Первичные и вторичные антитела - это две группы антител , которые классифицируются в зависимости от того, связываются ли они с антигенами или белками напрямую или нацелены на другое (первичное) антитело, которое, в свою очередь, связано с антигеном или белком .
Первичный [ править ]
Первичные антитела могут быть очень полезны для обнаружения биомаркеров таких заболеваний, как рак, диабет, болезнь Паркинсона и Альцгеймера, и они используются для изучения абсорбции, распределения, метаболизма и экскреции (ADME) и множественной лекарственной устойчивости (MDR). ) терапевтических средств.
Вторичный [ править ]
Вторичные антитела обеспечивают обнаружение и амплификацию сигнала наряду с расширением применимости антитела за счет конъюгации с белками. [1] Вторичные антитела особенно эффективны при иммуномаркировании . Вторичные антитела связываются с первичными антителами, которые напрямую связываются с антигеном (ами)-мишенью. При иммуномечении Fab-домен первичного антитела связывается с антигеном и обнажает его Fc-домен.к вторичному антителу. Затем Fab-домен вторичного антитела связывается с Fc-доменом первичного антитела. Поскольку домен Fc является постоянным в пределах одного и того же класса животных, только один тип вторичных антител требуется для связывания со многими типами первичных антител. Это снижает стоимость за счет маркировки только одного типа вторичных антител вместо маркировки различных типов первичных антител. Вторичные антитела помогают повысить чувствительность и усиление сигнала за счет связывания множества вторичных антител с первичным антителом. [2]
Вторичные антитела из цельной молекулы иммуноглобулина являются наиболее часто используемым форматом, но они могут обрабатываться ферментативно, чтобы обеспечить уточнение анализа. Фрагменты F (ab ') 2 образуются путем переваривания пепсином для удаления большей части фрагмента Fc, это позволяет избежать распознавания рецепторами Fc на живых клетках или с белком A или белком G. [3] Переваривание папаином генерирует фрагменты Fab, которые удаляют полный фрагмент Fc, включая шарнирную область, с получением двух моновалентных фрагментов Fab. Их можно использовать для блокирования эндогенных иммуноглобулинов на клетках, тканях или других поверхностях, а также для блокирования экспонированных иммуноглобулинов в нескольких экспериментах по мечению с использованием первичных антител одного и того же вида. [4]
Приложения [ править ]
Вторичные антитела могут быть конъюгированы с ферментами, такими как пероксидаза хрена (HRP) или щелочная фосфатаза (AP); или флуоресцентные красители, такие как флуоресцеинизотиоцианат (FITC), производные родамина , красители Alexa Fluor ; или другие молекулы для использования в различных приложениях. Вторичные антитела используются во многих биохимических анализах [5], включая:
- ELISA , включая множество тестов на ВИЧ
- Вестерн-блоттинг
- Иммуноокрашивание
- Иммуногистохимия
- Иммуноцитохимия
Ссылки [ править ]
- ^ https://ptglab.com/news/blog/secondary-antibody-selection/ Руководство по выбору вторичных антител
- ^ «Вторичные антитела как зонды» . www.thermofisher.com . Проверено 31 мая 2017 .
- ^ «F (ab ') ₂ Фрагмент вторичных антител - Jackson ImmunoResearch» . www.jacksonimmuno.com . Источник 2021-01-29 .
- ^ "Fab-фрагменты вторичных антител - Иммуноисследование Джексона" . www.jacksonimmuno.com . Источник 2021-01-29 .
- ^ «Вторичный обзор антител, основанный на официальных публикациях» . secondary-antibody.com . Архивировано из оригинала на 2008-04-17 . Проверено 16 апреля 2008 .
