Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Как векторы работают для передачи генетического материала

Генная терапия использует доставку ДНК в клетки, что может быть выполнено несколькими методами, кратко изложенными ниже. Двумя основными классами методов являются методы, использующие рекомбинантные вирусы (иногда называемые биологическими наночастицами или вирусными векторами), и методы, в которых используется «голая» ДНК или комплексы ДНК (невирусные методы).

Вирусы [ править ]

Основная статья: Вирусный вектор

Все вирусы связываются со своими хозяевами и вводят свой генетический материал в хозяйскую клетку как часть своего цикла репликации. Этот генетический материал содержит основные «инструкции» о том, как производить больше копий этих вирусов, взламывая нормальные производственные механизмы организма, чтобы удовлетворить потребности вируса. Клетка-хозяин будет выполнять эти инструкции и производить дополнительные копии вируса, что приведет к инфицированию все большего числа клеток. Некоторые типы вирусов вставляют свой геном в цитоплазму хозяина, но фактически не проникают в клетку. Другие проникают через клеточную мембрану под видом белковых молекул и проникают в клетку.

Существует два основных типа вирусной инфекции: литическая и лизогенная . Вскоре после встраивания своей ДНК вирусы литического цикла быстро производят больше вирусов, вырываются из клетки и заражают больше клеток. Лизогенные вирусы интегрируют свою ДНК в ДНК клетки-хозяина и могут жить в организме в течение многих лет, прежде чем сработают триггеры. Вирус размножается так же, как и клетка, и не причиняет телесных повреждений, пока не сработает. Триггер освобождает ДНК от ДНК хозяина и использует ее для создания новых вирусов. [ необходима цитата ]

Ретровирусы [ править ]

Генетический материал ретровирусов находится в форме молекул РНК , а генетический материал их хозяев - в форме ДНК. Когда ретровирус заражает клетку-хозяин, он вводит в клетку свою РНК вместе с некоторыми ферментами, а именно обратной транскриптазой и интегразой . Эта молекула РНК из ретровируса должна произвести копию ДНК из своей молекулы РНК, прежде чем она сможет быть интегрирована в генетический материал клетки-хозяина. Процесс создания копии ДНК из молекулы РНК называется обратной транскрипцией . Это осуществляется одним из ферментов вируса, который называется обратной транскриптазой . После того, как эта копия ДНК произведена и свободна в ядреклетки-хозяина, он должен быть включен в геном клетки-хозяина. То есть он должен быть вставлен в большие молекулы ДНК в клетке (хромосомы). Этот процесс осуществляется другим ферментом, содержащимся в вирусе, который называется интеграза . [ необходима цитата ]

Теперь, когда генетический материал вируса вставлен, можно сказать, что клетка-хозяин была модифицирована, чтобы содержать новые гены. Если эта клетка-хозяин позже разделится, все ее потомки будут содержать новые гены. Иногда гены ретровируса не сразу выражают свою информацию. [ необходима цитата ]

Одна из проблем генной терапии с использованием ретровирусов состоит в том, что фермент интеграза может вставлять генетический материал вируса в любое произвольное положение в геноме хозяина; он случайным образом вставляет генетический материал в хромосому. Если генетический материал окажется в середине одного из исходных генов клетки-хозяина, этот ген будет нарушен ( инсерционный мутагенез ). Если ген является одним из регулирующих деление клеток, может произойти неконтролируемое деление клеток (например, рак ). Эту проблему недавно начали решать путем использования нуклеаз «цинковые пальцы» [1] или путем включения определенных последовательностей, таких как контролирующая область локуса бета-глобина. направить сайт интеграции к определенным хромосомным сайтам.

Испытания генной терапии с использованием ретровирусных векторов для лечения тяжелого комбинированного иммунодефицита, связанного с Х-хромосомой (X-SCID), представляют собой наиболее успешное применение генной терапии на сегодняшний день. Более двадцати пациентов прошли лечение во Франции и Великобритании, при этом наблюдается высокий уровень восстановления иммунной системы. Подобные испытания были ограничены или остановлены в США, когда сообщалось о лейкемии у пациентов, получавших лечение в рамках французского исследования генной терапии X-SCID. [2] На сегодняшний день у четырех детей, участвовавших в исследовании во Франции, и у одного ребенка в исследовании в Великобритании, развился лейкоз в результате инсерционного мутагенеза ретровирусным вектором. Все эти дети, кроме одного, хорошо ответили на обычное противолейкозное лечение. Испытания генной терапии для лечения ТКИН из-за дефицита аденозиндезаминазы (ADA ) (одна из форм SCID) [3] продолжают с относительным успехом в США, Великобритании, Ирландии, Италии и Японии. [ необходима цитата ]

Аденовирусы [ править ]

Аденовирусы - это вирусы, которые несут свой генетический материал в виде двухцепочечной ДНК. Они вызывают респираторные, кишечные и глазные инфекции у человека (особенно простуду). Когда эти вирусы заражают хозяйскую клетку, они вводят в хозяина свою молекулу ДНК. Генетический материал аденовирусов не включен (преходящий) в генетический материал клетки-хозяина. Молекула ДНК остается свободной в ядре клетки-хозяина, и инструкции в этой дополнительной молекуле ДНК транскрибируются, как и любой другой ген. Единственное отличие состоит в том, что эти дополнительные гены не реплицируются, когда клетка приближается к клеточному делению, поэтому у потомков этой клетки не будет дополнительного гена. [ необходима цитата ]

В результате лечение аденовирусом потребует повторного введения в растущую популяцию клеток, хотя отсутствие интеграции в геном клетки-хозяина должно предотвратить тип рака, наблюдаемый в исследованиях SCID. Эта векторная система была продвинута для лечения рака, и действительно, первый продукт генной терапии, лицензированный для лечения рака, Gendicine , представляет собой аденовирус. Гендицина, генная терапия на основе аденовируса p53 , была одобрена китайскими регулирующими органами в области пищевых продуктов и лекарств в 2003 году для лечения рака головы и шеи. Advexin, подобный подход генной терапии от Introgen, был отвергнут США за продуктами и лекарствами (FDA) в 2008 году [ править ]

Обеспокоенность по поводу безопасности аденовирусных векторов возникла после смерти Джесси Гелсингера в 1999 году, когда он участвовал в испытании генной терапии. С тех пор работа с аденовирусными векторами была сосредоточена на генетически поврежденных версиях вируса. [ необходима цитата ]

Псевдотипирование белков оболочки вирусных векторов [ править ]

Описанные выше вирусные векторы имеют естественные популяции клеток-хозяев, которые они инфицируют наиболее эффективно. Ретровирусы имеют ограниченный круг естественных клеток-хозяев, и хотя аденовирус и аденоассоциированный вирус способны эффективно инфицировать относительно более широкий круг клеток, некоторые типы клеток также устойчивы к заражению этими вирусами. Присоединение к восприимчивой клетке и проникновение в нее опосредуется белковой оболочкой на поверхности вируса. Ретровирусы и аденоассоциированные вирусы имеют один белок, покрывающий их мембрану, в то время как аденовирусы покрыты как белком оболочки, так и волокнами, которые отходят от поверхности вируса. В белках оболочки на каждом из этих вирусов связываютсямолекулы клеточной поверхности, такие как сульфат гепарина , который локализует их на поверхности потенциального хозяина, а также со специфическим белковым рецептором, который либо вызывает структурные изменения вирусного белка, способствующие проникновению, либо локализует вирус в эндосомах, в которых происходит подкисление просвет индуцирует эту повторную укладку вирусного пальто . В любом случае проникновение в потенциальные клетки-хозяева требует благоприятного взаимодействия между белком на поверхности вируса и белком на поверхности клетки. [ необходима цитата ]

В целях генной терапии можно либо ограничить, либо расширить диапазон клеток, восприимчивых к трансдукции вектором генной терапии. С этой целью было разработано множество векторов, в которых эндогенные белки оболочки вируса были заменены белками оболочки других вирусов или химерными белками. Такая химера может состоять из тех частей вирусного белка, которые необходимы для включения в вирион, а также из последовательностей, предназначенных для взаимодействия со специфическими белками клетки-хозяина. Вирусы, в которых белки оболочки были заменены, как описано, называются псевдотипными вирусами . Например, наиболее популярным ретровирусным вектором для использования в исследованиях генной терапии был лентивирус вируса иммунодефицита обезьян.покрытые белками оболочки, G-белком , из вируса везикулярного стоматита . Этот вектор называется лентивирусом VSV G-псевдотипа и инфицирует почти универсальный набор клеток. Этот тропизм характерен для G-белка VSV, которым покрыт этот вектор. Было сделано много попыток ограничить тропизм вирусных векторов одной или несколькими популяциями клеток-хозяев. Этот прогресс позволил бы системное введение относительно небольшого количества вектора. Потенциал модификации нецелевых клеток будет ограничен, и многие опасения медицинского сообщества будут сняты. В большинстве попыток ограничить тропизм использовались химерные белки оболочки, несущие антитела.фрагменты. Эти векторы показывают большие перспективы для разработки генной терапии «волшебной пули». [ необходима цитата ]

Компетентные к репликации векторы [ править ]

Компетентный к репликации вектор под названием ONYX-015 используется для репликации опухолевых клеток. Было обнаружено, что в отсутствие вирусного белка E1B-55Kd аденовирус вызывает очень быстрый апоптоз инфицированных клеток p53 (+), что приводит к резкому сокращению потомства вируса и отсутствию последующего распространения. Апоптоз был главным образом результатом способности EIA инактивировать p300. В клетках p53 (-) делеция E1B 55kd не имеет последствий с точки зрения апоптоза, а репликация вируса аналогична репликации вируса дикого типа, что приводит к массовому уничтожению клеток. [ необходима цитата ]

Вектор с дефектом репликации удаляет некоторые важные гены. Эти удаленные гены по-прежнему необходимы в организме, поэтому их заменяют либо вспомогательным вирусом, либо молекулой ДНК. [4]

ЦИС и транс-действующие элементы [ править ]

Векторы с дефектом репликации всегда содержат «конструкцию переноса». Конструкция для переноса несет ген, который должен быть трансдуцирован, или «трансген». Конструкция для переноса также несет последовательности, которые необходимы для общего функционирования вирусного генома: последовательность упаковки, повторы для репликации и, при необходимости, примирование обратной транскрипции. Это названные цис-действующие элементы, потому что они должны находиться на том же участке ДНК, что и вирусный геном и интересующий ген. Транс-действующие элементы - это вирусные элементы, которые могут кодироваться другой молекулой ДНК. Например, вирусные структурные белки могут быть экспрессированы из другого генетического элемента, чем вирусный геном. [4]

Вирус простого герпеса [ править ]

Вирусом простого герпеса является вирус человеческого нейротропные. В основном это исследуется на перенос генов в нервной системе. Вирус HSV-1 дикого типа способен инфицировать нейроны и уклоняться от иммунного ответа хозяина, но все же может реактивироваться и производить литический цикл репликации вируса. Поэтому обычно используют мутантные штаммы HSV-1, которые не обладают способностью к репликации. Хотя латентный вирус не является очевидным с точки зрения транскрипции, он обладает специфическими для нейронами промоторами, которые могут продолжать нормально функционировать. [ требуется дополнительное объяснение ] Антитела к HSV-1 часто встречаются у людей, однако осложнения, вызванные герпетической инфекцией, довольно редки. [5] Следует проявлять осторожность в редких случаях энцефалита, и это дает некоторое обоснование для использования HSV-2 в качестве вирусного вектора, поскольку он обычно имеет тропизм для нейронных клеток, иннервирующих урогенитальную область тела, и может затем избавить хозяина от тяжелой патологии в головном мозге. . [ необходима цитата ]

Невирусные методы [ править ]

Невирусные методы имеют определенные преимущества по сравнению с вирусными методами: простое крупномасштабное производство и низкая иммуногенность хозяина - всего два. Ранее низкие уровни трансфекции и экспрессии гена ставили невирусные методы в невыгодное положение; однако недавние достижения в области векторной технологии позволили получить молекулы и методы с эффективностью трансфекции, аналогичной эффективности вирусов. [6]

Инъекция голой ДНК [ править ]

Это простейший метод невирусной трансфекции. Клинические испытания внутримышечной инъекции плазмиды « голой» ДНК прошли с некоторым успехом; однако экспрессия была очень низкой по сравнению с другими методами трансфекции. В дополнение к испытаниям с плазмидами, были испытания с «голым» продуктом ПЦР , которые имели аналогичный или больший успех. Поглощение голой ДНК клетками обычно неэффективно. Исследовательские усилия, направленные на повышение эффективности поглощения голой ДНК, привели к появлению нескольких новых методов, таких как электропорация , сонопорация и использование « генной пушки », которая выстреливает покрытые ДНК частицы золота в клетку с использованием газа под высоким давлением. [7]

Физические методы для улучшения доставки [ править ]

Электропорация [ править ]

Электропорация - это метод, который использует короткие импульсы высокого напряжения для переноса ДНК через клеточную мембрану. Считается, что этот шок вызывает временное образование пор в клеточной мембране, позволяя молекулам ДНК проходить сквозь них. Электропорация обычно эффективна и работает с широким спектром типов клеток. Однако высокая скорость гибели клеток после электропорации ограничивает его использование, в том числе в клинических условиях.

Совсем недавно новый метод электропорации, названный электронно-лавинной трансфекцией, был использован в экспериментах по генной терапии. Используя высоковольтный плазменный разряд, ДНК эффективно доставлялась после очень коротких (микросекундных) импульсов. По сравнению с электропорацией этот метод привел к значительному повышению эффективности и меньшему повреждению клеток.

Генная пушка [ править ]

Использование бомбардировки частицами или генной пушки - еще один физический метод трансфекции ДНК. В этой технике, ДНК наносят на частицы золота и загружают в устройство , которое генерирует силу для достижения проникновения ДНК в клетки, в результате чего золота позади на «остановку» диск.

Sonoporation [ править ]

Сонопорация использует ультразвуковые частоты для доставки ДНК в клетки. Считается, что процесс акустической кавитации разрушает клеточную мембрану и позволяет ДНК перемещаться в клетки.

Магнитофекция [ править ]

В методе, называемом магнитофекцией , ДНК образует комплекс с магнитными частицами, и магнит помещают под чашку для культивирования ткани, чтобы привести комплексы ДНК в контакт с монослоем клеток.

Гидродинамическая доставка [ править ]

Гидродинамическая доставка включает быструю инъекцию большого объема раствора в сосудистую сеть (например, в нижнюю полую вену , желчный проток или хвостовую вену ). Раствор содержит молекулы, которые должны быть вставлены в клетки, такие как плазмиды ДНК или миРНК , и переносу этих молекул в клетки способствует повышенное гидростатическое давление, вызванное большим объемом вводимого раствора. [8] [9] [10]

Химические методы для улучшения доставки [ править ]

Олигонуклеотиды [ править ]

Использование синтетических олигонуклеотидов в генной терапии предназначено для деактивации генов, участвующих в болезненном процессе. Это достигается несколькими способами. Одна из стратегий использует антисмысловую специфичность для целевого гена, чтобы нарушить транскрипцию дефектного гена. Другой использует небольшие молекулы РНК, называемые миРНК, чтобы сигнализировать клетке о расщеплении определенных уникальных последовательностей в мРНК.транскрипт дефектного гена, нарушающий трансляцию дефектной мРНК и, следовательно, экспрессию гена. Еще одна стратегия использует двухцепочечные олигодезоксинуклеотиды в качестве приманки для факторов транскрипции, которые необходимы для активации транскрипции целевого гена. Факторы транскрипции связываются с ловушками вместо промотора дефектного гена, что снижает транскрипцию целевого гена, снижая экспрессию. Кроме того, олигонуклеотиды одноцепочечной ДНК используются для управления изменением одного основания в мутантном гене. Олигонуклеотид предназначен для отжига с комплементарностью целевому гену, за исключением центрального основания, целевого основания, которое служит основой-матрицей для репарации. Этот метод называется репарацией генов, опосредованной олигонуклеотидами, целенаправленной репарацией генов,

Липоплекс [ править ]

Чтобы улучшить доставку новой ДНК в клетку, ДНК должна быть защищена от повреждений и иметь положительный заряд. Первоначально для конструирования липоплексов синтетических векторов использовали анионные и нейтральные липиды. Однако, несмотря на тот факт, что с ними связана небольшая токсичность, что они совместимы с жидкостями организма и что существует возможность адаптации их к тканеспецифичности; они сложны и требуют много времени для производства, поэтому внимание было обращено на катионные версии.

Катионные липиды из-за их положительного заряда были впервые использованы для конденсации отрицательно заряженных молекул ДНК, чтобы облегчить инкапсуляцию ДНК в липосомы. Позже было обнаружено, что использование катионных липидов значительно увеличивает стабильность липоплексов. Также в результате своего заряда катионные липосомы взаимодействуют с клеточной мембраной, эндоцитозшироко считается основным путем захвата липоплексов клетками. Эндосомы образуются в результате эндоцитоза, однако, если гены не могут быть выпущены в цитоплазму путем разрушения мембраны эндосомы, они будут отправлены в лизосомы, где вся ДНК будет разрушена, прежде чем они смогут выполнить свои функции. Было также обнаружено, что, хотя сами катионные липиды могут конденсировать и инкапсулировать ДНК в липосомы, эффективность трансфекции очень низкая из-за отсутствия способности к «эндосомному ускользанию». Однако при добавлении вспомогательных липидов (обычно электронейтральных липидов, таких как ДОФЭ) для образования липоплексов наблюдалась гораздо более высокая эффективность трансфекции. Позже было выяснено, что определенные липиды обладают способностью дестабилизировать эндосомные мембраны, чтобы облегчить выход ДНК из эндосомы, поэтому эти липиды называются фузогенными липидами. Хотя катионные липосомы широко использовались в качестве альтернативы векторам доставки генов, наблюдалась также дозозависимая токсичность катионных липидов, которая могла ограничивать их терапевтическое применение.[11]

Чаще всего липоплексы используются для переноса генов в раковые клетки, где поставленные гены активируют гены контроля опухолевых супрессоров в клетке и снижают активность онкогенов. Недавние исследования показали, что липоплексы полезны для трансфекции клеток респираторного эпителия .

Полимерсомы [ править ]

Полимерсомы - это синтетические версии липосом ( везикулы с липидным бислоем ), состоящие из амфифильных блок-сополимеров . Они могут инкапсулировать либо гидрофильное, либо гидрофобное содержимое и могут использоваться для доставки в клетки груза, такого как ДНК, белки или лекарства. Преимущества полимерсом перед липосомами включают большую стабильность, механическую прочность, время циркуляции крови и емкость хранения. [12] [13] [14]

Полиплексы [ править ]

Комплексы полимеров с ДНК называются полиплексами. [15] Большинство полиплексов состоят из катионных полимеров, и их производство основано на самосборке за счет ионных взаимодействий. Одно важное различие между методами действия полиплексов и липоплексов состоит в том, что полиплексы не могут напрямую высвобождать свою ДНК-нагрузку в цитоплазму. В результате требуется котрансфекция эндосомолитическими агентами, такими как инактивированный аденовирус, для облегчения выхода наночастиц из эндоцитарной везикулы, образующейся во время поглощения частиц. Однако лучшее понимание механизмов, с помощью которых ДНК может ускользать от эндолизосомного пути, то есть эффекта протонной губки, [16]инициировал новые стратегии синтеза полимеров, такие как включение протонных остатков в основную цепь полимера, и возродил исследования систем на основе поликатионов. [17]

Благодаря низкой токсичности, высокой нагрузочной способности и простоте изготовления поликатионные наноносители демонстрируют большие перспективы по сравнению со своими конкурентами, такими как вирусные векторы, которые демонстрируют высокую иммуногенность и потенциальную канцерогенность, и векторы на основе липидов, которые вызывают токсичность в зависимости от дозы. Полиэтиленимин [18] и хитозан являются одними из полимерных носителей, которые широко исследовались для разработки терапевтических средств для доставки генов. Другие поликатионные носители, такие как поли (бета-аминоэфиры) [19] и полифосфорамидат [20]добавляются в библиотеку потенциальных носителей генов. В дополнение к разнообразию полимеров и сополимеров, легкость управления размером, формой, химией поверхности этих полимерных наноносителей дает им преимущество в способности нацеливания и использования преимуществ повышенной проницаемости и удерживающего эффекта. [21]

Дендримеры [ править ]

Дендример представляет собой сильно разветвленные макромолекулы со сферической формой. Поверхность частицы может быть функционализирована многими способами, и многие свойства полученной конструкции определяются ее поверхностью.

В частности, можно сконструировать катионный дендример, то есть дендример с положительным поверхностным зарядом. В присутствии генетического материала, такого как ДНК или РНК, зарядовая комплементарность приводит к временной ассоциации нуклеиновой кислоты с катионным дендримером. Достигнув своего места назначения, комплекс дендример-нуклеиновая кислота затем попадает в клетку посредством эндоцитоза.

В последние годы эталоном для агентов трансфекции являются катионные липиды. Сообщалось, что к ограничениям этих конкурирующих реагентов относятся: отсутствие способности трансфицировать некоторые типы клеток, отсутствие надежных возможностей активного нацеливания, несовместимость с моделями на животных и токсичность. Дендримеры предлагают прочную ковалентную конструкцию и полный контроль над структурой молекулы и, следовательно, размером. Вместе они дают убедительные преимущества по сравнению с существующими подходами.

Производство дендримеров исторически было медленным и дорогим процессом, состоящим из множества медленных реакций, что серьезно ограничивало их коммерческое развитие. Компания Dendritic Nanotechnologies из Мичигана открыла метод производства дендримеров с использованием кинетической химии, процесса, который не только снизил стоимость в три раза, но и сократил время реакции с месяца до нескольких дней. Эти новые дендримеры «Priostar» могут быть специально сконструированы так, чтобы нести полезную нагрузку ДНК или РНК, которая трансфицирует клетки с высокой эффективностью с небольшой токсичностью или без нее. [ необходима цитата ]

Неорганические наночастицы [ править ]

Было показано, что неорганические наночастицы, такие как золото , диоксид кремния , оксид железа (например, магнитофекция ) и фосфаты кальция , способны доставлять гены. [22] Некоторые из преимуществ неорганических векторов заключаются в их стабильности при хранении, низкой стоимости производства и часто во времени, низкой иммуногенности и устойчивости к микробным атакам. Было показано, что наноразмерные материалы размером менее 100 нм эффективно улавливают ДНК или РНК и позволяют им ускользать из эндосомы без разрушения. Также было показано, что неорганические вещества демонстрируют улучшенную трансфекцию in vitro.для прикрепленных клеточных линий из-за их повышенной плотности и предпочтительного расположения на дне культуральной чашки. Квантовые точки также успешно используются и позволяют сочетать генную терапию со стабильным маркером флуоресценции. Разработанные органические наночастицы также находятся в стадии разработки, которые могут быть использованы для совместной доставки генов и терапевтических агентов. [23]

Проникающие в клетки пептиды [ править ]

Проникающие в клетку пептиды (CPP), также известные как домены пептидной трансдукции (PTD), представляют собой короткие пептиды (<40 аминокислот), которые эффективно проходят через клеточные мембраны, будучи ковалентно или нековалентно связанными с различными молекулами, тем самым облегчая работу этих молекул. вход в камеры. Проникновение клеток происходит в основном за счет эндоцитоза, но существуют и другие механизмы входа. Примеры молекул-грузов CPP включают нуклеиновые кислоты , липосомы и лекарственные средства с низкой молекулярной массой. [24] [25]

Груз CPP может быть направлен в специфические клеточные органеллы путем включения последовательностей локализации в последовательности CPP. Например, последовательности ядерной локализации обычно используются для направления груза CPP в ядро. [26] Для наведения в митохондрии можно использовать митохондриальную нацеливающую последовательность ; этот метод используется в протофекции (метод, позволяющий встраивать чужеродную митохондриальную ДНК в митохондрии клеток). [27] [28]

Гибридные методы [ править ]

Из-за того, что каждый метод переноса генов имеет недостатки, было разработано несколько гибридных методов, которые объединяют два или более методов. Виросомы - один из примеров; они сочетают липосомы с инактивированным вирусом ВИЧ или гриппа . Было показано, что это обеспечивает более эффективный перенос генов в респираторных эпителиальных клетках, чем только вирусные или липосомные методы. Другие методы включают смешивание других вирусных векторов с катионными липидами или гибридизацию вирусов . [29]

См. Также [ править ]

  • Геносома (липоплекс)
  • Методы генной инженерии
  • Трансформация
  • Трансфекция
  • Трансдукция

Ссылки [ править ]

  1. ^ Durai S, мани М, Kandavelou К, Ву Дж, Porteus МН, Chandrasegaran S (2005). «Нуклеазы цинковых пальцев: специально разработанные молекулярные ножницы для геномной инженерии клеток растений и млекопитающих» . Исследования нуклеиновых кислот . 33 (18): 5978–90. DOI : 10.1093 / NAR / gki912 . PMC  1270952 . PMID  16251401 .
  2. ^ Hacein-бей-Abina, S (июль 2010). «Эффективность генной терапии Х-сцепленного тяжелого комбинированного иммунодефицита» . Медицинский журнал Новой Англии . 363 (4): 355–364. DOI : 10.1056 / NEJMoa1000164 . PMC 2957288 . PMID 20660403 - через Pub Med.  
  3. ^ "О SCID - отсутствующих системах защиты тела" . Сайт тяжелого иммунодефицита .
  4. ^ а б «Процесс генной терапии». Альтернативное лечение. 8 мая 2006 г. Альтернативная медицина, Интернет. 23 ноября 2009 г. [ недостоверный медицинский источник? ]
  5. ^ Харвуд AJ (1994). Протоколы для анализа генов. 1-й. 31 . 31 . Тотова, Нью-Джерси: Humana Press. DOI : 10.1385 / 0896032582 . ISBN 978-0-89603-258-3.
  6. ^ Мураками T, Сунады Y (декабрь 2011). «Генная терапия плазмидной ДНК с помощью электропорации: принципы и последние достижения». Современная генная терапия . 11 (6): 447–56. DOI : 10.2174 / 156652311798192860 . PMID 22023474 . 
  7. ^ https://www.scribd.com/doc/16368929/Genes-and-DNA-A-Beginners-Guide-to-Genetics-and-Its-Applications [ требуется полная ссылка ]
  8. ^ Bonamassa B, Хай L, Лю D (апрель 2011). «Гидродинамическая доставка генов и ее применение в фармацевтических исследованиях» . Фармацевтические исследования . 28 (4): 694–701. DOI : 10.1007 / s11095-010-0338-9 . PMC 3064722 . PMID 21191634 .  
  9. Перейти ↑ Suda T, Liu D (декабрь 2007 г.). «Гидродинамическая доставка генов: ее принципы и приложения» . Молекулярная терапия . 15 (12): 2063–9. DOI : 10.1038 / sj.mt.6300314 . PMID 17912237 . 
  10. ^ Аль-Досари М. С., Кнапп JE, Лю D (2005). «Гидродинамическая доставка» . Невирусные векторы для генной терапии . Успехи в генетике. 54 (Издание второе: Часть 2 изд.). С. 65–82. DOI : 10.1016 / S0065-2660 (05) 54004-5 . ISBN 978-0-12-017654-0. PMID  16096008 .
  11. ^ Елена Хункера; Эмилио Айкарт (26 июля 2015 г.). «Недавний прогресс в генной терапии для доставки нуклеиновых кислот с помощью поливалентных катионных векторов». Достижения в коллоидной и интерфейсной науке . 233 : 161–175. DOI : 10.1016 / J.CIS.2015.07.003 . ISSN 0001-8686 . PMID 26265376 . Викиданные Q38565053 .   
  12. ^ Кришнамурти В, Каранам В, Chellan В. Р., Siram К, Натараян TS, Грегори М (июль 2014). «Полимерсомы как эффективная система доставки лекарств от глиомы - обзор». Журнал нацеливания на лекарства . 22 (6): 469–77. DOI : 10.3109 / 1061186X.2014.916712 . PMID 24830300 . 
  13. ^ Chandrawati R, Caruso F (октябрь 2012). «Биомиметические мультикомпартментные сборки на основе липосом и полимерсом» . Ленгмюра . 28 (39): 13798–807. DOI : 10.1021 / la301958v . PMID 22831559 . 
  14. ^ Инь H, Kanasty RL, Eltoukhy AA, Vegas AJ, Доркин JR, Андерсон DG (август 2014). «Невирусные векторы для генной терапии». Обзоры природы. Генетика . 15 (8): 541–55. DOI : 10.1038 / nrg3763 . PMID 25022906 . 
  15. ^ Елена Хункера; Эмилио Айкарт (26 июля 2015 г.). «Недавний прогресс в генной терапии для доставки нуклеиновых кислот с помощью поливалентных катионных векторов». Достижения в коллоидной и интерфейсной науке . 233 : 161–175. DOI : 10.1016 / J.CIS.2015.07.003 . ISSN 0001-8686 . PMID 26265376 . Викиданные Q38565053 .   
  16. ^ Akinc A, Thomas M, Клибаны AM, Langer R (май 2005). «Изучение полиэтиленимин-опосредованной трансфекции ДНК и гипотезы протонной губки». Журнал генной медицины . 7 (5): 657–63. DOI : 10.1002 / jgm.696 . PMID 15543529 . 
  17. ^ Tiera MJ, Ши Q, Winnik FM, Fernandes JC (август 2011). «Генная терапия на основе поликатиона: современные знания и новые перспективы». Современная генная терапия . 11 (4): 288–306. DOI : 10.2174 / 156652311796150408 . PMID 21453278 . 
  18. ^ Nimesh S (май 2012). «Полиэтиленимин как перспективный вектор для направленной доставки миРНК». Современная клиническая фармакология . 7 (2): 121–30. DOI : 10.2174 / 157488412800228857 . PMID 22432843 . 
  19. ^ Kozielski KL, Tzeng SY, Green JJ (июнь 2013). «Биовосстановленный линейный поли (β-аминоэфир) для доставки миРНК» . Химические коммуникации . 49 (46): 5319–21. DOI : 10.1039 / c3cc40718g . PMC 3894248 . PMID 23646347 .  
  20. ↑ Jiang X, Qu W, Pan D, Ren Y, Williford JM, Cui H, Luijten E, Mao HQ (январь 2013 г.). «Плазмидный контроль формы наночастиц конденсированного блок-сополимера ДНК» . Современные материалы . 25 (2): 227–32. DOI : 10.1002 / adma.201202932 . PMC 3918481 . PMID 23055399 .  
  21. Перейти ↑ Matsumura Y, Maeda H (декабрь 1986). «Новая концепция макромолекулярной терапии в химиотерапии рака: механизм туморитропного накопления белков и противоопухолевые средства» . Исследования рака . 46 (12 Pt 1): 6387–92. PMID 2946403 . 
  22. ↑ Wagner DE, Bhaduri SB (февраль 2012 г.). «Прогресс и перспективы неорганических наночастиц для доставки последовательностей нуклеиновых кислот, связанных с ортопедическими патологиями: обзор». Тканевая инженерия, часть B: обзоры . 18 (1): 1–14. DOI : 10,1089 / ten.TEB.2011.0081 . PMID 21707439 . 
  23. ^ Сингх Б.Н., Гупта В.К., Чен Дж., Атанасов А.Г. (декабрь 2017 г.). «Комбинаторные подходы на основе органических наночастиц для генной терапии». Тенденции в биотехнологии . 35 (12): 1121–1124. DOI : 10.1016 / j.tibtech.2017.07.010 . PMID 28818304 . 
  24. ^ Copolovici DM, Langel K, E Eriste, Langel Ü (март 2014). «Проникающие в клетки пептиды: дизайн, синтез и применение». САУ Нано . 8 (3): 1972–94. DOI : 10.1021 / nn4057269 . PMID 24559246 . 
  25. ^ Палм-Apergi C, Lönn P, Dowdy SF (апрель 2012). «Действительно ли проникающие в клетки пептиды« проникают »через клеточные мембраны?» . Молекулярная терапия . 20 (4): 695–7. DOI : 10.1038 / mt.2012.40 . PMC 3322330 . PMID 22472979 .  
  26. ^ Reissmann S (октябрь 2014). «Проникновение в клетки: объем и ограничения при применении проникающих в клетки пептидов». Журнал пептидной науки . 20 (10): 760–84. DOI : 10.1002 / psc.2672 . PMID 25112216 . 
  27. ^ Милешина D, Ibrahim N, P Бош, Lightowlers RN, Dietrich A, Weber-Лютфи F (август 2011). «Митохондриальная трансфекция для изучения репарации органеллярной ДНК, поддержания генома и старения». Механизмы старения и развития . 132 (8–9): 412–23. DOI : 10.1016 / j.mad.2011.05.002 . PMID 21645537 . 
  28. ↑ Yoon YG, Koob MD, Yoo YH (июнь 2010 г.). «Реинжиниринг митохондриальных геномов в клетках млекопитающих» . Анатомия и клеточная биология . 43 (2): 97–109. DOI : 10,5115 / acb.2010.43.2.97 . PMC 2998782 . PMID 21189990 .  
  29. ^ Сян; и другие. (2017). «Эффективный терапевтический перенос генов с помощью инактивированных ретровирусных векторов: краткое изложение подходов и текущий обзор литературы». Журнал терапевтических биомолекулярных исследований . 18 (14): 288–311.