- Блот , в области молекулярной биологии и генетики , представляет собой метод переноса белков , ДНК или РНК на носитель (например, нитроцеллюлоза , поливинилиденфторида или нейлоновой мембраны). Во многих случаях это делается после гель-электрофореза , переноса молекул из геля на мембрану для блоттинга , а в других случаях - добавления образцов непосредственно на мембрану. После блоттинга перенесенные белки, ДНК или РНК затем визуализируются окрашиванием красителем (например, окрашиванием белков серебром), авторадиографическим методом.визуализация меченных радиоактивными изотопами молекул (выполняется перед блоттингом) или специфическое мечение некоторых белков или нуклеиновых кислот . Последнее осуществляется с помощью антител или гибридизационных зондов, которые связываются только с некоторыми молекулами блота и имеют присоединенный к ним фермент . После соответствующей промывки, эта ферментативная активность (и так, молекулы мы ищем в блоте) визуализируются путем инкубации с надлежащими реактивным, что делают либо окрашенный осадок на блоте или хемилюминесцентную реакцию , которая регистрируется с помощью фотографической пленки .
Саузерн-блот
Саузерн - блот представляет собой метод обычно используется в молекулярной биологии для обнаружения конкретной ДНК - последовательности в образцах ДНК. Саузерн-блоттинг сочетает перенос разделенных электрофорезом фрагментов ДНК на фильтрующую мембрану и последующее обнаружение фрагментов с помощью гибридизации зонда. [1]
Вестерн-блоттинг
Вестерн - блот используются для обнаружения специфических белков в сложных образцах. Белки сначала разделяются по размеру с помощью электрофореза, а затем переносятся в соответствующую матрицу для блоттинга (обычно поливинилиденфторид или нитроцеллюлозу ) и последующее обнаружение с помощью антител.
Дальневосточный блот
Подобно вестерн-блоттингу , дальний вестерн-блоттинг использует белок-белковые взаимодействия для обнаружения присутствия определенного белка, иммобилизованного на матрице для блоттинга. Затем антитела используются для обнаружения присутствия протеин-белкового комплекса, что делает фар-вестерн-блот частным случаем вестерн-блоттинга.
Юго-западное пятно
Юго - западный Блот основан на саузерне - блоттинге и используется для идентификации и характеристики ДНК-связывающих белков по их способности связываться со специфическими олигонуклеотидными зондами. [2] Белки разделяются с помощью гель-электрофореза и затем переносятся на нитроцеллюлозные мембраны, аналогично другим типам блоттинга.
Восточная клякса
Восточные блота используются для обнаружения специфических посттрансляционных модификаций белков. Белки разделяют с помощью гель-электрофореза перед переносом в матрицу для блоттинга, после чего выявляются посттрансляционные модификации с помощью конкретных субстратов (токсина холеры, конканавалина, фосфомолибдата и т. Д.) Или антител. [3]
Дальневосточная клякса
Дальневосточные блото для выявления липидов связанных олигосахаридов . Высокоэффективная тонкослойная хроматография сначала используется для разделения липидов по физическим и химическим характеристикам, затем переносится на матрицу для блоттинга, прежде чем олигосахариды будут обнаружены специфическим связывающим белком (т. Е. Антителами или лектинами).
Нозерн-блот
Нозерн - блот для детекции специфических последовательностей РНК в сложных образцах. Нозерн-блоттинг сначала разделяет образцы по размеру с помощью гель-электрофореза, прежде чем они будут перенесены в матрицу для блоттинга и обнаружены с помощью меченых РНК-зондов.
Обратное северное пятно
В обратной Нозерн - блот отличается как от северной и саузерн - блоттинга в этой ДНК сначала иммобилизуют на промокательную матрице и специфические последовательности обнаруживаются с использованием меченых РНК - зондов.
Точечный блот
Дот - блот является частным случаем любого из вышеуказанных блотов , где анализируемое вещество добавляет непосредственно к промокательной матрице (и выглядят как «точка») , в отличие от разделения образца с помощью электрофореза перед блоттингом.
Список клякс
Смотрите также
Рекомендации
- ^ Towbin, Штеелин Т, Гордон Дж, и др. (1979). «Электрофоретический перенос белков из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные листы: методика и некоторые применения» . PNAS . 76 (9): 4350–4. Bibcode : 1979PNAS ... 76.4350T . DOI : 10.1073 / pnas.76.9.4350 . PMC 411572 . PMID 388439 .
- ^ Bowen B, Steinberg J, Laemmli UK, Weintraub H (январь 1980 г.). «Обнаружение ДНК-связывающих белков с помощью белкового блоттинга» . Nucleic Acids Res . 8 (1): 1–20. DOI : 10.1093 / nar / 8.1.1 . PMC 327239 . PMID 6243775 .
- ^ Thomas, Thirumalapura N, Crossley EC, Ismail N, Walker DH, et al. (2009). «Модификации антигенных белков у Эрлихии» . Иммунология паразитов . 31 (6): 296–303. DOI : 10.1111 / j.1365-3024.2009.01099.x . PMC 2731653 . PMID 19493209 .