Субкультура (биология)

В биологии , субкультура новая клетка или микробиологические культуры производится путем передачи некоторых или всех клеток из предыдущей культуры в свежую среду роста . Это действие называется субкультивированием или пассированием клеток. Субкультура используется для продления жизни и / или увеличения количества клеток или микроорганизмов в культуре. ^[1]

Роль [ править ]

Клеточные линии и микроорганизмы не могут храниться в культуре бесконечно из-за постепенного увеличения токсичных метаболитов , использования питательных веществ и увеличения количества клеток из-за роста. Поэтому субкультура используется для получения новой культуры с более низкой плотностью клеток, чем в исходной культуре, свежими питательными веществами и отсутствием токсичных метаболитов, что позволяет продолжать рост клеток без риска гибели клеток. Субкультура важна как для пролиферирующих (например, таких микроорганизмов, как E. coli ), так и для непролиферирующих (например, окончательно дифференцированных лейкоцитов ) клеток.

Как правило, субкультура производится из культуры определенного объема в свежую питательную среду равного объема, что позволяет долгое время поддерживать линию клеток. Субкультуру в больший объем питательной среды используют, когда нужно увеличить количество клеток, например, для использования в промышленном процессе или научном эксперименте.

Номер прохода [ править ]

Часто важно записывать приблизительное количество делений клеток в культуре, записывая количество пассажей или субкультур. В случае клеток ткани растений сомаклональные вариации могут возникать в течение длительного периода в культуре. Точно так же в клеточных линиях млекопитающих хромосомные аберрации имеют тенденцию увеличиваться со временем. У микроорганизмов есть тенденция адаптироваться к условиям культивирования, которые редко в точности соответствуют естественной среде микроорганизмов, что может изменить их биологию.

Протоколы прохождения [ править ]

Протокол субкультивирования клеток сильно зависит от свойств участвующих клеток.

Неслипшиеся клетки [ править ]

Многие типы клеток, в частности, многие микроорганизмы, растут в растворе и не прикрепляются к поверхности. Эти типы клеток можно субкультивировать, просто взяв небольшой объем родительской культуры и разбавив его свежей питательной средой. Плотность клеток в этих культурах обычно измеряется в клетках на миллилитр для крупных эукариотических клеток или как оптическая плотность для 600 нм света для более мелких клеток, таких как бактерии. Клетки часто будут иметь предпочтительный диапазон плотностей для оптимального роста, и субкультивирование обычно будет пытаться удерживать клетки в этом диапазоне.

Слипшиеся клетки [ править ]

Прилипшие клетки, например многие линии клеток млекопитающих, растут прикрепленными к поверхности, такой как дно культуральной колбы . Эти типы клеток необходимо отделить от поверхности, прежде чем их можно будет субкультивировать. Для прикрепленных клеток плотность клеток обычно измеряется в терминах конфлюэнтности , процента ростовой поверхности, покрытой клетками. Клетки часто будут иметь предпочтительный диапазон конфлюэнтностей для оптимального роста, например, линии клеток млекопитающих, такие как HeLa или Raw 264.7, обычно предпочитают конфлюэнтности более 10%, но менее 100%, и субкультивирование обычно пытается удержать клетки в этом диапазоне. Для субкультуры клетки могут быть отделены одним из нескольких методов, включая трипсин.обработка для расщепления белков, ответственных за поверхностную адгезию, хелатирование ионов кальция с ЭДТА, которое нарушает некоторые механизмы адгезии белков, или механические методы, такие как повторная промывка или использование скребка для клеток. Затем отделенные клетки ресуспендируют в свежей среде для выращивания и дают им возможность снова осесть на их поверхность для роста.

См. Также [ править ]

Трипсинизация

Ссылки [ править ]