Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску

QPNC-PAGE , или количественный препаративный непрерывный электрофорез в полиакриламидном геле , представляет собой биоаналитический метод с высоким разрешением и высокой точностью , применяемый в биохимии и биоинорганической химии для количественного разделения белков по изоэлектрической точке . Этот стандартизированный вариант электрофореза в нативном геле используется биологами для выделения биомакромолекул в растворе, например, активных или природных металлопротеинов в биологических образцах или правильно и неправильно свернутого металлического кофактора.-содержащие белки или изоформы белков в сложных белковых смесях . [1]

Введение [ править ]

Белки выполняют несколько функций в живых организмах , включая каталитические реакции и транспорт молекул или ионов внутри клеток , органов или всего тела . Понимание процессов в человеческих организмах, которые в основном обусловлены биохимическими реакциями и белок-белковыми взаимодействиями , в значительной степени зависит от нашей способности выделять активные белки в биологических образцах для более детального изучения химической структуры и физиологических функций. Эта важная информацияможет означать важный показатель состояния здоровья пациента . [2]

Поскольку около 30-40% всех известных белков содержат один или несколько кофакторов ионов металлов (например, церулоплазмин , ферритин , белок-предшественник амилоида , матриксная металлопротеиназа ), особенно нативные металлопротеины должны быть выделены, идентифицированы и количественно определены после жидкостной биопсии . Многие из этих кофакторов (например, железо , медь или цинк ) играют ключевую роль в жизненно важных ферментативных каталитических процессах или стабилизируют глобулярные белковые молекулы. [3] Таким образом, высокоточный электрофорез и другие родные разделенияЭти методы очень важны в качестве начального этапа анализа состава белков и следов металлов, за которым следуют масс-спектрометрические и магнитно-резонансные методы для количественного определения и идентификации представляющих интерес растворимых белков. [4]

Метод [ править ]

Механизмы разделения и буферизации [ править ]

Оборудование для аналитического электрофореза: камера электрофореза, перистальтический насос, коллектор фракций, буферный рециркуляционный насос и УФ-детектор (в холодильнике), блок питания и регистратор (на столе).

В гель-электрофорезе белки обычно разделяются по заряду , размеру или форме . Целью изоэлектрического фокусирования (IEF), например, является разделение белков в соответствии с их изоэлектрической точкой (pI), то есть в соответствии с их зарядом при различных значениях pH . [5] Здесь тот же механизм реализуется в коммерчески доступной камере для электрофореза (см. Рисунок « Оборудование» ) для разделения заряженных биомолекул , например, супероксиддисмутазы (SOD) [6] или аллергенов , [7]в условиях постоянного pH и разных скоростей миграции в зависимости от разных изоэлектрических точек. Разделенные (металлические) белки элюируются последовательно, начиная с самого низкого (pI> 2-4) и заканчивая самым высоким pI (pI <10,0) присутствующих белковых молекул.

Из - за специфических свойств приготовленного геля и электрофорез буферного раствора (который является основным и содержит трис - HCl и NaN 3 ), большинство белков в биологической системе (например, Helicobacter Pylori [8] ) заряжены отрицательно в растворе, и будет мигрировать от катода к аноду под действием электрического поля . На аноде электрохимически генерированные ионы водорода реагируют с молекулами Трис с образованием одновалентныхТрис-ионы. Положительно заряженные ионы трис мигрируют через гель к катоду, где они нейтрализуют ионы гидроксида с образованием молекул трис и воды . Таким образом, буферный механизм на основе Триса обеспечивает постоянный pH в буферной системе. [9] При 25 ° C Трис-буфер имеет эффективный диапазон pH от 7,5 до 9,0. В условиях, приведенных здесь (с учетом концентрации, механизма буферизации, pH и температуры), эффективный pH смещается в диапазоне примерно от 10,0 до 10,5. Все природные буферные системы имеют низкую проводимость и диапазон pH от 3,8 до 10,2. Для разделения белков в соответствии с их pI используются непрерывные нативные буферные системы. [10]

Хотя значение pH (10,00) буфера для электрофореза не соответствует физиологическому значению pH в пределах типа клетки или ткани , разделенные кольцеобразные белковые полосы непрерывно элюируются физиологическим буферным раствором (pH 8,00) и выделяются в различных фракциях. (см. рисунок Электрофореграмма ). [11] При условии, что необратимая денатурация не может быть продемонстрирована (независимой процедурой), большинство белковых молекул стабильны в водном растворе при значениях pH от 3 до 10, если температура ниже 50 ° C. [12] Поскольку Джоулева тепло и температура, генерируемые во время электрофореза, могут превышать 50 ° C, [13]и, таким образом, оказывают негативное влияние на стабильность и поведение белков при миграции, система разделения, включая камеру для электрофореза и коллектор фракций, охлаждается в холодильнике до 4 ° C. Перегреву геля препятствует внутреннее охлаждение гелевой колонки и выработка постоянной мощности (см. Рисунок « Оборудование» ).

Свойства геля и время полимеризации [ править ]

Наилучшие условия полимеризации акриламидных гелей достигаются при 25-30 ° C [14], и полимеризация, кажется, прекращается через 20-30 мин реакции, хотя по истечении этого времени обнаруживаются остаточные мономеры (10-30%). [15] Сополимеризация мономера акриламида (AA) / сшивающего агента N, N'-метиленбисакриламида (Bis-AA), инициированная реакциями персульфата аммония (APS) / тетраметилэтилендиамина (TEMED), наиболее эффективна при щелочном pH. Таким образом, акриламидные цепи образуются и сшиваются одновременно. Благодаря свойствам буфера для электрофореза полимеризация геля проводится при pH 10,00, обеспечивая эффективное использование TEMED и APS в качестве катализаторов.реакции полимеризации, и одновременно подавление конкурентного гидролиза полученной полимерной сетки акриламида . В противном случае белки могут быть модифицированы реакцией с неполимеризованными мономерами акриламида, образуя продукты ковалентного присоединения акриламида, которые могут привести к появлению нескольких полос. [16]

Кроме того, время полимеризации геля может напрямую влиять на время пика элюции разделенных металлопротеинов на электрофореграмме из-за сжатия и расширения гелей и их пор с более длительным временем инкубации (см. Рисунок Электрофореграмма , см. Воспроизводимость и восстановление ). Чтобы гарантировать максимальную воспроизводимость размера пор геля и получить полностью полимеризованный и неограничивающий гель с большими порами для анализа PAGE, полиакриламидный гель полимеризуется в течение периода времени 69 часов при комнатной температуре (RT). Экзотермическое тепло , генерируемое в процессах полимеризации в рассеиваетсяпостоянно, в то время как температура может быстро подняться до более чем 75 ° C в первые минуты, после чего медленно падает. [17] Через 69 часов гель достиг комнатной температуры и, таким образом, находится в самом низком энергетическом состоянии, поскольку химические реакции и гелеобразование прекращаются. Гелеобразование означает, что растворитель (вода) иммобилизуется внутри полимерной сетки за счет водородных связей, а также сил Ван-дер-Ваальса . В результате приготовленный гель является гомогенным (с точки зрения гомогенного распределения поперечных связей в образце геля [18] ), стабильным по своей природе и свободным от мономеров или радикалов . Свежие полиакриламидные гели дополнительногидрофильны , электрически нейтральны и не связывают белки. [19] эффекты Рассев за счет силы тяжести индуцированного сжатия геля может быть исключен по тем же причинам. В среде без свойств молекулярного сита можно ожидать высокого разрешения. [20]

Перед началом электрофоретического прогона предварительно прогоняют приготовленный гель с 4% Т (общее содержание полимера (Т)), 2,67% С (концентрация сшивающего агента (С)) для его уравновешивания. Он по существу не просеивает и оптимален для электрофореза белков, превышающих или равных 200 ku (см. Электрофорез в агарозном геле ). Белки мигрируют в нем более или менее на основе их свободной подвижности. [21] По этим причинам взаимодействия геля с биомолекулами пренебрежимо низкие, и, таким образом, белки разделяются чисто и предсказуемо при времени полимеризации 69 часов (см. Рисунок Электрофореграмма ). Разделенные металлопротеины, включая биомолекулы в диапазоне от примерно <1 ku до более 30 ku (например, металлшапероны , прионы , металлические транспортные белки, амилоиды , металлоэнзима, металлопротеаза пептиды , металлотионеин , фитохелатины ) не диссоциируют на апопротеины и металлические кофакторы. [22]

Воспроизводимость и восстановление [ править ]

Электрофореграмма, показывающая четыре прогона PAGE нативного предварительно очищенного хроматографически высокомолекулярного белка кадмия (≈ 200 ku) в зависимости от времени полимеризации геля (4% T, 2,67% C). Метод определения кофакторов Cd (в мкг / л): GF-AAS

Биоактивные структуры (нативная или трехмерная конформация или форма) изолированных белковых молекул не претерпевают каких-либо значительных конформационных изменений . Таким образом, белки, содержащие активный металлический кофактор, могут быть выделены воспроизводимо в тех же фракциях после анализа в ПААГ (см. Рисунок « Электрофореграмма» ). Сдвиг пика на соответствующей электрофореграмме может указывать на то, что стандартизованное время полимеризации геля (69 часов, RT) не реализуется в эксперименте PAGE . Более низкое отклонение стандартизованного времени полимеризации (<69 часов) означает неполную полимеризацию и, таким образом, внутреннюю нестабильность из-за размягчения геля во время сшивания полимеров, когда материал достигает равновесия набухания, [23]тогда как превышение этого срока (> 69 часов) является показателем старения геля. [24] Явление старения геля тесно связано с длительным снижением вязкости водных растворов полиакриламида [25] и повышенным набуханием гидрогелей. [26]

В стандартных условиях (69 часов) металлопротеины с различными диапазонами молекулярной массы и изоэлектрическими точками были восстановлены в биологически активной форме с количественным выходом более 95%. [27] Путем препаративного электрофореза в полиакриламидном геле с SDS стандартные белки ( цитохром с , альдолаза , яичный альбумин и бычий сывороточный альбумин ) с молекулярными массами 14-66 ку могут быть извлечены со средним выходом около 73,6%. [28] Препаративный изотахофорез (ИТП) применяется для выделения палладийсодержащих белков с молекулярными массами 362 ку (выход 67%) и 158 ку (выход 97%).[29]

Количественная оценка и идентификация [ править ]

Физиологические концентрации ( диапазон частей на миллиард) Fe, Cu, Zn, Ni , Mo , Pd, Co , Mn , Pt , Cr , Cd и кофакторов других металлов могут быть идентифицированы и абсолютно количественно определены в аликвоте фракции с помощью массы индуктивно связанной плазмы. спектрометрия (ICP-MS) [30] или рентгеновская флуоресценция с полным отражением (TXRF), [31], например. В случае ICP-MS структурная информация связанных металлобиомолекул [32] необратимо теряется из-за ионизации образца сплазма . [33] Другим признанным высокочувствительным методом обнаружения (следовых) элементов является атомно-абсорбционная спектрометрия в графитовой печи (GF-AAS) (см. Рисунок Электрофореграмма ). [34] Из-за высокой чистоты и оптимизированной концентрации разделенных металлопротеинов, например, терапевтических рекомбинантных фармацевтических препаратов растительного происхождения, таких как медный шаперон для супероксиддисмутазы (CCS) из лекарственных растений , в нескольких конкретных фракциях PAGE, соответствующие структуры этих анализируемые вещества могут быть выяснены количественно с помощью спектроскопии ЯМР в растворе. в неденатурирующих условиях. [35]

Приложения [ править ]

Неправильно свернутые металлические белки, например CCS или Cu / Zn-супероксиддисмутаза (SOD1), присутствующие в головном мозге , крови или других клинических образцах, указывают на нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера (AD) или боковой амиотрофический склероз (ALS). [36] Активные молекулы CCS или SOD способствуют внутриклеточному гомеостатическому контролю ионов основных металлов (например, Cu 1 + / 2 + , Zn 2+ , Fe 2 + / 3 + , Mn 2+ , Ni 3+ ) в организмах, и Таким образом, эти биомолекулы могут сбалансировать про- окислительныхи антиоксидантные процессы в цитоплазме . В противном случае свободные (слабо связанные) ионы переходных металлов принимают участие в реакциях, подобных Фентону, в которых образуется вредный гидроксильный радикал , который без ограничения может быть разрушительным для белков. [37] Потеря (активного) CCS увеличивает продукцию амилоида-β в нейронах, что, в свою очередь, является основным патологическим признаком БА. [38] Таким образом, предполагается, что шаперон меди для супероксиддисмутазы является одним из наиболее многообещающих биомаркеров токсичности меди при этих заболеваниях. [39] CCS следует анализировать в первую очередь в крови, потому чтомета-анализ из сыворотки данных показал , что пациенты AD имеют более высокие уровни сыворотки Cu , чем у здоровых контролей. [40]

См. Также [ править ]

  • Электрофорез
  • Гель-электрофорез
  • Белковый электрофорез
  • Очистка белков
  • Металлом

Ссылки [ править ]

  1. ^ Seelert H, Krause F (2008). «Препаративное выделение белковых комплексов и других биочастиц путем элюирования из полиакриламидных гелей». Электрофорез . 29 (12): 2617–36. DOI : 10.1002 / elps.200800061 . PMID  18494038 . S2CID  35874355 .
  2. Перейти ↑ Swart C, Jakubowski N (2016). «Обновление состояния метрологии металлопротеинов» . Журнал аналитической атомной спектрометрии . 31 (9): 1756–65. DOI : 10.1039 / C6JA00181E .
  3. Перейти ↑ Finney LA, O'Halloran TV (2003). «Переходные металлы в клетке: выводы из химии рецепторов ионов металлов» . Наука . 300 (5621): 931–6. Bibcode : 2003Sci ... 300..931F . DOI : 10.1126 / science.1085049 . PMID 12738850 . S2CID 14863354 .  
  4. ^ Cerchiaro G, Manieri TM, Bertuchi FR (2013). «Аналитические методы количественного определения меди, цинка и железа в клетках млекопитающих». Металломика . 5 (10): 1336–45. DOI : 10.1039 / c3mt00136a . PMID 23925479 . 
  5. ^ Garfin DE (1990). Изоэлектрическая фокусировка . Методы в энзимологии . 182 . С. 459–77. DOI : 10.1016 / 0076-6879 (90) 82037-3 . ISBN 9780121820831. PMID  2314254 .
  6. Перейти ↑ Youn HD, Kim EJ, Roe JH, Hah YC, Kang SO (1996). «Новая никельсодержащая супероксиддисмутаза из Streptomyces spp» . Биохимический журнал . 318 (Pt 3): 889–96. DOI : 10.1042 / bj3180889 . PMC 1217701 . PMID 8836134 .  
  7. ^ Suck R, Petersen A, B, Weber Фибиг H, O Cromwell (2004). «Аналитический и препаративный электрофорез в нативном полиакриламидном геле: исследование рекомбинантного и природного основного аллергена пыльцы трав Phl p 2». Электрофорез . 25 (1): 14–9. DOI : 10.1002 / elps.200305697 . PMID 14730563 . S2CID 20585733 .  
  8. ↑ Bae SH, Harris AG, Hains PG, Chen H, Garfin DE, Hazell SL, Paik YK, Walsh BJ, Cordwell SJ (2003). «Стратегии обогащения и идентификации основных белков в протеомных проектах» . Протеомика . 3 (5): 569–79. DOI : 10.1002 / pmic.200300392 . PMID 12748937 . S2CID 26482563 .  
  9. ^ Kastenholz B (2006). «Сравнение электрохимического поведения высокомолекулярных белков кадмия в Arabidopsis thaliana и овощных растениях при использовании препаративного нативного непрерывного электрофореза в полиакриламидном геле (PNC-PAGE)». Электроанализ . 18 (1): 103–6. DOI : 10.1002 / elan.200403344 .
  10. Перейти ↑ McLellan T (1982). «Буферы для электрофореза полиакриламидных гелей при различных значениях pH». Аналитическая биохимия . 126 (1): 94–9. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (82) 90113-0 . PMID 7181120 . 
  11. ^ Kastenholz B, Garfin DE (2010). «Выделение кислых, основных и нейтральных металлопротеинов с помощью QPNC-PAGE» . Природа : 1–4. DOI : 10.1038 / npre.2010.4617.1 .
  12. ^ Гордон AH (1969). Электрофорез белков в полиакриламидных и крахмальных гелях (Часть I, Глава 2 Акриламидный гель) . Лабораторные методы в биохимии и молекулярной биологии . 1 . С. 34–45. DOI : 10.1016 / S0075-7535 (08) 70324-3 . ISBN 9780444533418.
  13. Перейти ↑ Woolley P (1987). «Термическая нестабильность гелей для электрофореза». Электрофорез . 8 (8): 339–45. DOI : 10.1002 / elps.1150080802 . S2CID 97116687 . 
  14. ^ Гелфи C, Ригетти PG (1981). «Кинетика полимеризации полиакриламидных гелей II. Влияние температуры». Электрофорез . 2 (4): 220–28. DOI : 10.1002 / elps.1150020405 . S2CID 93109120 . 
  15. ^ Chen B, Chrambach A (1979). «Оценка эффективности полимеризации при образовании полиакриламидного геля с использованием непрерывного оптического сканирования во время полимеризации». Журнал биохимических и биофизических методов . 1 (2): 105–16. DOI : 10.1016 / 0165-022X (79) 90017-4 . PMID 551105 . 
  16. Перейти ↑ Bonaventura C, Bonaventura J, Stevens R, Millington D (1994). «Акриламид в полиакриламидных гелях может модифицировать белки во время электрофореза». Аналитическая биохимия . 222 (1): 44–8. DOI : 10.1006 / abio.1994.1451 . PMID 7856869 . 
  17. Перейти ↑ Wheatley MA, Phillips CR (1983). «Температурные эффекты при полимеризации полиакриламидных гелей, используемых для иммобилизации бактериальных клеток». Биотехнология и биоинженерия . 25 (2): 623–6. DOI : 10.1002 / bit.260250228 . PMID 18548679 . 
  18. ^ Kizilay MY, Окей O (2003). «Влияние гидролиза на пространственную неоднородность полиакриламидных гелей различной плотности сшивки». Полимер . 44 (18): 5239–50. DOI : 10.1016 / S0032-3861 (03) 00494-4 .
  19. ^ Garfin DE (2009). «25-е ежегодное собрание Американского общества электрофореза» . Экспертный обзор протеомики . 6 (3): 239–41. DOI : 10.1586 / epr.09.18 . PMID 19489696 . S2CID 24490398 .  
  20. ^ Hjertén S (1963). « » Молекулярно-ситовой «электрофорез в сшитых гелей полиакриламида». Журнал хроматографии A . 11 : 66–70. DOI : 10.1016 / S0021-9673 (01) 80870-0 . PMID 13954823 . 
  21. ^ Garfin DE (2009) [1990]. «Глава 29 одномерный гель-электрофорез» . Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы в энзимологии . 463 . С. 497–513. DOI : 10.1016 / S0076-6879 (09) 63029-9 . ISBN 978-0-12-374536-1. PMID  19892189 .
  22. ^ Fitri N, Kastenholz B, Buchari B, Amran MB, Warganegara FM (2008). «Видообразование молибдена в сыром соке флоэмы клещевины». Аналитические письма . 41 (10): 1773–84. DOI : 10.1080 / 00032710802162442 . S2CID 95715133 . 
  23. ^ Damljanović В, LAGERHOLM до н.э., Якобсона К (2005). «Объемная и микропроцессорная конъюгация белков внеклеточного матрикса с охарактеризованными полиакриламидными субстратами для анализов механотрансдукции клеток» . Биотехнологии . 39 (6): 847–51. DOI : 10.2144 / 000112026 . PMID 16382902 . 
  24. ^ Стейскал Дж, Гордон М, Торкингтон JA (1980). «Распад полиакриламидных гелей». Полимерный бюллетень . 3 (11): 621–5. DOI : 10.1007 / BF01135333 . S2CID 98565268 . 
  25. ^ Kulicke WM, Kniewske R, Klein J (1982). «Приготовление, характеристика, свойства раствора и реологические свойства полиакриламида». Прогресс в науке о полимерах . 8 (4): 373–468. DOI : 10.1016 / 0079-6700 (82) 90004-1 .
  26. Перейти ↑ Yoon J, Cai S, Suo Z, Hayward RC (2010). «Кинетика пороупругого набухания тонких слоев гидрогеля: сравнение теории и эксперимента» . Мягкая материя . 6 (23): 6004–12. Bibcode : 2010SMat .... 6.6004Y . DOI : 10.1039 / C0SM00434K . S2CID 2867196 . 
  27. ^ Kastenholz B (2006). «Важный вклад новой процедуры количественного препаративного нативного непрерывного электрофореза в полиакриламидном геле (QPNC-PAGE) для выяснения метаболизма металлических кофакторов при заболеваниях, связанных с неправильной упаковкой белков - теория». Буквы о белках и пептидах . 13 (5): 503–8. DOI : 10.2174 / 092986606776819637 . PMID 16800806 . 
  28. ^ Ohhashi Т, Moritani С, Andoh Н, Сато S, S Ohmori, Lottspeich Ж, Икеда М (1991). «Препаративное электроэлюирование белков с высоким выходом после разделения электрофорезом в полиакриламидном геле на основе додецилсульфата натрия и его применение для анализа аминокислотных последовательностей и получения антител» . Журнал хроматографии . 585 (1): 153–9. DOI : 10.1016 / 0021-9673 (91) 85069-р . PMID 1666109 . 
  29. Перейти ↑ Weber G, Messerschmidt J, von Bohlen A, Kastenholz B, Günther K (2004). «Улучшенное разделение разновидностей палладия в биологических матрицах за счет использования комбинации гель-проникающей хроматографии и изотахофореза». Электрофорез . 25 (12): 1758–64. DOI : 10.1002 / elps.200305833 . PMID 15213973 . S2CID 22292130 .  
  30. ^ Rašovský P (2011). «Использование колоночного гель-электрофореза для онлайн-подключения к ICP-MS для металлопротеомики» . Архив диссертаций, Университет Масарика, Брно.
  31. ^ Pessanha S, Carvalho ML, Becker M, фон Болен A (2010). «Количественное определение тяжелых металлов на разных стадиях производства вина с помощью рентгеновской флуоресценции полного отражения и рентгеновской флуоресценции с дисперсией энергии: сравнение на двух виноградниках». Spectrochimica Acta Часть B Атомная спектроскопия . 65 (6): 504–7. Bibcode : 2010AcSpe..65..504P . DOI : 10.1016 / j.sab.2010.04.003 .
  32. ^ Якубовски N, Lobinski R, Moens L (2004). «Металлобиомолекулы. Основа жизни, проблема атомной спектроскопии» . Журнал аналитической атомной спектрометрии . 19 (1): 1–4. DOI : 10.1039 / B313299B .
  33. ^ Mounicou S, Szpunar Дж, Lobinski R (2009). «Металломика: понятие и методология». Обзоры химического общества . 38 (4): 1119–38. DOI : 10.1039 / B713633C . PMID 19421584 . 
  34. ^ Lin TW, Huang SD (2001). «Прямое и одновременное определение меди, хрома, алюминия и марганца в моче с помощью атомно-абсорбционного спектрометра с многоэлементной графитовой печью». Аналитическая химия . 73 (17): 4319–25. DOI : 10.1021 / ac010319h . PMID 11569826 . 
  35. ^ Kastenholz B, Garfin DE (2009). «Лекарственные растения: природный источник шаперонов для лечения неврологических расстройств». Буквы о белках и пептидах . 16 (2): 116–20. DOI : 10.2174 / 092986609787316234 . PMID 19200033 . 
  36. ^ Schümann K, Classen HG, Dieter HH, König J, Multhaup G, M Rükgauer, лето KH, Бернхард J, Biesalski HK (2002). «Мастерская консенсуса Хогенгейма: медь» . Европейский журнал клинического питания . 56 (6): 469–83. DOI : 10.1038 / sj.ejcn.1601315 . PMID 12032645 . 
  37. ^ Робинсон NJ, Winge DR (2010). «Металло-шапероны меди» . Ежегодный обзор биохимии . 79 : 537–62. DOI : 10.1146 / annurev-biochem-030409-143539 . PMC 3986808 . PMID 20205585 .  
  38. ^ Серый EH, De Vos KJ, Дингуолл C, Perkinton MS, Миллер CC (2010). «Дефицит медного шаперона для супероксиддисмутазы увеличивает производство амилоида-β» . Журнал болезни Альцгеймера . 21 (4): 1101–5. DOI : 10,3233 / JAD-2010-100717 . PMC 3023902 . PMID 20693630 .  
  39. Перейти ↑ Pal A (2014). «Токсичность меди, вызванная гепатоцеребральными и нейродегенеративными заболеваниями: острая необходимость в прогностических биомаркерах». Нейротоксикология . 40 : 97–101. DOI : 10.1016 / j.neuro.2013.12.001 . PMID 24342654 . 
  40. ^ Bucossi S, Ventriglia М, Панетта В, Salustri С, Паскуалетти Р, S Mariani, Siotto М, Россини ЛС, Squitti R (2011). «Медь при болезни Альцгеймера: метаанализ исследований сыворотки, плазмы и спинномозговой жидкости» . Журнал болезни Альцгеймера . 24 (1): 175–85. DOI : 10,3233 / JAD-2010-101473 . PMID 21187586 . S2CID 33194620 .  

Внешние ссылки [ править ]

  • Главы, посвященные 1-D / 2-D гель-электрофорезу и изоэлектрической фокусировке , предоставлены Учебным центром Общества электрофореза AES: Foci
  • Протоколы очистки белков от Еврейского университета в Иерусалиме