Далеко вестерн - блот , или далеко вестерн - блоттинга , представляет собой молекулярный биологический метод , основанный на технике вестерн - блоттинга для выявления белок-белковых взаимодействий в пробирке . [1] [2] В то время как вестерн- блот использует зонд на основе антител для обнаружения представляющего интерес белка, дальний вестерн-блот использует зонд, не связанный с антителами, который может связывать интересующий белок. Таким образом, в то время как вестерн-блоттинг используется для обнаружения определенных белков, дальний вестерн-блоттинг используется для обнаружения взаимодействий белок / белок.
Методика
При обычном вестерн-блоттинге гель-электрофорез используется для отделения белков от образца; эти белки затем переносятся на мембрану на стадии «блоттинга». Затем при вестерн-блоттинге специфические белки идентифицируются с помощью зонда на основе антител .
Фар-вестерн-блот использует белки, не являющиеся антителами, для исследования интересующих белков на блоте. Таким образом могут быть идентифицированы партнеры связывания зонда (или блотированного) белка. Зондовый белок часто продуцируется в E. coli с использованием вектора клонирования экспрессии .
Затем зондовый белок можно визуализировать обычными методами - он может быть помечен радиоактивной меткой; он может нести специфическую аффинную метку, такую как His или FLAG, для которой существуют антитела; или может быть антитело, специфичное к белку (к белку зонда).
Поскольку клеточные экстракты обычно полностью денатурируют кипячением в детергенте перед гель-электрофорезом , этот подход наиболее полезен для обнаружения взаимодействий, которые не требуют естественной складчатой структуры интересующего белка.
Рекомендации
- ^ Холл, Рэнди А. (2004). «Изучение белок-белковых взаимодействий с помощью блоттинга или дальнего вестерн-блоттинга». Белковые взаимодействия . Методы молекулярной биологии . 261 . С. 167–174. CiteSeerX 10.1.1.380.553 . DOI : 10.1385 / 1-59259-762-9: 167 . ISBN 978-1-59259-762-8. PMID 15064457 .
- ^ Мачида, Казуя; Майер, Брюс Дж. (2009). «Обнаружение белок-белковых взаимодействий методом дальневосточного блоттинга». Блоттинг и обнаружение белков . Методы молекулярной биологии. 536 . С. 313–329. DOI : 10.1007 / 978-1-59745-542-8_34 . ISBN 978-1-934115-73-2. ISSN 1064-3745 . PMID 19378071 .
Внешние ссылки
- Дальний вестерн + блоттинг по медицинским предметным рубрикам Национальной медицинской библиотеки США (MeSH)
- Обзор на сайте piercenet.com
- Обзор на utoronto.ca