Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Не путать с Западным блоком .
Вестерн-блоттинг с использованием антитела , распознающего белки, модифицированные липоевой кислотой

Вестерн - блот (иногда называемый иммуноблот белок ), или вестерн - блоттинга , является широко используемым аналитическим методом в области молекулярной биологии и иммуногенетики для определения специфических белков в образце гомогената ткани или экстракта.

Вкратце, образец подвергается денатурации белка с последующим гель-электрофорезом . Создается синтетическое антитело или антитело животного происхождения (известное как первичное антитело ), которое распознает и связывается с конкретным целевым белком. Мембрана для электрофореза промывается раствором, содержащим первичное антитело, перед тем, как смыть избыток антител. Добавляется вторичное антитело, которое распознает первичное антитело и связывается с ним. Вторичное антитело визуализируется с помощью различных методов, таких как окрашивание , иммунофлуоресценция и радиоактивность, что позволяет косвенно определять конкретный целевой белок.

Другие связанные методы включают дот-блот- анализ, количественный дот-блоттинг , иммуногистохимию и иммуноцитохимию , где антитела используются для обнаружения белков в тканях и клетках путем иммуноокрашивания , а также иммуноферментный анализ (ELISA).

Название « вестерн-блот» - это игра саузерн-блоттинга , метода обнаружения ДНК, названного в честь его изобретателя, английского биолога Эдвина Саузерна . Точно так же обнаружение РНК называется нозерн-блоттингом . [1] Термин «вестерн-блоттинг» был дан В. Нилом Бернеттом в 1981 году [2], хотя сам метод возник в 1979 году в лаборатории Гарри Тобина в Институте Фридриха Мишера в Базеле , Швейцария . [3] В период с 1979 по 2019 год "он упоминался в заголовках, рефератах и ​​ключевых словах более 400 000 PubMed.опубликованных в списке публикаций »и, возможно, по-прежнему является наиболее часто используемым методом анализа белков. [4]

Приложения [ править ]

Вестерн-блоттинг широко используется в биохимии для качественного обнаружения отдельных белков и модификаций белков (например, посттрансляционных модификаций ). По оценкам, не менее 8-9% всех публикаций, связанных с белками, используют вестерн-блоттинг. [4] Он используется в качестве общего метода для определения присутствия конкретного отдельного белка в сложной смеси белков. Полуколичественная оценка белка может быть получена по размеру и интенсивности цвета полосы белка на мембране блота. Кроме того, для более точной оценки концентрации белка можно использовать серию разведений очищенного белка с известными концентрациями. Вестерн-блот обычно используется для проверкипродукция белка после клонирования . Он также используется в медицинской диагностике, например, в тесте на ВИЧ или BSE- тесте .

Подтверждающий тест на ВИЧ использует вестерн-блоттинг для обнаружения антител к ВИЧ в образце сыворотки крови человека . Белки из известных ВИЧ- инфицированных клеток отделяются и наносятся на мембрану, как указано выше. Затем на стадии инкубации первичных антител наносят тестируемую сыворотку; свободное антитело смывается и добавляется вторичное антитело против человека, связанное с сигналом фермента. Окрашенные полосы затем указывают на белки, к которым сыворотка пациента содержит антитела. [5] Вестерн-блоттинг также используется в качестве окончательного теста для варианта болезни Крейтцфельдта-Якоба , типа прионной болезни, связанной с употреблением зараженной говядины крупного рогатого скота с губчатой ​​энцефалопатией крупного рогатого скота.(BSE, обычно называемое «коровьим бешенством»). [6]

Еще одно применение - диагностика туляремии. Оценка способности вестерн-блоттинга обнаруживать антитела против F. tularensis показала, что его чувствительность составляет почти 100%, а специфичность - 99,6%. [7]

В некоторых формах тестирования на болезнь Лайма используется вестерн-блоттинг. [8] Вестерн-блоттинг также может использоваться в качестве подтверждающего теста на инфекцию гепатита B и инфекцию HSV-2 (герпес 2 типа). [9] [10] В ветеринарии иногда используется вестерн-блоттинг для подтверждения статуса FIV + у кошек. [11]

Другие применения метода вестерн-блоттинга включают его использование Всемирным антидопинговым агентством (WADA) . Кровяной допинг - это неправильное использование определенных методов и / или веществ для увеличения массы красных кровяных телец, что позволяет телу транспортировать больше кислорода к мышцам и, следовательно, повышать выносливость и работоспособность. Для допинга крови используются три широко известных вещества или метода, а именно, эритропоэтин (ЭПО), синтетические переносчики кислорода и переливание крови. Каждый из них запрещен Списком запрещенных веществ и методов ВАДА. Метод вестерн-блоттинга использовался во время чемпионата мира по футболу 2014 года в рамках антидопинговой кампании на этом мероприятии. [12] В общей сложности было собрано и проанализировано более 1000 образцов Reichel, et al. [13]в лаборатории, аккредитованной ВАДА в Лозанне, Швейцария. Недавние исследования с использованием метода вестерн-блоттинга показали улучшенное обнаружение ЭПО в крови и моче на основе новых горизонтальных сборных гелей Velum SAR, оптимизированных для рутинного анализа. [14] С принятием горизонтального SAR-PAGE в сочетании с готовыми гелями Velum SAR на пленочной основе, избирательная способность микродозного нанесения rEPO была значительно увеличена.

Процедура [ править ]

Метод вестерн-блоттинга состоит из гель-электрофореза для разделения нативных белков по трехмерной структуре или денатурированных белков по длине полипептида с последующим электрофоретическим переносом на мембрану (в основном PVDF или нитроцеллюлозу ) и процедуры иммуноокрашивания для визуализации определенный белок на мембране блота. SDS-СТРАНИЦАобычно используется для денатурирующего электрофоретического разделения белков. SDS обычно используется в качестве буфера (а также в геле), чтобы придать всем имеющимся белкам однородный отрицательный заряд, поскольку белки могут быть заряжены положительно, отрицательно или нейтрально. Этот тип электрофореза известен как SDS-PAGE (электрофорез в SDS-полиакриламидном геле). Перед электрофорезом образцы белков часто кипятят, чтобы денатурировать присутствующие белки. Это обеспечивает разделение белков по размеру и предотвращает разрушение образцов протеазами (ферментами, расщепляющими белки). После электрофоретического разделения белки переносятся на мембрану (обычно нитроцеллюлозу или ПВДФ).), где они блокируются молоком (или другими блокирующими агентами) для предотвращения неспецифического связывания антител, а затем окрашиваются антителами, специфичными к целевому белку. [3] [15] Наконец, мембрана будет окрашена вторичным антителом, которое распознает первое окрашивание антителом, которое затем может быть использовано для обнаружения различными методами. Этап гель-электрофореза включен в вестерн-блот-анализ, чтобы решить проблему перекрестной реактивности антител.

Гель-электрофорез [ править ]

Основная статья: Гель-электрофорез

Белки образца разделяют с помощью гель-электрофореза . Разделение белков может осуществляться по изоэлектрической точке (pI), молекулярной массе , электрическому заряду или комбинации этих факторов. Характер разделения зависит от обработки образца и природы геля.

Безусловно, наиболее распространенный тип гель-электрофореза использует полиакриламидные гели и буферы, загруженные додецилсульфатом натрия (SDS). SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле с SDS) поддерживает полипептиды в денатурированном состоянии после их обработки сильными восстанавливающими агентами для удаления вторичной и третичной структуры (например, дисульфидных связей [SS] с сульфгидрильными группами [SH и SH]) и, таким образом, позволяет разделение белков по их молекулярной массе. Отобранные белки покрываются отрицательно заряженным додецилсульфатом натрия, фактически становясь анионными, и мигрируют к положительно заряженному (более высокому напряжению) аноду (обычно имеющему красный провод) через акриламид.сетка из геля. Более мелкие белки быстрее мигрируют через эту сетку, и, таким образом, белки разделяются по размеру (обычно измеряется в килодальтонах, кДа ). Концентрация акриламида определяет разрешение геля - чем больше концентрация акриламида, тем лучше разрешение белков с более низким молекулярным весом. Чем ниже концентрация акриламида, тем лучше разрешение белков с более высокой молекулярной массой. Для большинства блотов белки перемещаются по гелю только в одном измерении.

Образцы загружают в лунки геля. Одна полоса обычно зарезервирована для маркера или лестницы , которая представляет собой коммерчески доступную смесь белков с известной молекулярной массой, обычно окрашенную так, чтобы образовывать видимые цветные полосы. Когда к гелю прикладывается напряжение , белки перемещаются через него с разной скоростью в зависимости от их размера. Эти разные скорости продвижения (разные электрофоретические подвижности ) разделяются на полосы в пределах каждой дорожки . Затем полосы белка можно сравнить с полосами лестницы, что позволяет оценить молекулярную массу белка.

SDS-PAGE электрофорез

Также можно использовать двумерный гель, который распределяет белки из одного образца в двух измерениях. Белки разделяются в соответствии с изоэлектрической точкой (pH, при котором они имеют нейтральный суммарный заряд) в первом измерении и в соответствии с их молекулярной массой во втором измерении.

Перенос [ править ]

Чтобы сделать белки доступными для обнаружения антител, они перемещаются из геля на мембрану, сделанную из нитроцеллюлозы (NC) или поливинилидендифторида (PVDF ). Наиболее часто используемый метод переноса белков называется электроблоттинг . Электроблоттинг использует электрический ток для вытягивания отрицательно заряженных белков из геля к положительно заряженному аноду и в мембрану PVDF или NC. Белки перемещаются изнутри геля на мембрану, сохраняя при этом свою организацию внутри геля. Более старый метод переноса предполагает размещение мембраны поверх геля и стопки фильтровальной бумаги поверх нее. Вся стопка помещается в буферный раствор, который перемещает бумагу вверх накапиллярное действие , приносящее с собой белки. На практике этот метод обычно не используется из-за длительного времени процедуры.

В результате любого процесса переноса белки обнажаются на тонком слое мембраны для обнаружения. Обе разновидности мембраны выбраны из-за их неспецифических свойств связывания с белками (т.е. одинаково хорошо связывает все белки). Связывание с белками основано на гидрофобных взаимодействиях, а также на заряженных взаимодействиях между мембраной и белком. Нитроцеллюлозные мембраны дешевле, чем ПВДФ, но они гораздо более хрупкие и не выдерживают повторных испытаний.

Перенос вестерн-блоттинга

Окрашивание общего белка [ править ]

Окрашивание общего белка позволяет визуализировать общий белок, который был успешно перенесен на мембрану, что позволяет пользователю проверить однородность переноса белка и выполнить последующую нормализацию целевого белка с фактическим количеством белка на дорожке. Нормализация с помощью так называемого «контроля загрузки» была основана на иммуноокрашивании белков домашнего хозяйства в классической процедуре, но в последнее время идет речь о окрашивании общего белка из-за множества преимуществ. [16] Для нормализации вестерн-блоттинга описано не менее семи различных подходов к окрашиванию общего белка: Ponceau S , методы без окрашивания, Sypro Ruby, Epicocconone , Coomassie R-350 , Amido Black иCy5 . [16] Чтобы избежать шума сигнала, окрашивание общего белка должно быть выполнено перед блокированием мембраны. Тем не менее, пост-антитела окрашивания также были описаны. [17]

Блокировка [ править ]

Поскольку мембрана была выбрана из-за ее способности связывать белок и поскольку и антитела, и мишень являются белками, необходимо предпринять шаги для предотвращения взаимодействий между мембраной и антителом, используемым для обнаружения белка-мишени. Блокирование неспецифического связывания достигается путем помещения мембраны в разбавленный раствор белка - обычно 3-5% бычьего сывороточного альбумина (БСА) или обезжиренного сухого молока (оба являются недорогими) в трис-буферном физиологическом растворе (TBS) или I-Block с минутным процентным содержанием (0,1%) моющего средства, такого как Tween 20 или Triton X-100. Хотя обезжиренное сухое молоко является предпочтительным из-за его доступности, необходим соответствующий блокирующий раствор, поскольку не все белки в молоке совместимы со всеми полосами обнаружения. [18] Белок в разбавленном растворе прикрепляется к мембране во всех местах, где не прикреплены целевые белки. Таким образом, когда добавляется антитело, оно не может связываться с мембраной, и поэтому единственным доступным сайтом связывания является конкретный белок-мишень. Это снижает фон в конечном продукте вестерн-блоттинга, что приводит к более четким результатам и исключает ложноположительные результаты.

Инкубация [ править ]

Во время процесса обнаружения мембрана «зондируется» на предмет интересующего белка с помощью модифицированного антитела, связанного с репортерным ферментом; при воздействии подходящего субстрата этот фермент запускает колориметрическую реакцию и производит окраску. По ряду причин это обычно происходит в два этапа, хотя теперь для некоторых приложений доступны одноэтапные методы обнаружения.

Первичное антитело [ править ]

Эти первичные антитела генерируются , когда вид хозяина или культуры клеток иммунной подвергается воздействию белка , представляющего интерес (или его часть). Обычно это часть иммунного ответа, тогда как здесь они собираются и используются в качестве чувствительных и специфических инструментов обнаружения, которые напрямую связывают белок.

После блокирования раствор первичного антитела (обычно от 0,5 до 5 мкг / мл), разведенный в промывочном буфере PBS или TBST, инкубируют с мембраной при осторожном перемешивании обычно в течение часа при комнатной температуре или в течение ночи при 4 ° C. раствор антител инкубируют с мембраной в течение от 30 минут до ночи. Его также можно инкубировать при разных температурах, при этом более низкие температуры связаны с большим связыванием, как специфическим (для целевого белка, «сигнал»), так и неспецифическим («шум»). После инкубации мембрану несколько раз промывают промывочным буфером, чтобы удалить несвязанное первичное антитело и тем самым минимизировать фон. [18] Обычно промывочный буферный раствор состоит из забуференного физиологического раствора с небольшим процентным содержанием детергента, а иногда и из сухого молока или BSA.

Вторичное антитело [ править ]

После промывки мембраны для удаления несвязанного первичного антитела мембрана подвергается воздействию другого антитела, известного как вторичное антитело . Антитела происходят из животных источников (или из культур гибридом животного происхождения ). Вторичное антитело распознает видоспецифичную часть первичного антитела и связывается с ней. Следовательно, вторичное антитело против мышей будет связываться практически с любым мышиным первичным антителом и может называться «антивидовым» антителом (например, антимышиным, антикозьим и т. Д.). Для обнаружения целевого белка вторичное антитело обычно связывают с биотином или репортерным ферментом, таким как щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена.. Это означает, что несколько вторичных антител будут связываться с одним первичным антителом и усиливать сигнал, позволяя обнаруживать белки с гораздо более низкой концентрацией, чем можно было бы увидеть только с помощью SDS-PAGE.

Пероксидаза хрена (HRP) обычно связана со вторичными антителами, что позволяет обнаруживать целевой белок с помощью хемилюминесценции . Хемилюминесцентный субстрат расщепляется HRP, что приводит к возникновению люминесценции . Следовательно, производство люминесценции пропорционально количеству вторичного антитела, конъюгированного с HRP, и, следовательно, косвенно измеряет присутствие целевого белка. Чувствительный лист фотопленки прикладывают к мембране, и воздействие света от реакции создает изображение антител, связанных с пятном. Более дешевый, но менее чувствительный подход использует окрашивание 4-хлорнафтолом с 1% перекисью водорода.; реакция пероксидных радикалов с 4-хлорнафтолом дает темно-пурпурное пятно, которое можно сфотографировать без использования специальной фотопленки.

Связывание вестерн-блоттингом

Как и в случае процедур ELISPOT и ELISA , фермент может быть снабжен молекулой субстрата, которая будет преобразована ферментом в окрашенный продукт реакции, который будет виден на мембране (см. Рисунок ниже с синими полосами).

Другой метод обнаружения вторичных антител использует антитело, связанное с флуорофором в ближней инфракрасной области (NIR). Свет, производимый возбуждением флуоресцентного красителя, является статическим, что делает флуоресцентное обнаружение более точным и точным измерением разницы в сигнале, производимом мечеными антителами, связанными с белками, при вестерн-блоттинге. Белки могут быть точно определены количественно, поскольку сигнал, генерируемый различными количествами белков на мембранах, измеряется в статическом состоянии по сравнению с хемилюминесценцией, при которой свет измеряется в динамическом состоянии. [19]

Третьей альтернативой является использование радиоактивной метки, а не фермента, связанного со вторичным антителом, например, мечение связывающего антитело белка, такого как белок А стафилококка или стрептавидин, радиоактивным изотопом йода. Поскольку другие методы безопаснее, быстрее и дешевле, этот метод сейчас используется редко; однако преимуществом этого подхода является чувствительность визуализации на основе автоматической радиографии, которая позволяет с высокой точностью определять количество белка в сочетании с оптическим программным обеспечением (например, Optiquant).

Один шаг [ править ]

Исторически процесс зондирования проводился в два этапа из-за относительной простоты получения первичных и вторичных антител в отдельных процессах. Это дает исследователям и корпорациям огромные преимущества с точки зрения гибкости, снижения затрат и добавляет этап усиления к процессу обнаружения. Однако, учитывая появление высокопроизводительного анализа белков и более низких пределов обнаружения, возник интерес к разработке одноэтапных зондирующих систем, которые позволили бы процессу происходить быстрее и с меньшим количеством расходных материалов. Для этого требуется зонд-антитело, которое распознает интересующий белок и содержит детектируемую метку, зонды, которые часто доступны для известных белковых меток.. Первичный зонд инкубируется с мембраной таким же образом, как и для первичного антитела в двухэтапном процессе, а затем готов к прямому обнаружению после серии этапов промывки.

Вестерн-блоттинг с использованием системы радиоактивного обнаружения

Обнаружение и визуализация [ править ]

После того, как несвязанные зонды смыты, вестерн-блоттинг готов для обнаружения зондов, которые помечены и связаны с интересующим белком. На практике не все вестерны выявляют белок только в одной полосе мембраны. Приближенные размеры берутся путем сравнения окрашенных полос с полосой маркера или лестницы, загруженной во время электрофореза. Этот процесс обычно повторяется для структурного белка, такого как актин или тубулин, который не должен изменяться между образцами. Количество целевого белка нормализуется по отношению к структурному белку для контроля между группами. Превосходной стратегией является нормализация общего белка, визуализированного с помощью трихлорэтанола [20] [21] или эпикокконона . [22]Эта практика обеспечивает корректировку количества общего белка на мембране в случае ошибок или неполных переносов. (см. нормализация вестерн-блоттинга )

Колориметрическое обнаружение [ править ]

Метод колориметрического обнаружения зависит от инкубации вестерн-блоттинга с субстратом, который реагирует с репортерным ферментом (например, пероксидазой ), связанным с вторичным антителом. Это превращает растворимый краситель в нерастворимую форму другого цвета, которая осаждается рядом с ферментом и тем самым окрашивает мембрану. Затем развитие пятна останавливают смыванием растворимого красителя. Уровни белка оцениваются с помощью денситометрии (насколько интенсивно пятно) или спектрофотометрии .

Хемилюминесцентное обнаружение [ править ]

Методы хемилюминесцентного обнаружения зависят от инкубации вестерн-блоттинга с субстратом, который будет люминесцировать при воздействии репортера на вторичное антитело. Затем свет обнаруживается камерами CCD, которые фиксируют цифровое изображение вестерн-блоттинга или фотопленки. Использование пленки для обнаружения вестерн-блоттинга постепенно исчезает из-за нелинейности изображения (неточная количественная оценка). Изображение анализируется с помощью денситометрии, которая оценивает относительное количество окрашивания белка и количественно оценивает результаты с точки зрения оптической плотности. Новое программное обеспечение позволяет проводить дальнейший анализ данных, например анализ молекулярной массы, если используются соответствующие стандарты.

Хемилюминесцентное обнаружение вестерн-блоттингом

Радиоактивное обнаружение [ править ]

Для радиоактивных меток не требуются ферментные субстраты, они позволяют размещать медицинскую рентгеновскую пленку непосредственно напротив вестерн-блоттинга, который развивается по мере воздействия на метку и создает темные области, соответствующие интересующим полосам белка (см. Изображение над). Важность методов обнаружения радиоактивных веществ снижается из-за их опасного излучения [ необходима цитата ] , поскольку они очень дороги, риски для здоровья и безопасности высоки, а ECL (усиленная хемилюминесценция) представляет собой полезную альтернативу.

Флуоресцентное обнаружение [ править ]

Зонд с флуоресцентной меткой возбуждается светом, и излучение возбуждения затем детектируется фотосенсором, таким как камера CCD, оснащенная соответствующими фильтрами излучения, которая захватывает цифровое изображение вестерн-блоттинга и позволяет проводить дальнейший анализ данных, например анализ молекулярной массы количественный вестерн-блот-анализ. Флуоресценция считается одним из лучших методов количественной оценки, но она менее чувствительна, чем хемилюминесценция. [23]

Вторичное зондирование [ править ]

Одно из основных различий между мембранами из нитроцеллюлозы и PVDF относится к способности каждой поддерживать «отрыв» антител и повторное использование мембраны для последующих зондов антител. Несмотря на то, что существуют хорошо зарекомендовавшие себя протоколы очистки нитроцеллюлозных мембран, более прочный ПВДФ позволяет упростить очистку и использовать повторно до того, как фоновый шум ограничит эксперименты. Другое отличие состоит в том, что, в отличие от нитроцеллюлозы, ПВДФ перед использованием необходимо вымачивать в 95% этаноле, изопропаноле или метаноле. Мембраны из ПВДФ также имеют тенденцию быть более толстыми и более устойчивыми к повреждениям во время использования.

2-мерный гель-электрофорез [ править ]

Основная статья: Двумерный гель-электрофорез

Двумерный SDS-PAGE использует принципы и методы, изложенные выше. 2-D SDS-PAGE, как следует из названия, включает миграцию полипептидов в 2 измерениях. Например, в первом измерении полипептиды разделяются в соответствии с изоэлектрической точкой , а во втором измерении полипептиды разделяются в соответствии с их молекулярной массой.. Изоэлектрическая точка данного белка определяется относительным количеством положительно (например, лизин, аргинин) и отрицательно (например, глутамат, аспартат) заряженных аминокислот, при этом отрицательно заряженные аминокислоты вносят вклад в низкую изоэлектрическую точку, а положительно заряженные аминокислоты вносят свой вклад. до высокой изоэлектрической точки. Образцы также могут быть разделены сначала в невосстанавливающих условиях с использованием SDS-PAGE и в восстанавливающих условиях во втором измерении, которое разрывает дисульфидные связи, удерживающие субъединицы вместе. SDS-PAGE также может быть связан с мочевиной-PAGE для получения 2-мерного геля.

В принципе, этот метод позволяет разделить все клеточные белки на одном большом геле. Основным преимуществом этого метода является то, что он часто различает разные изоформы конкретного белка - например, белок, который был фосфорилирован (путем добавления отрицательно заряженной группы). Разделенные белки можно вырезать из геля и затем проанализировать с помощью масс-спектрометрии , которая определяет их молекулярную массу.

См. Также [ править ]

  • Дальневосточная клякса
  • Дальневосточный блот
  • Восточная клякса
  • Северо-западное пятно
  • Быстрый параллельный протеолиз

Ссылки [ править ]

  1. ^ Alwine Дж, Кемп D, G Старк (1977). «Метод обнаружения специфических РНК в агарозных гелях путем переноса на диазобензилоксиметилбумагу и гибридизации с ДНК-зондами» . Труды Национальной академии наук США . 74 (12): 5350–5354. Bibcode : 1977PNAS ... 74.5350A . DOI : 10.1073 / pnas.74.12.5350 . PMC  431715 . PMID  414220 .
  2. ^ Бернетт WN. (1981). « „ Вестерн - блоттинга“: электрофоретического переноса белков из натрия додецилсульфата-полиакриламидном геле с немодифицированным нитроцеллюлозы и радиографического обнаружения с антителом и радиоиодированных белком А». Аналитическая биохимия . 112 (2): 195–203. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (81) 90281-5 . ISSN 0003-2697 . PMID 6266278 .  
  3. ^ a b Towbin H, Staehelin T, Gordon J (1979). «Электрофоретический перенос белков из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные листы: методика и некоторые применения» . Труды Национальной академии наук США . 76 (9): 4350–54. Bibcode : 1979PNAS ... 76.4350T . DOI : 10.1073 / pnas.76.9.4350 . PMC 411572 . PMID 388439 .  
  4. ^ а б Мориц CP (2020). «40 лет вестерн-блоттингу: тост в день рождения ученых». Журнал протеомики . 212 : 103575. DOI : 10.1016 / j.jprot.2019.103575 . PMID 31706026 . 
  5. ^ Судха, Т; Лакшми, S; Тея, В.Д. (2006). «Вестерн-блот-профиль при ВИЧ-инфекции» . Индийский журнал дерматологии, венерологии и лепрологии . 72 (5). DOI : 10.4103 / 0378-6323.27752 . PMID 17050930 . Дата обращения 6 декабря 2020 . 
  6. ^ Ингроссо, Лоредана; Ветругно, Вито; Кардоне, Франко; Поккиари, Маурицио (01.06.2002). «Молекулярная диагностика трансмиссивных губчатых энцефалопатий». Тенденции в молекулярной медицине . 8 (6): 273–280. DOI : 10.1016 / S1471-4914 (02) 02358-4 . PMID 12067613 . 
  7. ^ SCHMITT, P .; SPLETTSTÖSSER, W .; PORSCH-ÖZCÜRÜMEZ, M .; FINKE, E.-J .; ГРУНОУ, Р. (16 февраля 2005 г.). «Новый скрининговый ELISA и подтверждающий вестерн-блоттинг, полезные для диагностики и эпидемиологических исследований туляремии» . Эпидемиология и инфекция . 133 (4): 759–766. DOI : 10.1017 / s0950268805003742 . ISSN 0950-2688 . PMC 2870305 . PMID 16050523 .   
  8. ^ Арцоб, Харви (1993). «Вестерн-блоттинг как подтверждающий тест на болезнь Лайма» . Канадский журнал инфекционных заболеваний . 4 (2): 115–116. DOI : 10.1155 / 1993/796390 . PMC 3250769 . PMID 22346434 .  
  9. ^ Кастро, Л. Де; Yoshida, CF; Гаспер, AM; Gomes, SA (декабрь 1996 г.). «Вестерн-блоттинг-анализ реактивности между белками оболочки вирусов гепатита B от бразильских носителей и антителами против рекомбинантных вакцин против гепатита B» . Acta Virol . 40 (5–6). PMID 9171452 . Дата обращения 6 декабря 2020 . 
  10. ^ Голден, Мэтью; Эшли-Морроу, Рода; Свенсон, Пол; Hogrefe, Wayne R; Хэндсфилд, Хантер; Уолд, Анна (декабрь 2005 г.). «Подтверждающее тестирование вестерн-блоттинга вируса простого герпеса типа 2 (ВПГ-2) среди мужчин с положительным результатом на ВПГ-2 с использованием фокусного иммуноферментного анализа в клинике заболеваний, передающихся половым путем» . Заболевания, передающиеся половым путем . 32 (12). DOI : 10.1097 / 01.olq.0000175377.88358.f3 . Дата обращения 6 декабря 2020 .
  11. ^ «Тестирование FIV - что использовать» . Кошачья работа . Дата обращения 6 декабря 2020 .
  12. ^ Бауме, Норберт; Ян, Николас; Эмери, Кэролайн; Манданис, Беатрис; Швейцер, Карин; Жиро, Сильвен; Лойенбергер, Николас; Марклай, Франсуа; Николи, Рауль; Перрену, Лоран; Робинсон, Нил; Дворжак, Иржи; Saugy, Martial (2015). «Антидопинговая программа и биологический мониторинг до и во время чемпионата мира по футболу 2014 года в Бразилии» . Британский журнал спортивной медицины . 49 (9): 614–622. DOI : 10.1136 / bjsports-2015-094762 . ISSN 0306-3674 . PMC 4413745 . PMID 25878079 .   
  13. ^ Райхель С, Benetka Вт, Лоренц В, Thevis М (2016). «Оценка антитела против Epo клона AMGEN 9G8A для применения в допинг-контроле». Анальный тест на наркотики . 8 (11–12): 1131–1137. DOI : 10.1002 / dta.2057 . PMID 27552163 . 
  14. ^ https://precisionbiosystems.com/wp-content/uploads/2016/10/Application_Note_Improvements-for-EPO-detection_Schwenke_2015.pdf
  15. ^ Renart J, J Райзер, Stark GR (1979). «Перенос белков из гелей на диазобензилоксиметилбумагу и обнаружение антисыворотками: метод изучения специфичности антител и структуры антигена» . Труды Национальной академии наук США . 76 (7): 3116–20. Bibcode : 1979PNAS ... 76.3116R . DOI : 10.1073 / pnas.76.7.3116 . PMC 383774 . PMID 91164 .  
  16. ^ а б Мориц, CP. (2017-09-20). «Тубулин или не тубулин: движение к общему окрашиванию белка в качестве контроля загрузки в вестерн-блоттинге» (PDF) . Протеомика . 17 (20): 1600189. DOI : 10.1002 / pmic.201600189 . PMID 28941183 .  
  17. ^ Велиндер, Шарлотта; Экблад, Ларс (04.03.2011). «Окрашивание Кумасси как контроль нагрузки в Вестерн-блоттинге». Журнал протеомных исследований . 10 (3): 1416–1419. DOI : 10.1021 / pr1011476 . ISSN 1535-3893 . PMID 21186791 .  
  18. ^ a b Махмуд, Тахрин; Ян, Пин-Чанг (сентябрь 2012 г.). «Вестерн-блоттинг: техника, теория и устранение неполадок» . N Am J Med Sci . 4 (9): 429–434. DOI : 10.4103 / 1947-2714.100998 . PMC 3456489 . PMID 23050259 .  
  19. ^ Амброз К. (2006-09-20). «Повышение точности количественной оценки вестерн-блотов» (PDF) . Анализ изображений .
  20. ^ Stennert, E; Арольд, Р. (1973). «Двойной наружный слуховой проход (авторский перевод)». HNO . 21 (10): 293–6. PMID 4769330 . 
  21. ^ Gilda, JE; Гомес, А.В. (2013). «Окрашивание общего белка без красителей является лучшим контролем нагрузки по сравнению с β-актином для вестерн-блоттинга» . Аналитическая биохимия . 440 (2): 186–8. DOI : 10.1016 / j.ab.2013.05.027 . PMC 3809032 . PMID 23747530 .  
  22. ^ Мориц, КП; Marz, SX; Reiss, R; Шуленборг, Т; Фриауф, Э (2014). «Окрашивание эпикоккононом: мощный контроль загрузки для вестерн-блотов». Протеомика . 14 (2–3): 162–8. DOI : 10.1002 / pmic.201300089 . PMID 24339236 . 
  23. ^ Мэтьюз, Суреш Т .; Plaisance, Эрик П .; Ким, Таюн (2009). "Системы визуализации для вестернов: хемилюминесценция против инфракрасного обнаружения". Блоттинг и обнаружение белков . Методы молекулярной биологии. 536 . Humana Press. С. 499–513. DOI : 10.1007 / 978-1-59745-542-8_51 . ISBN 978-1-934115-73-2. PMID  19378087 .

Внешние ссылки [ править ]

Ресурсы библиотеки о
западном иммуноблоттинге
  • Ресурсы в вашей библиотеке
  • Ресурсы в других библиотеках
  • Ян, Пин-Чанг; Махмуд, Тахрин (2012). «Вестерн-блот: техника, теория и устранение неполадок» . Североамериканский журнал медицинских наук . 4 (9): 429. DOI : 10,4103 / 1947-2714.100998 . ISSN  1947-2714 . PMC  3456489 . PMID  23050259 .
  • «Вестерн-блоттинг» . YouTube . Bio-Rad Laboratories. 16 октября 2012 г.
  • «Методы блоттинга / Принцип вестерн-блоттинга» . YouTube . Биомедицинские и биологические науки. 23 марта 2017.