение или уменьшение% C от 5% увеличивает размер пор, поскольку размер пор по отношению к% C является параболической функцией с вершиной, равной 5% C. По всей видимости, это происходит из-за неоднородного связывания полимерных нитей в геле. Этот гелевый материал также может выдерживать высокое напряжение.градиенты, поддается различным процедурам окрашивания и обесцвечивания и может быть переварен для извлечения разделенных фракций или высушен для авторадиографии и постоянной записи.

Компоненты [ править ]

Полиакриламидные гели состоят из геля для укладки и разделяющего геля. Укладывающиеся гели имеют более высокую пористость по сравнению с разделяющим гелем и позволяют белкам перемещаться в концентрированной области. Кроме того, штабелируемые гели обычно имеют pH 6,8, поскольку нейтральные молекулы глицина обеспечивают более быструю подвижность белка. Разделительные гели имеют pH 8,8, где анионный глицин замедляет подвижность белков. Разделительные гели позволяют разделить белки и имеют относительно более низкую пористость. Здесь белки разделены на основе размера (в SDS-PAGE) и размера / заряда (Native PAGE). [20]

Химический буфер стабилизирует значение pH до желаемого значения в самом геле и в буфере для электрофореза. Выбор буфера также влияет на электрофоретическую подвижность буферных противоионов и, следовательно, на разрешение геля. Буфер также должен быть инертным, не модифицировать и не реагировать с большинством белков. В зависимости от области применения в качестве катодного и анодного буферов могут использоваться разные буферы соответственно. В одном геле можно использовать несколько значений pH, например, в DISC-электрофорезе. Общие буферы в PAGE включают Трис , Бис-Трис или имидазол .

Противоионы уравновешивают собственный заряд буферного иона, а также влияют на напряженность электрического поля во время электрофореза. В катодных буферах SDS-PAGE часто избегают высокозаряженных и подвижных ионов, но они могут быть включены в сам гель, где он перемещается впереди белка. В таких приложениях, как DISC SDS-PAGE, значения pH в геле могут изменяться, чтобы изменить средний заряд противоионов во время анализа, чтобы улучшить разрешение. Популярные противоионы - глицин и трицин . Глицин использовался в качестве источника замыкающего иона или медленного иона, потому что его pKa составляет 9,69, а подвижность глицината такова, что эффективная подвижность может быть установлена ​​на значение ниже, чем у самых медленных известных белков с чистым отрицательным зарядом.в диапазоне pH. Минимальный pH в этом диапазоне составляет приблизительно 8,0.

Акриламид ( C
3ЧАС
5НЕТ ; мВт: 71,08) при растворении в воде, медленно, спонтанная автоматическая полимеризация акриламида происходит, соединяя молекулу вместе с головой на хвост моде , чтобы сформировать длинные одноцепочечные полимеры. Наличие системы, генерирующей свободные радикалы, значительно ускоряет полимеризацию. Этот вид реакции известен как полимеризация присоединением винила . Раствор этих полимерных цепей становится вязким, но не образует гель, потому что цепи просто скользят друг по другу. Для образования геля необходимо соединить вместе различные цепи. Акриламид канцерогенный , [21] нейротоксин , и репродуктивный токсин. [22]Также важно хранить акриламид в прохладном темном и сухом месте, чтобы уменьшить автополимеризацию и гидролиз .

Бисакриламид ( N , N '-метиленбисакриламид ) ( C
7ЧАС
10N
2О
2; mW: 154,17) является наиболее часто используемым сшивающим агентом для полиакриламидных гелей. Химически это можно представить как две молекулы акриламида, соединенные головой к голове своими нереактивными концами. Бисакриламид может сшивать две полиакриламидные цепи друг с другом, в результате чего получается гель.

Додецилсульфат натрия (SDS) ( C
12ЧАС
25NaO
4S ; mW: 288,38) (используется только в денатурирующих белковых гелях) является сильным детергентным агентом, используемым для денатурирования нативных белков до индивидуальных полипептидов . Эта денатурация, которая называется реконструктивной денатурацией, достигается не за счет полной линеаризации белка, а за счет конформационного изменения комбинации случайной спирали и вторичных структур α-спирали. [6] Когда белковая смесь нагревается до 100 ° C в присутствии SDS, моющее средствооборачивается вокруг основы полипептида. Он связывается с полипептидами при постоянном весовом соотношении 1,4 г SDS / г полипептида. В этом процессе внутренние заряды полипептидов становятся незначительными по сравнению с отрицательными зарядами, вносимыми SDS. Таким образом, полипептиды после обработки становятся стержневидными структурами, обладающими однородной плотностью заряда, то есть таким же чистым отрицательным зарядом на единицу веса. Электрофоретическая подвижность этих белков является линейной функцией логарифмов их молекулярных масс. Без SDS разные белки с одинаковыми молекулярными массами мигрировали бы по-разному из-за различий в соотношении массы и заряда, поскольку каждый белок имеет изоэлектрическую точку и молекулярную массу, характерные для его первичной структуры . Это известно какРодная СТРАНИЦА . Добавление SDS решает эту проблему, поскольку он связывается с белком и разворачивает его, обеспечивая почти однородный отрицательный заряд по всей длине полипептида.

Мочевина ( CO (NH
2)
2; мВт: 60,06) представляет собой хаотропный агент, который увеличивает энтропию системы, препятствуя внутримолекулярным взаимодействиям, опосредованным нековалентными силами, такими как водородные связи и силы Ван-дер-Ваальса . Структура макромолекул зависит от суммарного воздействия этих сил, поэтому следует, что увеличение хаотропных растворенных веществ денатурирует макромолекулы,

Персульфат аммония (APS) ( N
2ЧАС
8S
2О
8; mW: 228,2) является источником свободных радикалов и часто используется в качестве инициатора гелеобразования. Альтернативным источником свободных радикалов является рибофлавин , образующий свободные радикалы в фотохимической реакции.

ТЕМЕД ( N , N , N ', N ' -тетраметилэтилендиамин) ( C
6ЧАС
16N
2; mW: 116.21) стабилизирует свободные радикалы и улучшает полимеризацию. Скорость полимеризации и свойства получаемого геля зависят от концентрации свободных радикалов. Увеличение количества свободных радикалов приводит к уменьшению средней длины полимерной цепи, увеличению мутности геля и снижению эластичности геля. Уменьшение количества показывает обратный эффект. Следует использовать самые низкие каталитические концентрации, которые позволяют проводить полимеризацию за разумный период времени. APS и TEMED обычно используются примерно в эквимолярных концентрациях в диапазоне от 1 до 10 мМ.

Химикаты для обработки и визуализации [ править ]

СТРАНИЦА белков ротавируса, окрашенных кумасси синим

Следующие химические вещества и процедуры используются для обработки геля и визуализированных в нем образцов белка.

Следящий краситель; поскольку белки и нуклеиновые кислоты в основном бесцветны, их прохождение через гель во время электрофореза нелегко проследить. Поэтому в буфер для образца для ПААГ обычно включаются анионные красители с известной электрофоретической подвижностью. Очень распространенный следящий краситель - это бромфеноловый синий (BPB, 3 ', 3 ", 5', 5" тетрабромфенолсульфонфталеин). Этот краситель окрашен при щелочном и нейтральном pH и представляет собой небольшую отрицательно заряженную молекулу, которая движется к аноду . Будучи высокомобильной молекулой, он опережает большинство белков. По достижении анодного конца среды для электрофореза электрофорез останавливают. Он может слабо связываться с некоторыми белками и придавать синий цвет. Другие распространенные трекинговые красители - ксилолцианол., обладающий меньшей мобильностью, и Orange G , обладающий большей мобильностью.

Погрузочные средства; большинство систем PAGE загружают сверху в лунки геля. Чтобы гарантировать, что образец опускается на дно геля, буфер для образца дополняется добавками, которые увеличивают плотность образца. Эти добавки должны быть неионными и инертными по отношению к белкам, чтобы не мешать электрофорезу. Обычные добавки - глицерин и сахароза .

Кумасси бриллиантовый синий R-250 (CBB) ( C
45ЧАС
44 годN
3NaO
7S
2; мВт: 825,97) является наиболее популярным белковым красителем. Это анионный краситель, который неспецифически связывается с белками. Структура CBB преимущественно неполярная, и он обычно используется в метанольном растворе, подкисленном уксусной кислотой. Белки в геле фиксируются уксусной кислотой и одновременно окрашиваются. Избыток красителя, включенного в гель, можно удалить, обесцвечивая тем же раствором без красителя. Белки обнаруживаются в виде синих полос на прозрачном фоне. Поскольку SDS также является анионным, он может мешать процессу окрашивания. Поэтому рекомендуется большой объем окрашивающего раствора, по крайней мере, в десять раз превышающий объем геля.

Бромид этидия (EtBr) является популярным красителем нуклеиновых кислот. EtBr позволяет легко визуализировать ДНК или РНК на геле, поскольку EtBr флуоресцирует оранжевым цветом в УФ-свете. [23] Бромид этидия связывает цепи нуклеиновых кислот в процессе интеркаляции. [3] Хотя этидий бромид является популярным красителем, важно соблюдать осторожность при использовании EtBr, поскольку он является известным канцерогеном . Из-за этого многие исследователи предпочитают использовать красители, такие как SYBR Green и SYBR Safe, которые являются более безопасными альтернативами EtBr. [24] EtBr используется простым добавлением его в гелевую смесь. После того, как гель растекся, гель можно просмотреть с помощью системы фотодокументации. [3]

Окрашивание серебром используется, когда требуется более чувствительный метод обнаружения, поскольку при классическом окрашивании кумасси бриллиантовым синим обычно можно обнаружить полосу белка 50 нг, окрашивание серебром увеличивает чувствительность, как правило, в 10–100 раз. Это основано на химии фотографического развития. Белки фиксируются на геле разбавленным раствором метанола, затем инкубируются с кислым раствором нитрата серебра. Ионы серебра восстанавливаются до своей металлической формы формальдегидом при щелочном pH. Кислый раствор, например уксусная кислота, останавливает развитие. [25] Окрашивание серебром было введено Кереньи и Галлясом в качестве чувствительной процедуры для обнаружения следовых количеств белков в гелях . [26] Метод был распространен на изучение других биологическихмакромолекулы , которые были разделены на различных носителях. [27] Многие переменные могут влиять на интенсивность окраски, и каждый белок имеет свои собственные характеристики окрашивания; чистая стеклянная посуда, чистые реактивы и вода высшей степени чистоты - залог успешного окрашивания. [28] Окрашивание серебром было разработано в 14 веке для окрашивания поверхности стекла. Он широко использовался для этой цели с 16 века. Цвет ранних серебряных пятен варьировался от светло-желтого до оранжево-красного. Камилло Гольджи усовершенствовал окрашивание серебром для исследования нервной системы . Метод Гольджиокрашивает ограниченное количество клеток случайным образом полностью. [29]

Авторадиография, также используемая для обнаружения полос белка после гель-электрофореза, использует радиоактивные изотопы для маркировки белков, которые затем обнаруживаются с помощью рентгеновской пленки. [30]

Вестерн-блоттинг - это процесс, с помощью которого белки, разделенные в акриламидном геле, электрофоретически переносятся на стабильную, управляемую мембрану, такую ​​как мембрана из нитроцеллюлозы , нейлона или ПВДФ . Затем можно применять иммунохимические методы для визуализации перенесенных белков, а также точно идентифицировать относительное увеличение или уменьшение представляющего интерес белка.

См. Также [ править ]

  • Электрофорез в агарозном геле
  • Капиллярный электрофорез
  • Электрофорез ДНК
  • Восточный блоттинг
  • Электроблоттинг
  • Быстрый параллельный протеолиз (FASTpp) [31]
  • История электрофореза
  • Изоэлектрическая фокусировка
  • Изотахофорез
  • Нативный гель-электрофорез
  • Нозерн-блоттинг
  • Белковый электрофорез
  • Саузерн-блоттинг
  • Двумерный SDS-PAGE
  • Зимография

Ссылки [ править ]

  1. ^ Петров А, Ца А, Puglisi JD (2013). «Глава шестнадцатая - Анализ РНК с помощью аналитического электрофореза в полиакриламидном геле». В Lorsch J (ред.). Методы в энзимологии . 530 . Академическая пресса. С. 301–313. DOI : 10.1016 / B978-0-12-420037-1.00016-6 . ISBN 978-0-12-420037-1. PMID  24034328 .
  2. ^ а б Редакторы Энциклопедии Британника (2017). «Полиакриламид» . Britannica Online Academic Edition . Энциклопедия Britannica , Inc.
  3. ^ Б с д е е г Ninfa AJ, Балл DP, Benore M (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии (2-е изд.). Хобокен, Нью-Джерси: ISBN John Wiley & Sons, Inc. 978-0-470-08766-4. OCLC  420027217 .
  4. ^ Kindt Т, Goldsby Р, Осборн В (2007). Кубы Иммунология . Нью-Йорк: WH Freeman and Company. п. 553. ISBN 978-1-4292-0211-4.
  5. ^ Kumar A, Awasthi A (2009). Биосепарационная инженерия . Нью-Дели: Международный издательский дом IK. п. 137. ISBN 9789380026084.
  6. ^ a b Rath A, Glibowicka M, Nadeau VG, et al. (2009). «Связывание детергента объясняет аномальную миграцию мембранных белков в SDS-PAGE» . Proc. Natl. Акад. Sci. США 106 (6): 1760–5. Bibcode : 2009PNAS..106.1760R . DOI : 10.1073 / pnas.0813167106 . PMC 2644111 . PMID 19181854 .   
  7. ^ Шапиро А.Л., Виньуэла E, Майзель JV - младший (1967). «Оценка молекулярной массы полипептидных цепей с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидных гелях». Biochem. Биофиз. Res. Commun. 28 (5): 815–20. DOI : 10.1016 / 0006-291X (67) 90391-9 . PMID 4861258 .  
  8. Перейти ↑ Weber K, Osborn M (1969). «Надежность определения молекулярной массы электрофорезом в додецилсульфат-полиакриламидном геле». J Biol Chem . 244 (16): 4406–12. PMID 5806584 . 
  9. ^ a b Laemmli UK (1970). «Расщепление структурных белков при сборке головки бактериофага Т4». Природа . 227 (5259): 680–5. Bibcode : 1970Natur.227..680L . DOI : 10.1038 / 227680a0 . PMID 5432063 . 
  10. ^ Caprette DR. "SDS-СТРАНИЦА" . Экспериментальные биологические науки . Проверено 27 сентября 2009 года .
  11. ^ "Что означает дегазация смеси акриламидного геля?" . Протокол онлайн . 2006 . Проверено 28 сентября 2009 года .
  12. ^ "СТРАНИЦА SDS" . Архивировано из оригинального 20 февраля 2014 года . Проверено 12 сентября 2009 года .
  13. ^ Рухель R, Стир RL, Erbe EF (1978). "Наблюдения с помощью просвечивающей электронной микроскопии замороженных полиакриламидных гелей". J. Chromatogr. . 166 (2): 563–575. DOI : 10.1016 / S0021-9673 (00) 95641-3 .
  14. ^ Schägger Н, фон Яги G (1987). «Электрофорез в трицин-додецилсульфат-полиакриламидном геле для разделения белков в диапазоне от 1 до 100 кДа». Анальный. Биохим. 166 (2): 368–379. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (87) 90587-2 . PMID 2449095 .  
  15. ^ Ancrews D (2007). "SDS-СТРАНИЦА" . Andrews Lab . Архивировано из оригинального 2 -го июля 2017 года . Проверено 27 сентября 2009 года .
  16. ^ Quandt Н, Штиндль А, Келлер U (1993). «Электрофорез в геле с додецилсульфатом и полиакриламидом натрия для оценки высокомолекулярных полипептидов с помощью МР». Анальный. Биохим. 214 (2): 490–494. DOI : 10.1006 / abio.1993.1527 . PMID 8109738 .  
  17. ^ Дэвис BJ, Орнштейн L (1959). «Новый метод электрофореза высокого разрешения». Поставляется в Обществе изучения крови Медицинской академии Нью-Йорка .
  18. Перейти ↑ Raymond S, Weintraub L (1959). «Акриламидный гель как поддерживающая среда для зонного электрофореза». Наука . 130 (3377): 711. Bibcode : 1959Sci ... 130..711R . DOI : 10.1126 / science.130.3377.711 . PMID 14436634 . 
  19. ^ Рухель R, Стир RL, Erbe EF (1978). "Наблюдения с помощью просвечивающей электронной микроскопии замороженных полиакриламидных гелей". J. Chromatogr. . 166 (2): 563–75. DOI : 10.1016 / S0021-9673 (00) 95641-3 .
  20. ^ Duchesne LG, Lam JS, MacDonald LA и др. (1988). «Влияние pH и концентрации акриламида на разделение липополисахаридов в полиакриламидных гелях». Современная микробиология . 16 (4): 191–4. DOI : 10.1007 / BF01568528 .
  21. ^ Tareke E, Rydberg P, Eriksson S, et al. (2000). «Акриламид: кулинарный канцероген?». Chem. Res. Toxicol. 13 (6): 517–22. DOI : 10.1021 / tx9901938 . PMID 10858325 .  
  22. ^ LoPachin R (2004). «Меняющийся взгляд на нейротоксичность акриламида». Нейротоксикология . 25 (4): 617–30. DOI : 10.1016 / j.neuro.2004.01.004 . PMID 15183015 . 
  23. ^ Sabnis RW (2010). Справочник биологических красителей и красителей: синтез и промышленное применение . Хобокен, Нью-Джерси: Уайли-Блэквелл. ISBN 978-0-470-40753-0. OCLC  647922579 .
  24. Перейти ↑ Singer VL, Lawlor TE, Yue S (1999). «Сравнение мутагенности геля, окрашивающего нуклеиновую кислоту SYBR Green I, и мутагенности бромистого этидия в анализе обратной мутации сальмонелл / микросом млекопитающих (тест Эймса)». Мутат. Res. 439 (1): 37–47. DOI : 10.1016 / s1383-5718 (98) 00172-7 . PMID 10029672 .  
  25. ^ Ninfa AJ, Балл DP (2004). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Хобокен, Нью-Джерси: Wiley & Sons. ISBN 978-1-891786-00-6. OCLC  633862582 .
  26. ^ Кереньи L, Gallyas F (1973). "Über Probleme der Quantitiven Auswertung der mit Physikalischer Entwicklung versilberten Agarelektrophoretogramme". Clin. Чим. Acta . 47 (3): 425–436. DOI : 10.1016 / 0009-8981 (73) 90276-3 . PMID 4744834 . 
  27. ^ Switzer RC третьих, Меррил CR, Шифрин S (1979). «Высокочувствительный серебряный краситель для обнаружения белков и пептидов в полиакриламидных гелях». Анальный. Биохим. 98 (1): 231–7. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (79) 90732-2 . PMID 94518 .  
  28. ^ Hempelmann Е, Шульц М, Гетце О (1984). «Свободные SH-группы важны для полихроматического окрашивания белков нитратом серебра». В Neuhof V (ред.). Электрофорез '84 . Weinheim: Verlag Chemie. С. 328–30.
  29. ^ Грант G (2007). «Как Нобелевская премия по физиологии и медицине 1906 года была разделена между Гольджи и Кахалем». Brain Res Rev . 55 (2): 490–8. DOI : 10.1016 / j.brainresrev.2006.11.004 . PMID 17306375 . 
  30. Перейти ↑ Song D, Ma S, Khor SP (2002). «Гель-электрофорез-авторадиографический анализ изображений концентрации радиоактивно меченого белкового лекарственного средства в сыворотке для фармакокинетических исследований». Журнал фармакологических и токсикологических методов . 47 (1): 59–66. DOI : 10.1016 / s1056-8719 (02) 00203-4 . PMID 12387940 . 
  31. ^ Minde DP (2012). «Определение биофизической стабильности белков в лизатах с помощью анализа быстрого протеолиза, FASTpp» . PLOS One . 7 (10): e46147. Bibcode : 2012PLoSO ... 746147M . DOI : 10.1371 / journal.pone.0046147 . PMC 3463568 . PMID 23056252 .  

Внешние ссылки [ править ]

Ресурсы библиотеки по
электрофорезу в полиакриламидном геле
  • Ресурсы в вашей библиотеке
  • Ресурсы в других библиотеках
  • SDS-PAGE: как это работает
  • Демистификация SDS-PAGE Video
  • Демистификация SDS-PAGE
  • SDS-PAGE Калькулятор для индивидуальных рецептов гелей TRIS Urea.
  • Двумерный белковый гелэлектрофорез
  • [1] Хемпельманн Э. SDS-белок в ПААГ и определение белков с помощью окрашивания серебром и иммуноблоттинга белков Plasmodium falciparum. в: Moll K, Ljungström J, Perlmann H, Scherf A, Wahlgren M (eds) Methods in Malaria Research, 5th edition, 2008, 263-266.